세포조직배양법을 이용한 쥐 인공피부의 개발 = Development of Dermal Equivalent Using Mouse Fibroblasts

국문 초록 (Abstract)

이상의 연구에서, mouse 섬유아세포를 이용하여 dermal equivalent(DE)를 제조하였으며 이와함께 상피조직으로부터 유도한 각질형성세포를 이중배양함으로써 mouse에 대하여 living skin equivalent를 제조하였다. 이때 세포의 지지체역할과 동시에 세포성장을 돕는 콜라젠의 농도는 1.0 ㎎/㎖ of gel 이하의 낮은 농도에서, 그리고 초기접종세포의 농도를 높일수록 3차원구조 형성에 적합하였으며 젤의 수축과 DE형성이 잘되었다. 본 실험에서는 최대로 8 ×10exp(5)개의 세포를 접종하였고, 이때 젤내의 초기세포농도는 2×10exp(5) cells/㎖ of gel이다.
배지중에 첨가한 GAGs는 dermal equivalent에서 세포와 콜라젠간의 교차결합을 도와 세포성장을 촉진시켰으며, hyaluronic acid를 첨가한 경우 젤의 수축과 DE내의 세포성장에 대하여 초기직경을 48㎜에서 90㎜로 scale-up한 경우 모두 좋은 결과를 보였고, DE 위에 배양한 mouse 각질형성세포는 그 위에서 분화되어 in vitro에서 skin equivalent를 형성하였다.
이상의 결과를 인체세포를 이용한 skin equivalent의 제작에 적용하기 위하여 본 연구에서는 인체 섬유아세포와 각질형성세포를 신생아의 포피(foreskin)으로부터 분리, 유도 및 배양하였다. 앞으로의연구에서는, 분리배양한 인체세포를 이용하여 human skin equivalent를 제작하고 대량생산을 위한 제반 조건을 최적화하여 실제 임상에 응용할 수 있도록 하는 것이 남은 과제이다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

As the first stage of development of an artificial skin, fibroblasts were cultured in the collagen matrices to make a living dermal equivalent. Mouse embryonic fibroblasts were incorporated into a collagen matrices on plastic dishes containing concentrated DMEM culture media supplemented with sodium bicarbonate, hepes, antibiotics and fetal bovine serum. As the growth stimulation components, glycosaminoglycans were added; hyaluronic acid, chondroitin sulfate, heparin, chitosan were incorporated into the media at a concentration of either 1% or 5% w/w to collagen in order to investigate the effect on development of dermal equivalent. After the few days of incubation, gel matrices were contracted and firm dermal equivalent were formed. And the keratinocytes were cultured on top of dermal equivalent and make a three dimensional artificial skin tissue.