B16F10 mouse melanoma 세포에서의 백급(白芨)에 의한 멜라닌 생성 억제 = (The)inhibition effect of Bletilla striata on melanogenesis in B16F10 mouse melanoma cells

국문 초록 (Abstract)

멜라닌세포는 자외선 등과 같은 외적, 내적 자극에 의해 기미, 주근깨, 흑색종 등의 피부질환을 일으킨다. 여성들은 이러한 피부변화에 민감하게 반응하고 피부착색에 대한 관심은 날로 증가하고 있다. 이에 보다 안정적이면서 효과적으로 작용을 할 수 있는 미백 소재에 대한 개발 연구가 활발히 진행되고 있다.
본 연구에서는 피부 질환 응용처방 중 과색소 침착질환에 효과가 있는 여러 외용약 처방에 수록된 약재 중 하나인 백급을 이용하여 B16F10 melanoma cell에 멜라닌 생성에 영향을 미치는지 조사하고자 대조구에 α-MSH 200nM, 백급을 농도별로 처리한 것과 미백성분으로 많이 활용되고 있는 알부틴을 함께 적용한 결과, 백급성분이 tyrosinase 활성과 멜라닌 생성 억제시켰음을 알 수 있었다. 이상의 연구 결과를 토대로 향후 미백에 효과가 있는 생약 성분의 약품 및 화장품 개발에 기여할 수 있을 것으로 사료된다. 따라서 앞으로 백급의 멜라닌 합성 억제효과에 대한 더욱 정확한 작용기전과 천연물에 대한 응용 방법 등의 개발 등 많은 한약재의 체계적인 연구가 필요하리라 사료된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Exposure of ultraviolet rays is increased by destroy of ozone layer caused by environmental pollution then this phenomenon makes skin aging and wrinkle process speedy up. Melanin cell has protection function for cell against injurious irritate, on the other hands, it was known that excess secretion makes skin problems such as pigmentation (discoloration), freckles and melanosis. Contemporaneous human being, especially almost women are very sensitive and react about such skin problems and also they become more and more interested in skin coloring in point of beauty. Melanin synthesis in melanocytic cells is ultimately regulated by tyrosinase, a copper-containing glycoprotein, which is the critical rate-limiting enzyme. In addition to tyrosinase, two more enzymes are known to be involved in melanin biosynthesis, that is, tyrosinase-related protein 1 (TYRP1) and dopachrome tautomerase (DCT). It has been shown from Chinese medicine literature and clinical studies that Bletilla striata helps lung functions, including the release of edema, hemostasis, astringent, wound healing, silky texture and release of freckle. In Chinese dermal clinics, Bletila striata is applied on dry skin, abscess, burn and freckle as a medicine for external use with other Chinese Medicine. In the present study, the effect of liquefied extract powder of Bletilla striata in PBS buffer on tyrosinase expression and melanogenesis was examined in a B16F10 mouse melanoma cell line model system. Cytotoxicity of Bletilla striata when co-treated with α-MSH and arbutin in B16F10 mouse melanoma cells were tested. Within a concentration range of Bletilla striata showing no cytotoxicity effects, it decreased the amount of melanin and activity of tyrosinase in cells treated with α-MSH in a dose dependent manner. In addition, Bletilla striata decreased levels of protein expression of tyrosinase, but not either of TYRP1 or DCT in these cells. Treatment of Bletilla striata resulted in diminishing dendrite of B16F10 mouse melanoma cells. Collectively these data show that Bletilla striata has a inhibitory effect on melanin synthesis and tyrosinase activity by down-regulation of tyrosinase protein in B16F10 mouse melanoma cells. These data suggest that Bletilla striata may be a good ingredient source for developing whiting effect cosmetic products or drugs for hyperpigmentary disorders.

목차 (Table of Contents)

• 제1장 서론 = 1
• 제2장 실험 재료 및 방법 = 8
• 2.1. 실험재료 = 8
• 2.2. 세포 배양 = 8
• 2.3. 시료 및 시약처리 = 8
• 2.4. 세포독성 측정 = 9
• 2.4.1 MTT assay = 9
• 2.4.2 FACS analysis = 9
• 2.5. 멜라닌 함량 측정 = 10
• 2.6. Tyrosinase 활성 측정 = 10
• 2.7. Western blotting assay = 11
• 2.8. Tyrosinase mRNA 발현량 조사 = 11
• 2.9. 세포의 형태관찰 = 12
• 제3장 실험 결과 및 고찰 = 13
• 3.1. 백급의 B16F10 세포 생존율에 미치는 영향 = 13
• 3.2. 백급의 최종 멜라닌 생성 억제 효과 = 17
• 3.3. 멜라닌 색소 침착의 육안적 관찰 = 19
• 3.4. 백급의 세포내 tyrosinase 활성 억제 효과 = 20
• 3.5. 멜라닌 합성 관련 효소의 단백질 발현량의 변화 조사 = 22
• 3.6. 백급의 세포내 tyrosinase mRNA 발현에 미치는 영향 = 24
• 3.7. 세포의 형태학적 관찰 = 25
• 제4장 결론 = 26
• 참고문헌 = 27
• Abstract = 30