Vibrio vulnificus 박테리오 파아지의 특성 = Characteristics of Vibrio vulnificus Bacteriophage

국문 초록 (Abstract)

목 적 : 이미 보고되어 있는 파아지들의 경우, 일반적인 형태, 숙주역과 몇 가지의 성질만 연구되어 있으므로 보다 상세한 특성에 대한 연구가 필요한 상태이다. 본 연구에서는 해양으로부터 분리한 V. vulnificus를 숙주균으로 하여 투명한 용균반을 형성하는 파아지를 분리해 낸 다음, 분리된 V. vulnificus 파아지의 특징을 연구하고자하였다.
방 법 : V. vulnificus 를 숙주균으로 하여 해산물로부터, 숙주균에 특이적인 파아지를 분리하고, 농축 정제과정을 거쳐 파이지입자를 순수분리하였다. 파아지의 형태를 전자현미경으로 관찰하였으며, 분리된 파아지의 숙주특이성을 조사하고, 파아지 입자의 물리적 특성을 검토하기 위해, 온도 안정성시험, pH 안정성 시험을 실시하였다. 파아지의 흡착율, 파아지의 흡착율에 미치는 무기염 이온의 영향, 온도의 영향과 pH의 영향을 관찰하였다. 파이지의 일단증식곡선을 구하였으며 토끼 면역과 교차 중화 시험, 파아지 핵산의 특성, 구조단백질의 특성을 조사하였다.
결 과 : 전자현미경관찰결과 본 연구에서 분리한 파아지는 두부와 미부를 가지는 형태로 미부에 꼬리판과 꼬리섬유를 가지고 있었다. 파아지의 물리적성질시험 결과 파아지는 50℃이하의 온도에서 안정하였으며 중성pH영역에서 안정하고 산성과 알칼리 영역에서는 활성을 잃었으며 자외선에는 35초 조사에 50% 정도 불활성화 되었다. 파아지는 약 65%의 흡착율을 나타내었으며 흡착에 ??, ??을 요구하였다. 파아지입자가 안정한 온도와 pH영역에서는 흡착에 영향을 받지 않았으며 일단증식시험 결과 108 PHU/ml의 파아지 입자를 생산하였다. 정제한 파아지를 항원으로 하여 토끼에 면역한 항혈청에 파아지가 중화되었으며 파아지 핵산은 이중나선 DNA였다. 파아지의 구조단백질은 SDS-PAGE polyacrylamide gel 전기영동 결과 2개의 밴드를 나타내었다. 그리고 Western blotting 결과 파아지의 전기영동 결과와 동일한 위치의 밴드에서 항원성을 나타내었다.
결 론 : 인체병원균으로 중요성이 인식되고 있는 V. vulnificus는 해산물의 위생과 국민건강에 직접적인 영향을 미칠 수 있는 세균으로 이에 대한 활발한 연구가 요구되는 실정이다. 파아지의 분리율은 숙주균의 분리율에 의존하므로 숙주균의 해수내 분포에 영향을 미친다고 추측되며, 파아지는 숙주균에 감염되어 숙주균을 용균시키므로 숙주균의 개체수를 조절하여 생태학적 측면에서 중요한 기능을 담당하는 것으로 여겨진다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Background : Vibrio vulnificus causes severe wound infection and life-threatening septicemia. In this study we present the characteristics of V. vulnificus bacteriophage and the basis of pathogenicity study of V. vulnificus related on bacteriophage.
Methods : We isolated bacteriophage for V.vulnificus from marine products and
examined its physiological and biochemical characteristics, and the ultrastructure by electron microscopy (TEM,SEM). And also, we investigated host ranges, temperature stability, pH stability, inactivation by UV irradiation, DNA isolation and analysis and structural protein analysis of the bacteriophage.
Results : The adsorption rate of bacteriophage was above 80% and had a little
influence at 10-45℃ and pH5-10. Isolated bacteriophage was used to produce antiserum against rabbits and its antigenicity was investigated by cross-neutralization. Western blot analysis showed the capsid protein of bacteriophage had antigenicity. The bacteriophage had double-strand DNA. In restriction analysis, the phage DNA was digested HinfI. The structural protein of phage showed two bands of 34.7kDa and 18.4kDa on SDS-PAGE.
Conclusion : The specificity of bacteriophage may be due to the specific binding site that be possessed by host strain surface. Therefore, it seems that virulent bacteriophage controls the number of host strain and then takes a role on natural marine environment.