플로로글리시놀의 생체이용률시험 및 생물학적동등성시험 지침 작성 = Bioavailability study to establish bioequivalence guidances of phloroglucinol

국문 초록 (Abstract)

Ⅰ. 제목
플로로글리 시 놀의 생 체 이 용를시 험 및 생 물학적 동등성 시 험 지 침 작성
Ⅱ. 연구개발의 목적 및 필요성
본 연구과제에서는 3개 시험기관에서 플로로글리시놀의 혈장 중 분석방법을 검증하여 분석조건을 확립하고 생체이용률 시험을 실시하여 표준 생물학적동등성시험 지침을 마련함으로써 향후 실시될 플로로글리시놀제제의 생물학적동등성 시험의 효율성을 증대시키고 효과적인 약효동등성 평가와 시험결과의 신뢰성 및 객관성 확보를 도모하고자 하였다.
Ⅲ. 연구개발의 내용 및 범위
플로로글리시놀의 생체이용률시험을 위하여 3개 시험기관은 사전협의 및 각 기관별로 분석법 validation을 통하여 플로로글리시놀의 혈장 중 분석조건을 확립하였고, 각각 확립된 분석법을 비교 고찰하여 표준분석법을 제시하였다. 이 분석방법으로 3개 기관은 순차적으로 각각 생체이용률시험을 실시하였다. 생체이용률시험은 각 기관에서 플로로글리시놀제제의 대조약을 가지고 건강한 성인 8인의 피험자를 대상으로하여 실시하여 약동력 파라미터인 혈중농도곡선아래면 적 (AUC)，최고혈 중농도 (Cmax), 최고혈중농도 도달시간(Tmax)，소실속도정수(Kd), 소실반감기(T1/2시를 구하였다. 또한，주관기관에서 각 기관의 시험결과를 총괄 검증하여 최종 플로로글리시 놀의 표준 생물학적 동등성시험 지침을 작성하였다.
IV. 연구개발결과
플로로글리시놀의 혈장 중 분석법을 HPLC/MS를 이용하여 3개 기관에서 검증하여 확립하였다. 본 분석 방법에서 플로로글리시놀의 피이크의 유지시간은 3.2-43분，내부표준물질의 피이크의 유지시간은 5.4-5.8분이었으며，분석조건에서 플로로글리시놀 및 내부표준물질은 기타 혈장성분들과 잘 분리되었다. 검량선의 농도범위는 10, 20, 50, 100, 200, 500, 1000 매/교에서 양호한 직선성이 관찰되었다. Validation 결과 CV%는 일내 정밀성이 10.8%이하, 정량한계농도에서의 일내 정밀성은 16.3%이하였고，일간 정밀성은 10.0%이하, 정량한계농도에서의 일간 정밀성은 12.2% 이하였으며，정확성은 96.1%-114.4%，정 량한계 농도에서의 정확성은 99.0-107.0%였으며 정량한계는 10 ng/mL이었다. 이상의 결과로부터 혈장 중 플로로글리시놀에 대한 본 분석방법은 인체에 대한 생체이용률시험에 이용될 수 있는 충분한 감도，특이성, 직선성，정확성 및 정밀성이 있음을 알 수 있었다. 본 분석방법을 이용하여 3개 기관에서 플로로글리시놀 160 mg을 설하투여하여 생체이용률시험을 실시한 결과 산출된 AUCt는 564.07 ± 247.00 ng.hr/mL，Cmax는 488.16 ± 233.94 ng/mL, Tmax는 0.57 土 0.24 hr, Ke는 0.30±0.18 hr⁻¹, t₁/₂는 3.12 ±1.71 hr이었다.
V. 연구개발결과의 활용결과 및 계획
플로로글리시놀의 생체이용률시험을 실시하여 얻은 약동 학적 과라미터를 토대로 플로로글리시놀의 생물학적동등성시험의 표준지침을 작성함으로써 향후 이 제제의 생물학적동등성시험의 실시와 평가에 있어 효율성을 증대시킬 수 있다.○ 연구목표 : 본 연구과제에서는 3개 시험기관에서 플로로글리시놀의 혈장 중 분석방법을 검증하여 분석조건을 확립하고 생체이용률 시험을 실시하여 표준 생물학적동등성시험 지침을 마련함으로써 향후 실시될 플로로글리시놀제제의 생물학적동등성 시험의 효율성을 증대시키고 효과적인 약효동등성 평가와 시험결과의 신뢰성 및 객관성 확보를 도모하고자 하였다.
○ 연구내용 : 플로로글리시놀의 혈장 중 분석법을 HPL C /M S를 이용하여 3개 관에서 검증하여 확립하였다. 본 분석방법에서 플로로글리시놀의 피이크의 유지시간은 3.2-4.3분, 내부표준물질의 피이크 의 유지시간은 5.4-5.8 분이었으며, 분석조건에서 플로로글리시놀 및 내부표준물질은 기타 혈장 성분들과 잘 분리되었다. 검량선의 농도범위는 10, 20, 50, 100, 200, 500, 1000 ng/mL에서 양호한 직선성이 관찰되었다. Validation 결과 CV%는 일내 정밀성이 10.8%이하，정량한계농도에서의 일 내 정밀성은 16,3 %이하였고，일간 정밀성은 10.0 %이하, 정량한계농도에서의 일간 정밀성은 12.2% 이하였으며，정확성은 96.1%-114.4%, 정량한계농도에서의 정확성은 99.0-107.0%였으며 정 량한계는 10 ng/mL이었다. 이상의 결과로부터 혈장 중 플로로글리시놀에 대한 본 분석방법은 인 체에 대한 생체이용률시험에 이용될 수 있는 충분한 감도，특이성，직선성/ 정확성 및 정밀성이 있음을 알 수 있었다. 본 분석방법을 이용하여 3개 기관에서 플로로글리시놀 160 mg을 설하투여하여 생체이용률시 험을 실시한 결과 산출된 AUCt는 564.07 ± 247.00 ng.hr/mL，C_ 는 488.16 ± 233.94 ng/mL, Tmax는 0.57±0.24 hr, Ke는 0.30±0.18 hr¹ , t₁/₂는 3.12 ±1.71 hr이었다.
○ 연구성과 (응용분야 및 활용범위포함) : HPLC/MS를 이용한 혈중의 플로로글리시놀의 정량법을 3개 기관에서 검증하여 표준화된 분석법을 확립하였으며 3 기관에서 순차적으로 생체 이용률시험을 실시하여 약동 력적 파라미터를 구하였다. 이 결과를 바탕으로 플로로글리시놀의 생물학적동등성 시험 표준 지침을 작성함으로써 향후 플로로글리시 놀의 생물학적동등성시험의 실시와 평가에 있어 효율성을 증대시키는데 기여 할 수 있으리라 예상된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Phloroglucinol (benzene-1，3,5_triol) is used as a smooth muscle relaxant. It has no anticholinergic potency and appears to be less toxic than most other antispasmodic agents. Previously reported methods for the determination of phloroglucinol are scanty and bioavailability of phloroglucinol have not been thoroughly studied. The study was conducted to investigate the bioavailability of phloroglucinol, administered after oral single dose in healthy volunteers. Phloroglucinol was given to twenty-four healthy volunteers (160 mg) and blood samples were drawn for 12 h. Phloroglucinol plasma levels were determined by a specific and sensitive liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) method The sample was prepared for injection using a liquid-liquid extraction method, with resorcinol as the internal standard. The method has been validated in a linear range of 10-1000 ng/ml. The precision and accuracy of the assay, reproted as coefficients of variation, were below 15%. After single oral administration, the peak plasma concentra仕on (Cmax) of 488.16 土 233.94 ng/mL was attained at 0.57 ±0.24 hr. The elimination half-life (ti/2) was 3.12 土 1.71 hr； the elimination rate constant was 0.30±0.18 hr-； and the area under the curve (AUC) was 564.07 土 247.00 ng · hr/mL.