몰시도민 제제의 생체이용률시험 = Bioavailability Study of Molsidomine

국문 초록 (Abstract)

1. 제 목 : 몰시도민 제제의 생체이용률시험
2. 연구개발의 목적 및 필요성
본 연구에서는 몰시도민 제제의 생체이용률시험을 통하여 동 제제의 표준 생물학적동등성시험의 지침을 제시하는 것을 목적으로 한다, 또한, 궁극적으로는 동제제의 표준 생물학적동등성시험 지침 제시를 통한 생물학적동등성 시험의 활성화 및 약효동등성시험 관리의 효율화에 기여하고자 한다.
3. 연구개발의 내용 및 범위
몰시도민 제제의 표준 분석방법을 확립하기 위해서 제1세부기관에서 보편적인 분석법으로 분석방법을 validation하였다. 제2세부기관, 제3부세부기관에서는 1세부 기관의 분석법을 써서 각 세부기관에서 validation 연구를 수행하였다. 이로써 표준 분석법을 확립하고 각 세부과제기관은 생체이용률시험을 통해 분석법을 재확인하여 최종적인 표준생체이용률 시험법의 지침작성을 위한 실험을 진행하였다. 식품의 약품안전청에서 제 3차년도 생동성시험 대조약으로 선정한 몰시도민제제를 건강한 성인 지원자에게 2정(몰시도민으로 4mg)씩 투여한 후 7시간 동안 각 피험자들의 혈장 중 약물농도 데이터를 평가할 수 있는 HPLC 분석법을 개발하고 검증하였다. 이를 위하여 (주)웰화이드코리아 몰시톤 정을 8인의 지원자에게 경구 투여한 후 혈장 중 몰시도민 농도추이 및 생체이용률 파라미터를 구해봄으로써 추후 몰시도민 제제의 생물학적 동등성 시험에 활용될 수 있는 분석방법을 확립 하고자 하였다.
4. 연구개발결과
다음의 HPLC 분석조건, 즉 컬럼 (Luna Cis (5/仰, 4.6 mmX250 mm, Phenomenex), 이동상 (0.01M 인산염 완충액 (pH 4.5) : Acetonitrile = 77 : 23(v/v)), 유속 (1.0 ml/min), UV검출파장 (312nm)에서 몰시도민을 분석하였다. 혈장 2mC에 내부표준물질용액 propranolol 용액 (50//g/M in acidic methanol) 50㎕를 가한 후 vortex하고 8M의 l, 2-dichloroetnane을 가하여 vortex mixer로 2분 동안 진탕 혼합하였다. 3000 rpm 으로 10분간 원심분리 한 후, 유기용매 층 6M을 피팻으로 취하여 blue cap tube에 옮기고 Speed vac에서 2시간 동안 증발시켰다. 이 잔사를 이동상 200㎕로 재조성하고 이 혼합액 100너를 HPLC system에 주입하였다. 상기의 제1세부과제기관에서 정한 분석법으로 분석한 결과 몰시도민의 peak는 혈장 peak와 간섭없이 잘 분리되었으며 validation 자료 역시 그 결과가 양호하였다. 제2세부기관에서도 injection volume와 이동상 조성의 비율이 약간 다를 뿐 동일한 방법으로 분석을 실시하였고, 제3세부기관에서는 1세부기관과 같은 방법으로 분석을 실시하였다. 또한 각 세부 기관에서 분석법을 validation하는데 소요된 기간이 약 1-2 주일 정도로 비교적 짧았다. 그러므로 이 결과는 본 연구에서 개발한 몰시도민의 분석법이 일반적으로 사용할 수 있는 시험법이며 손쉽게 개발할 수 있는 방법임을 알았다, 절식상태의 건강한 한국인 성인 24명(세 세부기관 합계)을 대상으로 한 몰시도민 제제 (몰시도민으로 4mg) 일회 경구투여 후 혈장 중 농도 분석 시험 결과, 최종상 반감기 (t₁/₂)은 1.78±0.45 시간, 최고 혈장 중 농도(Cmax)는 46.19土 18.58 ng/mL, 최고 혈장 중 농도 도달시간(Tmax)은 0.73±0.53 시간, AUC∞는 117.52土51.46ng/ml*hr 로 나타났다. 한편, AUCt=7hr은 AUCco의 88.16%로 80%이상의 값을 나타내었으므로 본 연구에서 사용한 채혈시간은 적절한 것으로 판단되었다. 또한, Tmax는 0.73시간으로, 초기 채혈시간을 0.17, 0.33, 0.5시간으로 설정하는 것은 최고혈중농도 도달전 적어도 2시점 이상 채혈해야 한다는 생물학적동등성시험 기준을 만족하였다.
5. 연구개발결과의 활용결과 및 계획
최근 국내에서 약사법 개정으로 대체조제 허용범위가 생물학적동등성시험 입중 품목으로 한정되었다. 따라서, 생물학적동등성시험 실시의 확대가 예상되어 정부 관련 부처에서는 생물학적동등성시험 실시의 효율성을 극대화하기 위하여 의•약계가 공동으로 참여하는 활성화방안을 추진하고 있다. 본 연구에서 몰시도민의 혈중 농도 분석방법 중 간편하고 우수한 분석법을 확립하여, 지침을 작성함으로써 생물학적동등성시험의 활서화 및 효율화에 기여할 수 있다. 이것은 몰시도민 제제의 생물학적 동등성시험 기간 단축 및 비용절감으로 이어질 수 있을 것이다.○ 연구목표 : 몰시도민 제제의 생체이용률시험을 통하여 동 제제의 표준 생물학적동등성시험의 지침을 제시하는 것을 목적으로 한다. 또한, 동 제제의 표준 생물학적동등성시험 지침 제시를 통한 생물학적동등성시험의 활성화 및 약효동등성시험 관리의 효율화에 기여 하고자 한다.
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다국어 초록 (Multilingual Abstract)

The purpose of the present study was to develop a generalized assay procedure for the bioequivalence test of molsidomine formulations. In addition, we studied whether the assay for molsidomine is applicable in a bioequivalence testing for molsidomine formulations according to guideline set by the Korea Food and Drug Administration. A simple, specific and sensitive HPLC assay method using UV detection (312 nm) for molsidomine in plasma was evaluated and validated. The peak of the drug was readilty separated from endogenous peaks of the plasma on a Luna C-18 reversed-phase HPLC column with a mobile phase of phosphate buffer 0.01M (pH 4.5) · acetonitril (77:23 v/v%). Propranolol solution (50㎍/㎖ in acidic methanol, internal standard) was added to an aliquot of human plasma (2 ㎖) . After vortex mixing of 30 seconds, 1,2-dichloroetnane (8 ㎖) was added to the sample. The mixture was vortexed vigorously for 2min and then was centrifuged at 3,000rpm for 10 min. The 6㎖ supernatant was collected and evaporated on a Speed vac. The resulting residue was reconstituted with an aliquot (200 ㎕) of mobline phase. An 100㎕ aliquot of the reconstitution was injected onto an HPLC system. The HPLC assay is linear over the the molsidomine concentration range (i.e., 2-50 ng/㎖) in plasma. The validation data indicated that the assay has an acceptable intra-day and inter-day accuracy and precision. The coefficients of variation for all criteria of validation were less than 20% down to the quantification limit (2 ng/㎖) and less than 15% in the other concentrations. To further study the usability of the assay, a bioavailability study of the Molsiton tablet ® (2mg), a formulation of molsidomine, was conducted. Twenty four healthy Korean subjects were received each formulation at the single, oral dose of 4 mg of molsidomine. AUC was calculated by the linear trapezoidal method. Cmax and tmax were compiled from the serum drug concentration-time data. The half life value (t₁/₂), Cmax, tmax and AUC∞ were calculated to be 1.78±0.45 hr, 46.19±18.58ng/㎖, 0.73±0.53 hr and 117.52±51.46 ng · hr/㎖, respectively. AUCt=₇hr was more than 80% of AUC∞, indicating that the last collection time of 7 hr for the blood samples may be applicable in the bioequivalence testing for molsidomine. In conclusion, the analytical procedure and bioequivalence testing for molsidomine appear adequate. Therefore, these observations suggest that the guideline proposed in this study may be applicable in subsequent bioequivalence test for molsidomine formulation.