재래식 메주로부터 분리한 Mucor racemosus f. racemosus PDA 103 유래 Fungal Protease의 정제 = Purification of Fungal Protease Produced by Mucor racemosus f. racemosus PDA 103 from Korean Traditional Meju

국문 초록 (Abstract)

한국의 재래식 메주로부터 분리한 M. racemosus f. racemosus PDA 103이 생산하는 protease를 분리·정제하였다. 먼저 기본배지[밀기울:1% glucose 함유 H_2O=1:1(w/v)]를 이용하여 배양한 후, 20 mM phosphate buffer, pH 6.2로 protease를 추출하고 80% 포화 황산암모늄에 의한 염석, CM Sephadex C50 ion-exchange chromatography와 두차례에 걸친 Sephadex G-100 gel filteration chromatography하여 비활성도 60.1 unit/㎎, 정제배수 83.5배로 효소를 정제하였다. 정제 효소의 순도는 YMC-pack protein-RP column chromatography에 의해 95% 이상인 것으로 나타났다. RP-HPLC 분석으로 분리된 주 peak를 분획하고 LC-MS를 이용하여 분자량을 확인한 결과 33,746 Da임이 밝혀졌으며 SDS-PAGE에 의한 분자량과 일치하는 점으로 보아 단백질 분자구조가 monomer 인 것으로 나타났다. 아미노산 조성분석 결과와 분자량으로부터 잔기수를 추정한 결과, M. racemosus f. racemosus가 생산하는 protease는 330잔기로 구성된 것으로 잠정 확인되었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

The protease produced by Mucor racemosus f. racemosus PDA 103 from meju was purified by precipitating with 80% saturated ammonium sulfate, CM Sephadex C-50 ion-exchange chromatography, and secondary Sephadex G-100 gel filtration chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 60.1 unit/㎎ protein and the purification fold of the enzyme was 83.5. The molecular weight of the enzyme was estimated 33,746 Da and the enzyme was elucidated as monomer by LC-MS and SDS-PAGE. The number of amino acids was evaluated about 330 residues.