재설계된 지방세포계를 이용한 새로운 항비만 기능성물질 스크리닝법 개발 및 새로운 유리지방산 수송체 동정법 구축

국문 초록 (Abstract)

Specific Aim 1: 재설계 세포계를 이용한 항비만 기능성물질 스크리닝법 개발. 지방세포 연구에서 일반적으로 사용되는 3T3-L1을 지방세포로 분화시킨 뒤, Dr. Stahl 실험실에서 개발한 형광표지된 유리지방산을 이용하여 지방세포의 유리지방산 배출을 FACS를 이용하여 측정한다. 본 연구에서는 일반 지방세포계 및 분자생물학적 방법으로 재설계된 세포계를 이용하여 새로운 항비만 기능성 신소재 스크리닝법을 개발하고자 한다. 천연물 라이브러리를 이용하여 약 400 여종의 한약재 추출물을 일차적인 스크리닝에 이용하고자 한다..
Specific Aim 2: 백색지방세포로부터 retroviral cDNA library 구축 및 유리지방산 배출 수송체 동정법 확립. 유리지방산 흡수 및 배출정도가 매우 낮은 Swiss 3T3 fibroblast에 유리지방산 배출을 촉진하기 위해 분자적으로 재설계된 세포계를 구축한다. Dr. Stahl 연구실에서는 지방세포계에서 유리지방산 대사에 관여하는 세 가지 주요 단백질인 FATP1, perilipin, hormone sensitive lipase (HSL)를 과발현 시켜 재설계된 fibroblast 세포주를 개발하였다. 본 재설계된 세포주는 cAMP activator 인 forskolin 처리로 지질소적 분해를 통한 유리지방산 생성을 최대화 할 수 있다. 재설계 지방세포계에 유전자를 도입한 후 지방세포 내에 축적된 지질소적 (lipid droplet)의 감소를 측정하는 방법으로 유리지방산 배출 증가를 측정하고 이를 통해 새로운 유리지방산 배출 수송체를 동정하는 실험법을 확립하고자 한다.
본 6개월 연구기간동안 유리지방산 배출 수송체 클로닝을 완결할 수는 없다고 판단되므로 본 연구과제범위는 이를 위한 전단계로서 클로닝을 위한 방법론 확립까지 제한하고자 한다. 유리지방산 배출 수송체 클로닝은 향후 추가 공동 연구를 통해 완결 하고자 한다. 본 과제에서 제안하는 방법을 이용하면 유리지방산 배출 촉진에 관여하는 세포막 유리지방산 수송체 뿐 아니라 이와 관련하여 지질분해과정과 세포외 유리지방산 배출에 관련된 중요한 분자마커를 발견하는 데 응용 할 수 있을 것으로 기대한다. 식품에서 아직 수송기전이 잘 알려져 있지 않은 carotenoids, flavonoids 등을 수송하는 수송체를 발견하는데도 이용 될 수 있을 것으로 생각된다.