HPLC/UV 및 LC-MS/MS를 이용한 발기부전치료제 유사물질의 신속한 동시분석법 개발 = Development of a Rapid Method for the Simultaneous Analysis of Anti-impotence Drug Analogues by HPLC/UV and LC-MS/MS

국문 초록 (Abstract)

총 9종의 발기부전치료제 (sildenafil, tadalafil, vardenafil, udenafil)및 발기부전치료제 유사성분 (aminotadalafil, hongdenafil, homosildenafil, hydroxyhomosildenafil, pseudovardenafil)을 대상으로 신속하고 간단한 HPLC/UV 분석법과 LC-MS/MS 분석법을 확립하였다. 확립한 HPLC/UV 분석법은 이전의 분석법과 비교 하였을 때, 보다 간단한 등용매 용리조건으로 8분 내에 분석이 완료되며, 좋은 분리능을 가진 것이 특징이다. 최적의 분석을 하기 위하여 칼럼은 monolithic RP-18e (4.6 × 100 mm)을 사용하였으며, 0.1% sodium 1-hexane sulfonate (pH 2.5) / acetonitrile (75 / 25, v/v)의 이동상 조성과, 40℃의 칼럼 온도, 230 nm의 파장에서 유속을 4.0 mL/min으로 유지시켰다. 다른 칼럼들에 비하여 유속의 변화를 다양하게 줄 수 있는 모노리틱 칼럼을 이용함으로써 유속을 4.0 mL/min까지 올려 좀 더 빠른 분석을 할 수 있었다. 확립된 LC-MS/MS 분석법은 ESI ionization mode에서 positive mode의 multiple reaction monitoring (MRM)을 이용하여 9종 발기부전치료제 유사물질을 선택적으로 3.5분 이내에 분석하였다. 분석법에 대하여 검증한 결과, 선택성, 직선성, 정밀성, 정확성이 양호하였다. 본 연구에서는 HPLC/UV와 LC-MS/MS를 통하여 발기부전치료제 유사물질 9종이 동시에 분석 가능함을 보여주었으며, 확립된 분석법을 통하여 불법적으로 첨가되는 발기부전치료제 유사물질을 빠르고 편리하게 분석하는데 실질적인 도움이 되고자 하였다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

The simple, rapid and reliable HPLC/UV and LC-MS/MS method for the simultaneous determination of anti-impotence drugs (sildenafil, tadalafil, vardenafil and udenafil) and anti-impotence drug analogues (aminotadalafil, hongdenafil, homosildenafil, hydroxyhomosildenafil and pseudovardenafil) in foods were developed. Applying isocratic elution, highly efficient separation was achieved together with drastically reduced analysis time (ca. 8 min) compared to published HPLC methods. All compounds were separated on a monolithic RP-18e (4.6 × 100 mm) with 0.1% sodium 1-hexane sulfonate (pH 2.5) / acetonitrile (75 / 25, v/v ) at a flow rate of 4.0 mL/min and a detector set at 230 nm. Although the flow rate was increased, the resolution was maintained using monolithic column. Specific determination of nine standards was also accomplished by a triple quadrupole tandem mass spectrometer equipped with electrospray ionization source (ESI). Multiple reaction monitering (MRM) in the positive mode was used to enhance selectivity of detection. Validation experiments have shown that the assay has good precision and accuracy over a wide concentration range. This method has been successfully applied to determination of the illegally added ingredients.

목차 (Table of Contents)

• Ⅰ. 서론 = 1
• Ⅱ. 실험재료 및 방법 = 7
• 1. 시약 및 기기 = 7
• 2. 표준액 조제 = 8
• 3. 발기부전치료제 유사물질의 동시분석법 개발 = 9
• 3.1. TLC를 이용한 신속한 스크리닝 분석 = 9
• 3.2. HPLC/UV 분석법의 개선 = 9
• 3.3. LC-MS/MS 분석 조건 = 10
• 3.4 분석법의 검증 = 11
• 3.4.1. 선택성 = 11
• 3.4.2. 직선성 = 11
• 3.4.3. 정밀성 및 정확성 = 11
• 3.4.4. 정량한계 = 12
• Ⅲ. 결과 및 고찰 = 13
• 1. TLC를 이용한 발기부전치료제 유사물질의 신속한 스크리닝 분석개발 = 13
• 1.1. TLC 분석 조건 = 13
• 2. HPLC/UV를 이용한 발기부전치료제 유사물질의 분석법 개발 = 15
• 2.1. HPLC/UV 분석법의 개선 = 15
• 2.1.1. 칼럼 선택 = 15
• 2.1.2. 이동상 pH 선택 = 20
• 2.1.3. 칼럼 온도 선택 = 22
• 2.1.4. 이동상 조성 선택 = 24
• 2.1.5. 유량 선택 = 25
• 2.1.6. 분석법을 활용한 건강기능식품의 분석 = 27
• 2.2. 분석법의 검증 = 28
• 2.2.1. 직선성 = 28
• 2.2.2. 정밀성 및 정확성 = 31
• 2.2.3. 정량한계 = 34
• 3. LC-MS/MS를 이용한 발기부전치료제 유사물질의 분석법 개발 = 35
• 3.1. LC-MS/MS 분석법 = 35
• 3.2. 분석법의 검증 = 42
• 3.2.1. 선택성 = 42
• 3.2.2. 직선성 = 44
• 3.2.3. 정밀성 및 정확성 = 46
• 3.2.4. 정량한계 = 48
• Ⅳ. 결론 = 49
• Ⅴ. 참고 문헌 = 51
• Ⅵ. 국문 초록 = 56
• Ⅶ. Abstract = 57