蘇木分劃의 血管新生 抑制에 대한 硏究 = Anti-Angiogenic Effects of Caesalpiniae Lignum fractions

국문 초록 (Abstract)

蘇木의 혈관신생 억제에 대한 유효 분획 추출물을 찾기 위하여, 蘇木을 hexane, ethyl acetate, butanol, water로 분획한 후 human immortalized HUVE cell, ECV-304 세포에 투여하여 세포독성, 세포 증식능, tube formation, gelatinolytic activity에 미치는 영향을 관찰하였다.
1. 혈관내피세포에 대한 세포독성에서 蘇木의 ethyl acetate 분획 추출물은 40 ㎍/㎖ 농도에서 49%, 80 ㎍/㎖ 농도에서 19%의 세포 생존율을 나타내었다.
2. Proliferation assay에서는 ethyl acetate 분획 추출물이 20 ㎍/㎖의 농도에서 대조군에 비하여 35.7%, butanol 분획 추출물은 80 ㎍/㎖ 농도에서 29.9%로 감소하였다.
3. Matrigel을 이용한 tube formation assay에서 蘇木 ethyl acetate 분획 추출물은 20 ㎍/㎖ 농도에서부터 tube network가 붕괴되어 혈관형성 저해가 관찰되었다. 蘇木 butanol 분획 추출물 투여군은 80 ㎍/㎖ 농도에서 tube network가 붕괴되어 혈관형성 저해가 관찰되었다.
4. ECV-304에서 분비되고 있는 MMP-9의 양을 측정하기 위하여 gelatin zymogram을 시행한 결과 蘇木의 ethyl acetate, butanol 분획물은 20, 40, 80 ㎍/㎖ 농도에서 MMP-9의 밴드 크기에 변화가 관찰되지 않았다.
이상의 실험결과는 蘇木의 혈관신생 억제효과가 ethyl acetate, butanol 분획층에 있음을 시사하는 것이다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Angiogenesis is very important phase in growth and metastasis of tumor and Caesalpiniae Lignum has been reported for anti-angiogenesis effects.
So we performed the following experiments for finding out the effective fraction of Caesalpiniae Lignum.
1. Cell viability assay for ECV304 showed that the viability was almost identical between that of control and that of the fractions of Caesalpiniae Lignum except of ethyl acetate fraction of Caesalpiniae Lignum (40 ㎍/㎖: 49% of control, 80 ㎍/㎖: 19%)
2. Proliferation assay showed that ethyl acetate and butanol fractions of Caesalpiniae Lignum decrease cell proliferation (ethyl acetate-20 ㎍/㎖: 35.7%, butanol-80 ㎍/㎖: 29.9%) in comparison with the control
3. In capillary-like tube formation assay, the ethyl acetate fraction of Caesalpiniae Lignum showed the inhibition effects on tube formation at the dose of 20 ㎍/㎖ and the butanol fraction of Caesalpiniae Lignum did at the dose of 80 ㎍/㎖ . To prove that this results was not derived by death of cell, we performed trypan blue stain and the cell is stained alive.
4. The results of gelatin zymogram showed that no change in gelationlytic activity of MMP-9 at all dose(20 ㎍/㎖, 40 ㎍/㎖, 80 ㎍/㎖) of both ethyl acetate fraction and butanol fraction of Caesalpiniae Lignum , but in consideration of cell viability on MTT assay it is suggested that MMP-9 increase in ethly acetate fraction of Caesalpiniae Lignum at the dose of 40 ㎍/㎖ and 80 ㎍/㎖.
According to the above research, we proved that Caesalpiniae Lignum has anti-angiogenesis effects and it is suggested that the valuable fraction of Caesalpiniae Lignum in anti-angiogenesis effects is ethyl acetate fraction and butanol fraction