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연구목적 : 본 연구는 PC12 세포에서 nerve growth factor (NGF) 처리에 의해 Rho GTPase Rac이 활성화 되었을 때 미오신 II와 guanine nucleotide exchange factor (GEF) PIX의 상호작용을 관찰하고자 하였다. 재료 ...
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부가정보
국문 초록 (Abstract)
연구목적 : 본 연구는 PC12 세포에서 nerve growth factor (NGF) 처리에 의해 Rho
GTPase Rac이 활성화 되었을 때 미오신 II와 guanine nucleotide exchange factor
(GEF) PIX의 상호작용을 관찰하고자 하였다.
재료 및 방법 : PC12 세포는 10% 혈청이 포함된 DMEM에서 배양하였다. NGF는 처리
전 24 시간 동안 혈청을 제거하였다. NGF 20 ng/ml를 표기한 시간대로 처리한 후 단백질
용출액을 처리하여 세포균질액을 얻었다. 이 과정을 통해 얻은 세포균질액은 PBD-His
beads로 pulldown assay를 실시하여 Rac의 활성화를 검증하였다. 또한 anti-PIX
antibody로 면역침전한 후 미오신 II 항체를 이용하여 결합여부를 확인하였다.
결과 : Rac의 활성은 NGF 처리 후 5분부터 20분까지 꾸준히 증가하였으며 30분에는 감소
하는 경향을 나타냈다. 뿐만 아니라 PIX와 미오신 II와의 결합은 10분부터 감소하기 시작하
여 20-30분에는 결합한 두 단백질의 양이 상당히 감소함을 확인할 수 있었다.
결론 : 이상의 결과로부터 NGF 처리에 의해 Rac이 활성화 되는 것과 PIX와 미오신 II의
결합이 해리되는 시간대가 일치한다는 것을 알 수 있었다. 이는 NGF 처리가 PIX와 미오신
II의 결합 상태를 해리시켜 PIX의 GEF 활성을 유도한다는 것을 설명하고 있다.
GTPase Rac이 활성화 되었을 때 미오신 II와 guanine nucleotide exchange factor
(GEF) PIX의 상호작용을 관찰하고자 하였다.
재료 및 방법 : PC12 세포는 10% 혈청이 포함된 DMEM에서 배양하였다. NGF는 처리
전 24 시간 동안 혈청을 제거하였다. NGF 20 ng/ml를 표기한 시간대로 처리한 후 단백질
용출액을 처리하여 세포균질액을 얻었다. 이 과정을 통해 얻은 세포균질액은 PBD-His
beads로 pulldown assay를 실시하여 Rac의 활성화를 검증하였다. 또한 anti-PIX
antibody로 면역침전한 후 미오신 II 항체를 이용하여 결합여부를 확인하였다.
결과 : Rac의 활성은 NGF 처리 후 5분부터 20분까지 꾸준히 증가하였으며 30분에는 감소
하는 경향을 나타냈다. 뿐만 아니라 PIX와 미오신 II와의 결합은 10분부터 감소하기 시작하
여 20-30분에는 결합한 두 단백질의 양이 상당히 감소함을 확인할 수 있었다.
결론 : 이상의 결과로부터 NGF 처리에 의해 Rac이 활성화 되는 것과 PIX와 미오신 II의
결합이 해리되는 시간대가 일치한다는 것을 알 수 있었다. 이는 NGF 처리가 PIX와 미오신
II의 결합 상태를 해리시켜 PIX의 GEF 활성을 유도한다는 것을 설명하고 있다.
연구목적 : 본 연구는 PC12 세포에서 nerve growth factor (NGF) 처리에 의해 Rho
GTPase Rac이 활성화 되었을 때 미오신 II와 guanine nucleotide exchange factor
(GEF) PIX의 상호작용을 관찰하고자 하였다.
재료 및 방법 : PC12 세포는 10% 혈청이 포함된 DMEM에서 배양하였다. NGF는 처리
전 24 시간 동안 혈청을 제거하였다. NGF 20 ng/ml를 표기한 시간대로 처리한 후 단백질
용출액을 처리하여 세포균질액을 얻었다. 이 과정을 통해 얻은 세포균질액은 PBD-His
beads로 pulldown assay를 실시하여 Rac의 활성화를 검증하였다. 또한 anti-PIX
antibody로 면역침전한 후 미오신 II 항체를 이용하여 결합여부를 확인하였다.
결과 : Rac의 활성은 NGF 처리 후 5분부터 20분까지 꾸준히 증가하였으며 30분에는 감소
하는 경향을 나타냈다. 뿐만 아니라 PIX와 미오신 II와의 결합은 10분부터 감소하기 시작하
여 20-30분에는 결합한 두 단백질의 양이 상당히 감소함을 확인할 수 있었다.
결론 : 이상의 결과로부터 NGF 처리에 의해 Rac이 활성화 되는 것과 PIX와 미오신 II의
결합이 해리되는 시간대가 일치한다는 것을 알 수 있었다. 이는 NGF 처리가 PIX와 미오신
II의 결합 상태를 해리시켜 PIX의 GEF 활성을 유도한다는 것을 설명하고 있다.
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