크로톤 오일로 유발시킨 쥐의 직장 염증에 대한 웅담 또는 그 구성 성분의 치유효과 = Therapeutic Effect of Whole Bear Bile and Its Components against Croton Oil-induced Rectal Inflammation in Rats

국문 초록 (Abstract)

웅담은 동양, 특히 중국에서 간 손상이나 염증 치료를 위한 약물로서 많이 처방되어온 약물이다. 최근 수 십 년간 개개의 담즙산에 대한 연구가 많이 진행되어 왔으며 그로 인해 암, 간 손상, 담석증 등에 대한 효과가 입증되었다. 특히 최근의 몇 몇 보고에 의하면 Ursodeoxycholic acid 같은 특정 담즙산의 경우 간과 관련된 질환 뿐 아니라 몸 안의 모든 염증에 효과가 있다는 것이 알려졌다. 이런 담즙산의 항염 효과를 더 알아보기 위해 웅담과 그 주요 구성 담즙산인 Ursodeoxycholic acid (UDCA), Chenodeoxycholic acid (CDCA) 가 크로톤 오일로 인위적으로 유발시킨 쥐의 직장염증에 어떠한 효과가 있는지 알아보았다. 웅담에 함유되어 있는 각각의 UDCA 와 CDCA 는 HPLC 를 이용하여 정량하였다. 쥐의 직장염증의 유발은 크로톤 오일 용액을 적신 면봉을 쥐의 직장에 직접 삽입하는 방법으로 하였다. 항염 효과를 알아보기 위한 약물의 경구투여는 UDCA, CDCA 그리고 웅담을 각각 50 mg/kg 의 용량으로 염증 유발 후 1시간부터 8시간 간격으로 2회 투여하였다. 또한 약물의 국소투여는 웅담을 10 mg/kg 의 용량으로 염증 유발 후 1시간 후에 1회 직장에 액상좌제의 형태로 직접 투여하였다. 약물을 투여한 쥐들은 염증 유발 후 4시간 또는 24시간 후에 평가하였다. 염증상태의 평가는 외관상의 충혈, 직장의 무게, 직장의 두께 그리고 직장 조직의 현미경 사진 으로 평가하였다. 담즙산의 항염효과를 알아보기 위해 In vitro 시험으로 NO assay 도 수행하였다. 사용된 웅담 1mg 에는 UDCA 가 39.26 ㎍/ml, CDCA 가 47.11 ㎍/ml 가 각각 함유되어 있는 것으로 확인 되었다. 웅담의 투여는 경구투여나 국소투여 모두에서 효과적으로 염증을 감소시키는 것으로 확인 되었다. 그에 반에 UDCA 나 CDCA 의 투여는 염증 완화에 효과적이지 않은 것으로 확인 되었다. CDCA 나 UDCA 와 비교했을 때 웅담의 투여는 염증의 진행을 억제하고 염증을 치유하는 효과가 매우 뛰어난 것으로 생각된다. 이는 웅담에 함유된 다른 어떤 물질에 의한 것 이거나 몇몇 물질들의 상호작용에 의한 것으로 생각된다. 활성성분이나 작용 메카니즘의 규명을 위해 이에 대한 많은 연구가 필요하다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Bear biles has been used as therapeutics of cerebral and coronary thrombosis, convulsion, hepatitis, jaundice and abscess in traditional oriental medicine. In recent decades, it was studied many reports about the effects of bile acids on cancer, cholestasis, and liver injury. In this study, we investigated the anti-inflammatory effects of whole bear bile (WBB) and its two major components, CDCA and UDCA on rectal inflammation in rats. Bile acids in WBB was quantitatively analyzed by HPLC method. Rectal inflammation was induced to the male Sprague-Dawley rats by insertion of croton oil-absorbed cotton tips. WBB, UDCA or CDCA was administrated by orally at one hour after induction of rectal inflammation to rats. WBB also was administered by intra-rectal to rats. Rats were sacrificed 4 or 24 hours after induction of rectal inflammation. The evaluation was performed by measurement of weight and thickness of rectum and histopathologic examination of rectal tissue. Furthermore, we examined the inhibition effect of NO production of WBB, UDCA or CDCA in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. The contents of UDCA and CDCA of WBB were 39.26 ㎍/㎎ and 47.11 ㎍/㎎, respectively. WBB treated group significantly reduced the weight and thickness of rectum compared with UDCA or CDCA treated group. The inhibition of NO production of WBB, UDCA and CDCA in LPS-stimulated RAW 264.7 cells was much higher than the control. And WBB treatment suppressed the induction of NO synthase in rectum homogenate. This results suggest that the anti-inflammatory effect of WBB could be related to the combination effect of UDCA, CDCA and other bile acids of WBB by inhibiting suppressed the induction of NO synthase and inhibition of NO production. Further study are need to be performed about other bear bile components and their interactions.

목차 (Table of Contents)

• Ⅰ. Introduction 1
• Ⅱ. Methods 4
• 2-1. Materials 4
• 2-2. Test animals 4
• 2-3. Derivertization of bile acids 4
• 2-4. Quantitative analysis of UDCA and CDCA in WBB by HPLC 5
• 2-5. Induction of rectum inflammation in rats 6
• 2-6. Administration of UDCA, CDCA and WBB 6
• 2-7. Preparation of poloxamer suppository for rectal administration 7
• 2-8. Measurement of gelation temperature 7
• 2-9. Measurement of gel strength 7
• 2-10. Evaluation of rectum inflammation 8
• 2-11. Rectum histology 8
• 2-12. Cell culture 8
• 2-13. NO assay 8
• 2-14. WEstern blot 9
• 2-15. Statistics 9
• Ⅲ. Results 10
• 3-1. Contents of UDCA and CDCA in WBB 10
• 3-2. Induction of rectal inflammation 11
• 3-3. The effect of orally administratd UDCA, CDCA and WBB on rectum inflammation 12
• 3-4. Photographs of rectum 15
• 3-5. Histology of the WBB treated rectum 17
• 3-6. Effect of poloxamer composition on gelation temperature 19
• 3-7. Gel strength of poloxamer gel 21
• 3-8. Intra-rectal administration of poloxamer gel containing WBB and preparation?? 22
• 3-9. Inhibitory effect of WBB, UDCA and CDCA on NO production in LPS-stimulated RAW 264.7 cells 24
• 3-10. Inhibitory effect of WBB on croton oil-induced iNOS production in rectum 26
• Ⅳ. Conclusions 27
• Ⅴ. References 28
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