HeLa 세포에서 p73 과발현과 항암제 처리에 따른 예정사 증가 유도에 대한 연구

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Apoptosis is a major determinant of the effectiveness of antitumor
chemotherapy since most of the drugs used in cancer treatment provoke cell
death by this process. To increase the effectiveness of anticancer
chemotherapy, genes affecting apoptosis (p53, p21, Bax, p16 etc) were being
investigated for their tumor suppressing abilities. Recently, as a member of
p53 family, p73 was cloned, their function and structure were similar to those
of p73. For p53 had abilities to promote apoptosis in cancer cells when
used with chemotherapeutic agents such as CDDP(Cisplatin), doxorubicin so,
in the present studies, the roles of p73 during CDDP, doxorubicin treatment
were investigated. For induction of p73, tetracycline-inducible system and
p53-defective HeLa cells were used. P73-induced by tetracycline could
increased p21 and Bax protein levels and p73-incuced HeLa/p73β cells were
more sensitive than HeLa cells to CDDP and doxorubicin. These increasing
cytotoxicities were correlated with apoptosis confirmed by DNA ladder assay
and PARP cleavage western blotting. But, apoptosis was not proceed via G1
or G2/M arrest after CDDP treatment. The mechanisms for increased
apoptosis were not investigated in this studies but, Hoechst33258 staining
and PARP cleavage western blotting show that apoptosis was much more
high in p73-induced HeLa/p73β cell lines and the time rate was shorter than
HeLa cells during CDDP , doxorubicin treatment. In these results, the
combination of p73β preferentially sensitizes p53-defective HeLa cells to the
cytotoxic effect of CDDP or doxorubicin by a yet undetermined mechanism.

국문 초록 (Abstract)

예정사의 역치(apoptotic threshold)를 변화시키면 항암 치료제에 대한 세포의 민감성에 변화를 주어 암치료의 효율을 높일 수 있다. 항암 치료에 대한 효율 증가를 위하여 예정사에 영향을 주는 유전자(p53, Bax, p21, p16 등)를 이용한 연구가 진행 중이다. 본 연구에서는 종양 억제 유전자로 알려진 p73이 항암제에 대한 세포의 민감성에 어떠한 영향을 미치는지를 조사하였다. P73 과발현을 위하여 Tetracycline-inducible system을 이용하였고, p53의 영향을 배제하기 위하여 p53이 불활성화 되어 있는 HeLa세포주를 이용하였다. 이러한 p73β을 과발현시킨 HeLa/p73β 세포에서는 HeLa세포에 비하여 CDDP와 Doxorubicin에 대한 민감성이 증가하였다. 이러한 민감성의 증가는 DNA ladder와 PARP cleavage 조사를 통하여 조사해 본 결과세포 예정사의 과정이었다. 세포 주기 분석 결과, 증가된 예정사는 G1이나 G2/M기 억제와 같은 현상을 보이지는 않았다. 즉, CDDP와 doxorubicin에 의한 예정사는 세포 주기 억제의 과정을 통하지 않고 다른 기작을 통하여 일어남을 알 수 있었다. 하지만, Hoest33258 염색과 PARP cleavage에 의한 확인 결과, p73β가 과발현된 HeLa/p73β세포에서 CDDP와 세포 예정사의 시간이 앞당기는 것으로 확인하였다. 즉, p73과발현을 통한 CDDP와 doxorubicin에 대한 민감성과 세포 예정사의 증가는 p73β의 예정사 유도 능력에 의하여 이루어짐을 알 수 있었고, 약제에 대한 하나의 센서타이저로서 기능을 담당하고 있음을 알 수 있었다.

목차 (Table of Contents)

• 1.서론 1
• 2.실험방법 및 재료 5
• 3.결과 12
• 4.논의 32
• 5.참고문헌 35
• 영문초록 42