Overproduction of Synthetase(ch1 D)/ Oxidoreductase(ch1 E) in Escherichia coli. = 대장균에서의 synthetase와 oxidoreductase의 대량생산

국문 초록 (Abstract)

Chlorothricin생합성 과정에 관여하는 여러 유전자 중에서 특히 sugar chain에 관여한 synthetase와 oxidoreductase의 유전자를 분리하여 동시에 대장균에서 대량으로 두 효소를 얻을 수 있는가를 연구하였다. 두 효소는 pFS에서 Sma I의 제한효소로 2.8kb의 유전자를 low melting agarose gel로 분리하였다. 이것을 pBluescript SK phagemid에 ligation시킨 후 E. coli XLI-Blue MRF에 전이 시킨후 두 유전자가 들어있는 대장균 주를 분리하였다. Synthetase의 활동도를 측정하기에는 어려운 점이 많으므로 두 효소의 최종 화합물인 d-TDT-4-keto-6-deoxyhexose의 양으로 specific activity를 측정하였다. Oxidase의 활동도 을 측정하였을 때 specific activity는 6.5배 증가하였다. Glucose-6-phosphate를 이용하여 synthetase 및 oxidoreductase를 동시에 측정하였을 경우 blank 실험보다 1.8배 증가하였다. 이러한 실험결과는 oxidoreductase는 대량 생산된 반면 Synthetase의 양은 소량 증가된 것으로 사료된다.