FLAG 펩타이드에 특이적인 MassM2 single-chain variable fragment (ScFv) 항체의 개발 = The development of MassM2 single-chain variable fragment (ScFv) antibody specific to FLAG peptide

국문 초록 (Abstract)

FLAG 펩타이드(DYKDDDDK) 항원에 특이적인 항-FLAGM2 생쥐 단일클론 항체는 FLAG tagged 단백질을 정제하거나검출하는데 전 세계적으로 널리 사용되고 있다. 그러나 이 항체의 항원 결합에 관여하는 아미노산 서열은 알려져 있지 않았었다. 최근에 항원 결합 부위인 가변 도메인(variable domain) 의 아미노산 서열이 X선 결정학 및 질량 분광학을 통해 결정되었다. 그러므로 본 연구에서는 위에서 언급한 두 가지 방법으로 결정된 항-FLAG-M2 항체의 중사슬(VH) 및 경사슬(VL) 가변 도메인의 아미노산 서열을 정렬하여 MassM2로 명명된중사슬(VH) 및 경사슬(VL) 가변 도메인의 아미노산 서열을새롭게 결정하였다. 또한 AlphaFold라는 컴퓨터 모델링 프로그램으로 예측한 MassM2 3차원 구조와 이미 보고된 2G60 (항-FLAG-M2 항체 결정 구조) 구조를 중첩하여 RMSD (Root Mean Square Deviation)를 계산하여 구조적 유사도 비교를 수행하였다. 새롭게 결정된 MassM2 항체 가변 도메인의 중사슬(VH) 및 경사슬(VL) 아미노산 서열에 따라 해당 유전자를 설계 및 합성하여 pUC119 발현 벡터에 클로닝한 다음 대장균에서 재조합 MassM2 single chain variable fragment (ScFv) 항체로 발현시켰다. 발현된 항체는 enzyme-linked immunosorbent assay와 Western blot에서 FLAG 펩타이드와 FLAG 펩타이드tagged 단백질에 대해 모두 항원결합력을 나타내었다. 또한bio-layer interferometry을 통해 해리평형상수(KD)가 1.12 × 10-8 M~1.342 × 10-7 M으로 계산되어 항원결합력을 재확인할수 있었다.

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