Bifidobacterium angulatum으로부터 α-galactosidase의 정제 및 특성 = Purification and Properties of α-Galactosidase from Bifidobacterium Angulatum

국문 초록 (Abstract)

α-galactosidase는 (α-D-galactoside galactohydrolase: EC 3.2.1.22)는 다당류나 올리고당인 melibiose, raffinose, stachyose와 guar gum 등의 α-galactosidic 결합을 하고 있는 당을 분해하는 효소이다.
장내세균중 우익균이며 우세균주인 Bifidobacteria로부터 α-galactosidase의 효소학적 특성을 알아보기 위하여 배양여액으로부터 ammonium sulfate분획, 핵산의 제거, Sephadex G-200 gel filtration 및 DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography 등의 4단계 정제과정을 거쳐 정제한 결과 약 8배로 정제되어 단일 단백질로 분리하였다. 또한, 효소분해산물을 알아보기 위하여 TLC에 의하여 당분해 및 올리고당의 생성을 알아보았다. 정제효소의 활성 최적온도는 37℃, 최적 pH는 7.0이었다. 효소활성이 K^+, Zn^2+과 같은 금속이온과 8-Hydroxyquinoline, Sodium Bisulfite 등에 의해선 그다지 저해되지 않았으나, Hg^+, Cu^2+과 p-Chloromercuribenzoic acid에 의해선 저해되었다. 효소의 분자량이 301, 995, 합성기질인 PNPG에 대한 K_m은 0.069mM, V_max는 347.22μmol/min.mg protein이었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

To elucidate enzymatic properties of α-galactosidase (EC 3.2.1.22) from Bif.angulatum. α-galactosidase was purified to homogeneity by ammonium sulfate fractionation, protamine sulfate precipitation, sephadex G-200 gel filtration, and DEAE-sephadex A-50 ion exchange chromatography. The purified α-galactosidase was found tobbe homogeneous by SDSpolyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight of this enzyme, estimated by sepadex G-200 gel filtration, was about 301,995. The optimum conditions for the enzyme reaction was pH 6.5 to 7.0 at 37℃. The purified enzyme was stable at 45℃ or below and in buffer at pH 6 to 7.0. The activity was inhibited by mercury, copper ion, and p-chloromercuribenzoic acid. The kinetics of this enzyme, with p-nitrophenyl-α-D-galactoside as substrate, was determined : K_m was about 0.069mM and V_mas was 347.22 μmoles/min mg protein.