모델동물을 이용한 독성 스크리닝 기술개발 = Development of Short/Medium Term Models for Carcinogenicity Testing

국문 초록 (Abstract)

모델 동물을 이용한 독성스크리닝 기술개발을 위해 다음과 같은 실험을 실시하였다.
1) Tg 또는 KO 마우스를 이용한 6개월 단기발암성시험법의 GLP 체제하 수행
국내 GLP의 역량을 높이기 위하여 현재 국제적으로 인증 받아 사용 중인 p53+/- 동물 모델의 단기 발암성시험을 GLP체제하에서 시험하였다. 시험물질은 국내개발 물질 1종과 2종의 양성대조물질cyclophosphamide, benzene, p-cresidine) 그리고 음성대조물질 1종(corn oil) 시험하였다. cyclophosphamide 투여군은 4개월 후 혈구수감소 및 장기중량의 감소가 나타났으며 조직병리학적으로 수컷 투여군에서 lymphoma의 증가가 관찰되었다. 또한 골수 degeneration이 암수모두에서 나타났으며 testis degeneration 및 ovary atrophy가 나타났다. benzene 투여군에서는 역시나 혈구수감소 및 장기중량감소 그리고 골수의 degeneration이 관찰되었으나 그 밖에 특별한 변화는 없었다.
2) FVB-HBx Tg 마우스를 이용한 2단계 간발암시험
B형 간암 바이러스의 X 단백질의 형질전환마우스를 간 단기발암성모델로서 개발하기 위해 본 실험을 실시하였음. FVB-HBx congenic 마우스를 제작하였으며 이를 이용해 2단계 단기 간발암실험을 진행하고 있음. 혈액치에서는 별다른 차이를 발견하지 못했지만 조직병리학적으로 16주후 간조직에서 전암병변이 발견되었고 이는 FVB 마우스의 전암병변 발생에 비해 높은 수치를 나타내었다. 추후 26주차 부검이 실시될예정이다.
3) 근교계 마우스를 이용한 2단계 간발암 실험
FVB 마우스를 이용한 2단계 간발암실험에서는 혈액치에서 별다른 차이를 보이지 않았지만 조직병리학적으로 16주차부터 hepatocellular adenoma를 관찰할 수 있었으며 26주차에서는 거의 모든 개체의 FVB가 hepatocellular adenoma, 혹은 hepatocellular carcinoma를 관찰 할 수 있었다. 또한 발암물질을 투여한 군에서 높은 수치의 HCC marker의 발현과 암종의 부피증가가 확인되어 2단계 발암실험을 완성하였다.
4) 질환모델 마우스를 이용한 2단계 간발암 검색모델의 개발
2형당뇨 모델인 ob/ob 마우스 혹은 db/db마우스를 이용하여 간발암모델을 확립하고자 하였다. ob/ob 마우스에 대한 DGA 감수성 시험에서 정상적인 마우스에 비해 높은 감수성을 나타냈으며 간독성과 관련한 혈액치 역시 정상마우스에 비해 높게 나타났다. 따라서 이 마우스 이용한 2단계 간발암모델 실험 및 신생자 간발암실험을 실시되고 있다..5
5) 형질전환 마우스를 이용한 단기발암성 시험법의 SOP화
HBx Tg, rasH2,그리고 p53+/-마우스를 이용한 단기 발암성시험에 대한 SOP를 작성하였다.○ 연구목표
최종 연구 목표
- 모델동물(Tg/KO mouse 등)을 이용한 단기발암성시험기술의 확립
당해연도 연구목표
1) 형질전환동물을 이용한 단기발암성시험법의 확립
2) 근교계마우스를 이용한 2단계 간발암 검색모델의 개발
3) 유전자이식(Tg) 마우스를 이용한 2단계 간발암 검색모델의 개발
4) 질환모델 마우스를 이용한 2단계 간발암 검색모델의 개발
5) 유전자발현량 비교를 통한 전암병변 마커의 탐색
6) 시험법의 SOP/GLP화
...[중략] 원문참조

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

1) Six month medium-term carcinogenesis test using transgenic or knock-out mice under the GLP statute.
Twenty-six weeks medium term carcinogenesis test was performed in GLP status using internationally validated p53 heterozygote mice to increase of the GLP carcinogenesity test ability using genetically modified mice. Carcinogenic chemicals, benzene, cyclophosphamide and p-cresidine, were treated in p53+/- mice for positive control. Corn oil was treated for negative control. We can found decrease of blood cell number and organ weight, and increases of lymphoma in cyclophosphamide treated group. Additionally, bone marrow and testis degeneration and ovarian atrophy also found in both sex of these animal at histopatholgical study. In benzene treated group also has similar physiological changes in test animals. Additional change couldn’t find in these animals.
2) Two step liver carcinogenesis test using FVB-HBx transgenic mice.
This test was performed to make short term liver carcinogenesis model using hepatitis B X protein transgenic mice. We made FVB congenic HBx Tg mice and 2 step carcinogenesis test was performed using this mice. In blood cell count and blood chemical analysis, we can not find meaning of this between negative control and test groups but histopathologically pre cancer change was found in liver tissue after 16 weeks later. The number of these changes was more appeared in FVB-HBx test group than that of inbred FVB mice. Text necropsy (26 week) will be performed at Dec. 28. 2005.
3) Two step liver carcinogenesis test using inbred mice
In two step carcinogenesis model using FVB mouse, blood cell number and chemical analysis of carcinogen treatment group was not differ from untreatment control group. But we can found hepatocellular adenoma or hepatocellular carcinoma in 2AAF treatment group mice after 16 weeks later. Additionally, when we compared carcinogen treated and untreated control, we can observe increasing of hepatocellular carcinoma marker expression at blood serum and tissue in carcinogen treatment group. And increasing rate of cancer mass volume also has same trend. According to above result, we can suggest that we make short term liver carcinogenesis model in FVB mice.
4) Two step liver carcinogenesis model using disease mice model
We try to make liver carcinogenesis model using non-insulin dependent diabetes model ob/ob or db/db mouse. Comparing ob/ob with background C57BL/6 mice for DGA susceptibility test of ob/ob mice, these mice has high susceptible about DGA chemical and ob/ob mice has high level of GOT GPT and other blood chemical items also represent high concentration. According to these results, we performed to start 2 step liver carcinogenesis test and neonate liver carcinogenesis test.
5) SOPs were made about short term carcinogenesis test using P53 heterozygote mice, rasHe heterozygote mice and HBx transgenic mice