배추에서 發現된 遺傳子의 DNA 鹽基 配列 順序 標的 作成 = Generation of random sequence tags of cDNA clones expressed in brassica campestris L. var. pekinensis makino

국문 초록 (Abstract)

식물 고유의 현상을 분자 수준에서 이해하고 식량자원, 의약품 및 공업원료등으로 응용하기 위해서는 유전자의 분리, 확인이 필요하다. 이러한 목적의 일환으로 우리나라에서 수요가 많은 식물 자원의 하나인 배추의 유전자원을 대량 확보하기 위하여 cDNA 유전자은행을 제작하여 λZAP 벡터에 클로닝 하였다. 무작위로 30개[명소 발아 유묘체(19개), 암소 발아유묘체(10개),꽃봉오리(1개)]의 클론을 선택하여 부분 염기 서열을 Sanger법으로 결정하였다. 이들을 GenBank와 GenPept database를 이용하여 상동성을 비교하였다. 그 결과 14 ESTs와 16 unknown sequencne tags를 얻었다. ESTs 2개는 88 percent 이상의 높은 amino acid 상동성을 보였다. 하나는 Arabiodopsis thaliana의 gylceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase를, 다른 하나는 carbonic an-hydrase를 coding 하는 cDNAs 이다. 한편 꽃봉오리 유전자 은행에서 특유하게 발현된 unknown sequencne tags(BAN 229)의 분자 구조를 규명하고자 꽃 유전자 은행 (λZAP/DASH II를 이용)을 작성하였다. 이 유전자 은행에서 9개의 예비 클론을 선발한 후, Northern과 Southern blot 분석을 통하여 2.4Knt 크기의 BAN 229 genomic DNA를 분리하는데 성공하였다. 이 DNA의 제한효소(BstXI과 Xhol,EcoRV, KpnI, Szcl)지도를 작성한 후, full DNA sequencing을 수행하였다. 본 실험에서 작성한 4개의 유전자은행은 배추는 물론 고등 식물 유전자원 확보에 요긴하게 쓰일 것이다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Random Nucleotide Sequence Tags expressed in a species has a good value to clone a gene. Some 30 clones randomly chosen from three cDNA libraries of Brassica, were partially sequenced by the Sanger to generate 14 ESTs and 16 unknown sequence tags. The three cDNA gene libraries were constructed using λZAP-cDNA synthesis/Gigapack Gold packaging kits. Poly A' RNAs were obtained from the three different sources(l0-day-old seedlings grown under the light, or dark and immature flower bud) by the method of oligo-dT cellulose chromatography. About one million clones were able to obtain from the each gene library. All the clones examined so far had insert DNAs, The DNA sequences were compared with those registered in the GenBank and GenPept databases to figure out nucleotide as well as amino acid sequence homologies. Two ESTs showed significant similarities to the enlisted sequences. They are cDNAs for glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (chloroplast subunit), and carbonic anhydrase of Arabidopsis thaliana. A genomic DNA of a cDNA clone expressed only in the anther (unknown sequence tag, BAN 229), was isolated from a immature flower bud ginomic library. The genomic library was constructed by the use of λZAP/DASH I1 cloning kit. The BAN 229 genomic DNA is 2.4knt long. The restriction endonuclease map of the BAN 229 gene was constructed. The full DNA sequences of the gene is under investigation. The cDNA and genomic libraies constructed here are being used to isolate more genes in Brassica.

목차 (Table of Contents)

• 목차
• 목차 = iv
• 약어목록 = vi
• 그림목록 = viii
• 도표목록 = ix
• 서론 = 1
• 재료 및 방법 = 4
• A. 재료 = 4
• 1. 시약, 효소 및 방사선 동위원소 = 4
• 2. 재료 = 5
• B. 방법 = 4
• 1. cDNA 유전자 은행 제조 = 6
• 2. 유전자 (cDNAs,Genomic DNA)의 부분 염기서열 결정; ESTs 생산 = 8
• 3. Northern 및 Southern Blot 분석 = 9
• 4. Genomic 유전자 은행 제조 및 선별 = 10
• 5. Genomic 유전자의 제한 효소 지도 작성 = 11
• 결과 = 12
• 1. Expressed Sepuence Tags 작성 = 12
• 2. 꽃 특이 발현 cDNA와 Genomic DNA(BAN 229) 의 특성 = 14
• 1) cDNA,BAN 229의 Subcloning = 15
• 2) BAN 229 cDNA 클론의 조직 발현 특이성 = 15
• 3) BAN 229 Genomic 클론의 분리 = 16
• 4) BAN 229 Genomic DNA의 제한효소 지도 작성 = 16
• 고찰 = 28
• 참고문헌 = 30
• 부록 = 36
• 국문요약 = 44
• ABSTRACT = 46