비만세포 특이적 프로테아제 mMCP-6 발현 조절에 전사인자 MITF 아형이 미치는 영향 = Alternative isotypes of mi transcription factor (MITF) regulating the transcription of mouse mast cell-specific serine protease (mMCP)-6

국문 초록 (Abstract)

전사인자 MITF (mi transcription factor)는 bHLH-Zip(basic- helix-loop-helix-leucine zipper) 단백질계에 속하는 분자이다. 최근 연구에서 MITF는 비만세포의 분화 및 특이적 단백분해효소들의 전사활성을 조절하는 중요한 전사인자임이 보고되었으며, 세포조직에 따라 다수의 MITF아형이 발현하고 있음이 알려졌다. 본 연구자는 마우스 비만세포에서 발현하는 트립테이즈형 단백분해효소인 mMCP-6의 전사를 조절하는 MITF 아형을 연구하고자 하였다. 이를 위해 마우스 골수세포를 분리하여 IL-3존재 하에서 3주 이상 배양하여 미숙형비만세포를 확립하였으며, 이들을 SCF로 자극하여 피부, 근육 등에서 보이는 결합조직 비만세포로 성숙 및 분화 시킨 후 RT-PCR법을 통해 MITF아형 mRNA발현을 분석하였다. 전사인자 MITF-A, -E, H 및 Mc등의 다양한 mRNA가 배양된 미숙형비만세포에서 강하게 발현함을 관찰하였다. 그러나 분화된 결합조직형비만세포(CTMC)는 단지 전사인자 MITF-A만 발현하고 있음을 관찰하였다. 따라서 이 MITF-A가 mMCP-6 전사 활성을 조절하는지 여부를 확인하기 위해 전사인자 MITF 아형(A, E, Mc, 그리고 M)의 발현 플라스미드, mMCP-6 프로모터가 삽입된 luciferase 그리고 전사인자 MITF anti-sense 발현 플라스미드를 준비하였고, 각각의 전사인자 MITF 아형의 발현 플라스미드는 mMCP-6 프로모터 플라스미드와 함께 NIH3T3 세포에 형질도입 하였다. 이를 통하여 mMCP-6 전사활성이 MITF-A의 형질도입에 의해 의미 있게 증가됨을 확인하였다. 또한 비만세포에서 트립테이즈 합성 및 세포질내의 과립량이 전사인자 MITF-A도입에 의해 유의성 있게 증가하였다. 반면에 이들 합성은 전사인자 MITF anti-sense 도입에 의해서는 감소되었다. 이러한 결과들은 전사인자 MITF-A가 마우스 결합조직 비만세포에서 mMCP-6의 전사조절에 중요한 인자 일 것으로 생각된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

mi transcription factor (MITF) is a member of the basic-helix-loop- helix-leucine zipper (bHLH-Zip) protein family of transcription factors. Recent studies have showed that MITF regulated the expression of mouse mast cell-specific serine protease (mMCP-6). In this study, we investigated alternative isotypes of MITF regulating the transcription of mMCP-6 in mouse mast cells. The expression of MITF isotypes was determined by RT-PCR. I found that MITF-A, -E, -H and -Mc were expressed in cultured mast cells, and MITF-A was expressed highly in connective tissue-type mast cells (CTMC). To examine whether mMCP-6 transcription was influenced by MITF-A expressed in CTMC. I prepared expression plasmids containing cDNA of MITF isotypes (A, E, Mc, and M), mMCP-6 promoter-inserted luciferase, and MITF anti-sense expression plasmid, expression plasmids of each MITF isotype were cotransfected into NIH-3T3 cells with mMCP-6 promoter plasmid. I observed that the level of mMCP-6 transcription was increased significantly by transfection of MITF-A. The tryptase activity also was increased by MITF-A, but decreased by MITF anti-sense. Moreover, the granules were increased after transfection with MITF-A. These results support that MITF-A may be an important factor on regulating the transcription of mMCP-6 in mouse connective tissue mast cells.

목차 (Table of Contents)

• Introduction = 6
• Materials and methods = 9
• Results = 15
• Discussion = 20
• References = 23
• Figures = 28