T4 DNA Ligase 반응물의 정량분석 = A Simple and Quantitative Analysis of DNA Fragments Ligated by T4 DNA Ligase

국문 초록 (Abstract)

T4 DNA ligase의 효소활성을 보다 간편하게 측정하기 위한 방법으로 겔투과 (gelpermeation) 컬럼인 μ-BONDAGEL ELinear column 두개를 HPLC에 장착하여 조사하였으며, 이 방법의 장단점을 film-scanning 방법과 비교하였다. ligation 반응의 생성물을 단지 한 종류로만 얻기 위하여 제한 효소로 선형화된 DNA 의 두 말단을 탈인산화시켜 자체결합(self-ligation)을 방지하는 상태로 기질 DNA를 사용하였다. 이 방법에 의한 ligation된 생성물은 4분 이내에 그 확인이 가능하고 6 ng 까지도 분석이 가능하여 filmscanning 방법보다 빠르고 간편하며 보다 민감한 것으로 조사되었다. 그러나, 반응물과 생성물의 용출시간의 차이가 비교적 작아 해상력은 film-scaning 방법보다 낮은 것으로 나타났다. 컬럼의 수를 늘여 4개로하면 HPLC 방법의 해상력이 더 많이 증대되리라 생각된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

□The use of a gel permeation high-performance liquid chromatography(HPLC) equipped with two μ-BONDAGEL E-Linear columns as a convenient T4 ligase assay system was investigated and compared with the film - scanning method. When dephosphorylated and EcoRI restriction enzyme- digested DNA fragments were used as a substrate for ligation, only one kind of ligated product was observed. It was possible to detect the substrate and ligated product DNA within 4 min by the HPLC method and the minimum detectable amount of DNA was 6 ng. Gel permeation chromatography assay was found to be more rapid, convenient, and sensitive than the film-scanning method, but the resolution by the HPLC method of the components in the reaction mixture was lower than by the film-scanning method. It is thought that the resolution can be improved by extension of the column length.