임상검체에서 분리한 Imipenem 내성 세균의 특성 및 유전자형

국문 초록 (Abstract)

순천 한 병원의 입원된 환자로부터 임상 검체에서 imipenem 내성세균 56 균주를 분리하였다. 분리균을 동정하기 위해 생화학적 검사와 Vitek system을 이용하였으며 16S rRNA유전자와 gyrB 유전자 염기서열을 기초로 계통학적 분석을 실시하였다. 분리균은 Pseudomonas aeruginosa (29 strains; 51.8 %), Acinetobacter baumannii (21; 37.5 %), Enterobacter hormaechei (2), Pseudomonas monteilii (2), Pseudomonas beteli (1) 및 Pseudomonas geniculata (1) 으로 동정 되었다. β-Lactamase 유전자의 특이 시발체를 이용하여 증폭한 PCR 산물로 imipenem 내성 유전자형을 결정하였다. 대부분의 Acinetobacter baumannii 균주는 MBL유전자를 함유하지만 Pseudomonas aeruginosa 는 OXA 형 및 SHV 형의 β-lactamase 유전자를 가지고 있었다. 분리균들의 항생제에 대한 내성시험은 disc 확산방법과 Vitek GNS card를 이용 하였다. OXA형과 SHV 형의 β-lactamase를 함유한 균들보다 metallo-β-lactamase (IMP & VIM 형)유전자를 함유한 세균 들이 ceftazidime, aztreonam, amikacin 과 gentamicin 에 높은 내성을 보였다. 즉, Acinetobacter baumannii 균주가 Pseudomonas aeruginosa에 비해 항생제에 대한 내성이 높았다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Imipenem-resistant bacteria were isolated from clinical specimens taken from hospitalized patients in Suncheon, Korea. Fifty-six isolates were identified by the biochemical tests and Vitek system. Phylogenetic analyses were carried out based on 16S rRNA gene and gyrB gene sequence comparisons. Strains were affiliated with Pseudomonas aeruginosa (29 strains; 51.8 %), Acinetobacter baumannii (21; 37.5 %), Enterobacter hormaechei (2), Pseudomonas monteilii (2), Pseudomonas beteli (1) and Pseudomonas geniculata (1). Imipenem-resistant genotype was determined by the amplification of β-lactamase gene with the specific primers. Most of the Acinetobacter baumannii strains contained MBL gene, but Pseudomonas aeruginosa did OXA and SHV type β-lactamase gene. Antibiotic resistance of the isolates was determined using the disc diffusion method and Vitek GNS card. Strains containing metallo-β-lactamase gene (IMP & VIM) were more resistant to antibiotics ceftazidime, aztreonam, amikacin and gentamicin than the strains containing OXA and SHV type of β-lactamase.

목차 (Table of Contents)

• Ⅰ. 서론 = 1
• 1. Imipenem 내성세균의 역사 = 1
• 2. Imipenem 내성세균의 중요성 = 4
• 3. Imipenem 내성세균의 특성 = 6
• 4. 연구의 목적 = 8
• Ⅱ. 재료 및 방법 = 9
• 1. 대상 균주 = 9
• 2. 균주의 동정 = 9
• 2.1.전통적인 생화학적 검사 = 9
• 2.2. Vitek 32를 이용한 생화학적 검사 = 11
• 2.3. 계통분류학적 연구 = 11
• 2.3.1. Genomic DNA 추출 = 11
• 2.3.2. 16S rRNA 유전자 증폭 및 염기서열 분석 = 12
• 2.3.3. Gyrase B (gyrB) 유전자 증폭 및 염기서열 분석 = 13
• 2.3.4. 염기서열의 계통 분석 = 13
• 3. Hodge 변법 및 imipenem-EDTA disk 효과 시험에 의한 MBL 검증 = 14
• 3.1. Hodge 변법 (Modified hodge test) = 14
• 3.2. Imipenem-EDTA disc 효과 시험 (Imipenem-EDTA disc synergy test) = 15
• 4. PCR을 이용한 β-lactamase 유형 분석 = 16
• 5. 항생제 감수성 검사 = 17
• 5.1. 디스크 확산법 (Disc diffusion Method) = 17
• 5.2. 최소억제 농도 (Minimal inhibitory concentration, MIC) 측정 = 17
• 6. ERIC (Enterobacterial repetitive intergenic consensus) - PCR을 이용한 DNA지문 분석 = 18
• Ⅲ. 결과 = 19
• 1. 균주의 분리 = 19
• 2. 균주의 동정 = 20
• 2.1. 전통적인 생화학적 검사 및 Vitek 32에 의한 동정 = 20
• 2.2. 계통분류학적 분석 (16S rRNA유전자 및 gyrB 유전자 염기서열 분석) = 26
• 3. Hodge 변법 및 imipenem-EDTA disk 효과 시험 = 33
• 4. PCR을 이용한 β-lactamase 유형 분석 = 33
• 5. 분리균의 항생제 감수성 양상 = 34
• 5.1. 종에 따른 항생제 감수성 양상 = 34
• 5.2. 유전자형에 따른 항생제 감수성 양상 = 34
• 6. ERIC-PCR을 이용한 DNA 지문 분석 = 39
• Ⅳ. 고찰 = 43
• Ⅴ. 요약 = 45
• Ⅵ. 참고문헌 = 46