Molecular Screening and Analysis of Ligand Proteins Associating with Unique-SH3 Domain of c-Yes = 세포 전암성 Yes 단백질의 UNIQUE-SH3 DORMAIN과 결합하는 단백리간드의 검색과 분석

국문 초록 (Abstract)

목적 : 전암성 유전자의 단백질 산물인 ,c-Yes의 unique-SH3부위를 매개로하여 결합하는 리간드 단백질의 cDNA 를 분리하고 염기서열을 결정하여 이로부터 유추되는 아미노산서열로부터 PXXP motif의 공통적인 특징을 규명하고 이와 관련되는 신호전달경로에 대하여 이해를 높히고자 하였다.
재료 및 방법 : 유전자 제조합방법으로 c-Yes 단백질의 unique-SH3부위만을 만들었다. 그리고 이를 ^32P로 표지하고 이를 탐식자로 사용하여 태령 16일의 mouse로부터 제조된 cDNA expression library로부터 단백-단백 결합을 하는 clone들을 얻어 염기서열을 결정하였다. 이들 중에서 p130^Cas와 Kv 15내의 PXXP motifs의 유무에 따른 결합여부를 검사하였고 p130^Cas의 경우 면역침전방법으로 Yes와 결합함을 재차 확인 하였다.
결과 : 7개의 clone들을 양성으로 판정하여 분석한 결과 그중 2개는 개시부위가 다른 Efs의 부분 clone들이었다. 다른 2개는 rat AP17의 mouse homologue였으나 이 2개 모두에서 frameshift 돌연변이가 일어나 원래의 단백질에는 없는 PXXP부위가 인공적으로 만들어졌다. 나며지 3개는 p130^Cas, Kv 15와 기존에 보고되지 우리가 명명한 Y3B#11이었다.
p130^Cas와 Kv15에서 PXXP motif의 상실이 우리가 이용한 실험계에서 결합을 소멸시키는 것을 확인하였고 p130^Cas와 activated c_Yes(Y535F)가 함께 면역침전 되는 것이 관찰되었다.
결론 : c-Yes의 SH3부위에 대응하는 리간드의 PXXP motifs의 배열은 class ?에 부합하였고 활성화된 Yes는 p130^Cas와 결합하며 이를 매개로하여 세포내 adhesion complex와 관련된 신호전달과정에서 Src과 상호 보완적인 기능(redunancy)을 지닐 가능성이 큰 것을 알게 되었다.

목차 (Table of Contents)

• Introduction
• Materials and Methods
• Results
• Discussion
• Conclusion
• References