염산바니디핀의 생체이용률시험 및 생물학적동등성시험 표준 지침 작성 = Bioavailability study to establish bioequivalence guidances of barnidipine HCl

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Barnidipine hydrochloride is an antihypertensive drug belonging to the dihydropyridine group of calcium antagonists. Previously reported methods for the determination of barnidipine are scanty and bioavailability of barnidipine have not been thoroughly studied. The study was conducted to investigate the bioavailability of barnidipine hydrochloride, administered after single oral dose in healthy volunteers. Barnidipine hydrochloride was given to twenty-five healthy volunteers(10 mg) and blood samples were drawn for 36h. Barnidipine plasma levels were determined by a specific and sensitive liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS) method. The plasma samples were extracted with internal standard(nifedipine) for injection. The method has been validated in a linear range of 0.03-3.0 ng/mL. The precision and accuracy of the assay, reported as relative error of mean and coefficients of variation, were below 20%. After single oral administration, the peak plasma concentration(Cmax) of 0.72 ± 0.39 ng/mL was attained at 3.58 ± 2.64 hr. The elimination half-life (t1/2) was 8.46 ± 5.15 hr; the elimination rate constant was 0.14 ± 0.12 hr⁻¹ ; and the area under the curve(AUC) was 4.65 ± 2.72 ng․hr/mL. Cmax,1st, Tmax,1st, Cmax,2nd and Tmax,2nd were 0.491 ± 0.334 ng/mL, 0.646 ± 0.232 hr, 0.612 ± 0.424 ng/mL and 5.75 ± 0.897 hr, respectively.

국문 초록 (Abstract)

Ⅰ. 제 목
염산바니디핀의 생체이용률시험 및 생물학적동등성시험 표준지침 작성
Ⅱ. 연구개발의 목적 및 필요성
본 연구과제에서는 3개 시험기관에서 염산바니디핀의 혈장 중 분석방법을 검증하여 분석조건을 확립하고 생체이용률 시험을 실시하여 표준 생물학적동등성시험 지침을 마련함으로써 향후 실시될 염산바니디핀제제의 생물학적동등성 시험의 효율성을 증대시키고 효과적인 약효동등성 평가와 시험결과의 신뢰성 및 객관성 확보를 도모하고자 하였다.
Ⅲ. 연구개발의 내용 및 범위
염산바니디핀의 생체이용률시험을 위하여 3개 시험기관은 사전협의 및 각 기관별로 분석법 validation을 통하여 염산바니디핀의 혈장 중 분석조건을 확립하였고, 각각 확립된 분석법을 비교 고찰하여 표준분석법을 제시하였다. 이분석방법으로 3개 기관은 순차적으로 각각 생체이용률시험을 실시하였다. 생체이용률시험은 각 기관에서 염산바니디핀제제의 대조약을 가지고 건강한 성인 8 ～ 9인의 피험자를 대상으로하여 실시하여 약동력 파라미터인 혈중농도곡선아래면적(AUCₜ), 최고혈중농도(Cmax), 최고혈중농도 도달시간(Tmax), 소실속도정수(Kₑ), 소실반감기(t1/2)를 구하였다. 또한, 주관기관에서 각 기관의 시험결과를 총괄 검증하여 최종 염산바니디핀의 표준 생물학적동등성시험 지침을 작성하였다.
Ⅳ. 연구개발결과
바니디핀의 혈장 중 분석법을 HPLC/MS/MS를 이용하여 3개 기관에서 검증하여 확립하였다. 본 분석방법에서 바니디핀의 피이크의 유지시간은 2.3-3.7분, 내부표준물질의 피이크의 유지시간은 2.7-6.4분 이었으며, 분석조건에서 바니디핀 및 내부표준물질은 기타 혈장성분들과 잘 분리되었다. 검량선의 농도범위는 0.03 - 3.0 ng/mL에서 양호한직선성이 관찰되었다. Validation 결과 CV%는 일내 정밀성은 15%이하(정량한계농도에서는 20%이하)였고, 일간 정밀성은 15%이하(정량한계농도에서는 20% 이하)였으며, 정확성 CV%는 15%이하(정량한계농도에서는 20%이하)였으며 정량한계는 0.02-0.05 ng/mL이었다. 이상의 결과로부터 혈장 중 바니디핀에 대한 본 분석방법은 인체에 대한 생체이용률시험에 이용될 수 있는 충분한 감도, 특이성, 직선성, 정확성 및 정밀성이 있음을 알 수 있었다. 본 분석방법을 이용하여 3개 기관에서 염산바니디핀의 대조약 올데카캅셀 1캡슐(염산바니디핀 10 mg)을 경구투여하여 생체이용률시험을 실시한 결과 산출된 AUCₜ는 4.65 ± 2.72 ng․hr/mL, Cmax는 0.72 ± 0.39 ng/mL, Tmax는 3.58 ± 2.64 hr, Kₑ는 0.14 ± 0.12 hr-1, t1/2는 8.46 ± 5.15 hr이었다. 또한 대조약의 제형 특성으로 인하여 혈장중 농도 프로파일에 double peak가 나타나 Cmax,1st, Tmax,1st, Cmax,2nd 및 Tmax,2nd를 구하였으며 그 값은 각각 0.491 ± 0.334 ng/mL, 0.646 ± 0.232 hr, 0.612 ± 0.424 ng/mL 및 5.75 ± 0.897 hr 이었다.
Ⅴ. 연구개발결과의 활용결과 및 계획
염산바니디핀의 생체이용률시험을 실시하여 얻은 약동학적 파라미터를 참고로 하여 염산바니디핀의 생물학적동등성시험의 표준지침을 작성함으로써 향후 이 제제의 생물학적동등성시험의 실시와 평가에 있어 효율성을 증대시킬수 있다○ 연구목표 : 본 연구과제에서는 3개 시험기관에서 염산바니디핀의 혈장 중 분석방법을 검증하여 분석조건을 확립하고 생체이용률 시험을 실시하여 표준 생물학적동등성시험 지침을 마련함으로써 향후 실시될 염산바니디핀제제의 생물학적동등성 시험의 효율성을 증대시키고 효과적인 약효동등성 평가와 시험결과의 신뢰성 및 객관성 확보를 도모하고자 하였다.
○ 연구내용 : 염산바니디핀의 혈장 중 분석법을 HPLC/MS/MS를 이용하여 3개 기관에서 검증하여 확립하였다. 본분석방법에서 바니디핀의 피이크의 유지시간은 2.3-3.7분, 내부표준물질의 피이크의 유지시간은 2.7-6.4 분이었으며, 분석조건에서 염산바니디핀 및 내부표준물질은 기타 혈장성분들과 잘 분리되었다. 검량선의 농도범위는 0.03-3.0 ng/mL에서 양호한 직선성이 관찰되었다. Validation 결과 CV%는 일내 정밀성이 13.7%이하, 정량한계농도에서의 일내 정밀성은 17.5%이하였고, 일간 정밀성은 14.0%이하, 정량한계농도에서의 일간 정밀성은 18.1% 이하였으며, 정확성은 94.0%-114.4%, 정량한계농도에서의 정확성은 99.0-107.0%였으며 정량한계는 0.02～ 0.05 ng/mL이었다. 이상의 결과로부터 혈장 중 바니디핀에 대한 본 분석방법은 인체에 대한 생체이용률시험에 이용될 수 있는 충분한 감도, 특이성, 직선성, 정확성 및 정밀성이 있음을 알 수 있었다. 본 분석방법을 이용하여 3개 기관에서 염산바니디핀의 대조약으로, 염산바니디핀 속방립 3.33 mg과 염산바니디핀 서방립 6.67 mg을 함유하는 올데카 캅셀 1캡슐을 경구투여하여 생체이용률시험을 실시한 결과 산출된 AUCt는 4.65 ± 2.72 ng․hr/mL, Cmax는 0.72 ± 0.39 ng/mL, Tmax는 3.58 ± 2.64 hr, Ke는 0.14± 0.12 hr⁻¹, t1/2는 8.46 ± 5.15 hr이었다. 올데카캅셀의 제형 특성상 혈장중 바니디핀의 농도 프로파일에 double peak가 나타났으며, 각각의 peak에서 구한 Cmax,1st, Tmax,1st, Cmax,2nd 및 Tmax,2nd는 세 기관의 총 평균으로서 각각 0.491 ± 0.334 ng/mL, 0.646 ± 0.232 hr, 0.612 ± 0.424 ng/mL 및 5.75 ± 0.897 hr이었다.
○ 연구성과(응용분야 및 활용범위포함) : HPLC/MS를 이용한 혈중의 염산바니디핀의 정량법을 3개 기관에서 검증하여 표준화된 분석법을 확립하였으며 3 기관에서 순차적으로 생체이용률시험을 실시하여 약동력적 파라미터를 구하였다. 이 결과를 바탕으로 염산바니디핀 생물학적동등성시험 표준 지침을 작성함으로써 향후 염산바니디핀의 생물학적동등성시험의 실시와 평가에 있어 효율성을 증대시키는데 기여할 수 있으리라 예상된다.