다양한 polyphenol에 의해 유도되는 NAG-1이 두경부암에서 세포사멸에 미치는 영향과 관련신호전달기전 분석 ; 생체외 및 생체내 실험

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

본 연구의 목적은 암억제물질로서 NAG-1의 기능적 역할을 확인하고자 하는데 있다. 연구결과로 다양한 두경부암 세포주에 polyphenol의 하나인 EGCG를 사용하여 MTT Assay, Tunnel assay, FACS 실행결과상 EGCG의 농도별로 세포사멸 효과가 잘 나타났고, Western Blot상 세포사멸과 관련된 Caspase-3, PARP가 30μM에서 활성화된 cleaved form으로 확인되었다. EGCG없이 NAG-1 cDNA만 transfection한 경우에도 Caspase-3와 PARP가 단절되면서 많은 세포사멸이 일어나는 것을 확인하였다. EGCG처리시 NAG-1의 발현이 증가되는 것을 확인하였고, NAG-1증가와 관련하여 세포사멸에 관여하는 caspase-3와 PARP가 증가되는 것으로 확인되었다. 또한 NAG-1 transfection한 경우 세포주기상 세포사멸을 나타내는 subG1이 현저하게 증가되고 이를 siRNA로 억제한 경우 subG1이 현저하게 감소되는 것으로 확인이 되었다. promotor assay를 통해 확인한 결과 NAG-1의 promotor에 p53의 결합부위가 세포사멸에 영향을 주는 것으로 확인되었고, 두 세포주에서 FaDu가 p53 mutation이 있는 것이 NAG-1과 관련된 다른 효과를 보이는 것이 아닌가 추정되었다.
in vivo 실험으로 C3H syngenic mice를 이용한 xenograft실험에서 EGCG가 효과적으로 암을 억제하는 것으로 확인되었고, xenograft 모델에서 얻은 조직검사상에서도 EGCG처리한 그룹에서 NAG-1의 증가를 확인할 수 있었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Purpose : Non-steroidal anti-inflammatory drug activated gene (NAG-1) was pro-apoptotic and antitumorigenic protein. In this report, we present NAG-1 as a novel target protein for catechins, particularly EGCG, which can induce its expression. In addition, induction of NAG-1 can promote apoptosis and mediate antitumorigenic activity. EGCG is the most potent NAG-1 inducer tested in this study and the p53 involved in the EGCG induced NAG-1 expression. In addition, we have also investigated signaling pathways affected by EGCG and propose herein an overview of how EGCG induces apoptosis in human HNSCC.
Experimental Design : HNSCC cell lines viability was measured by MTT assay. TUNEL and FACS, was performed to detect whether the death of EGCG-induced in cells was caused by apoptosis. NAG-1 expression in HNSCC cell was determined by western blot, and performed transfection of NAG-1 cDNA and siRNA into Cells and studied whether ectopic expression of NAG-1.
RESULT: EGCG decreased the viability of cells in a dose-dependent manner. the analysis through TUNEL and FACS assay. And therefore, Apoptosis induction was found to be dose ？dependent manner , and to be significant increases of Annexin V positive cells.
In addition NAG-1 mRNA level was increased dose dependent on EGCG concentration. and HNSCC cells transfected with NAG-1 cDNA did not survive during expansion and significantly induced apoptosis. in contast, NAG-1 siRNA to cells by transfection in EGCG Apoptosis is reduced.
Conclustion: NAG-1 as an antitumorigenic activity regulated by EGCG may result in the development of new products for the treatment of Human Head & Neck cancer.