효소면역측정법을 이용한 Fumonisin의 검출법 개발 = Development of Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Fumonisins

국문 초록 (Abstract)

Fumonisin에 대한 효소면역측정법(ELISA)을 개발하기 위하여 특이항체를 생산하고, 분석조건을 확립하여, 인위적으로 오염시킨 옥수수 시료의 분석을 행하였다. Fumonisin B_1 (FB_1)을 cholera toxin (CT)에 결합시킨 FB_1-CT conjugate를 면역원으로 하여 Freund's adjuvant와 함께, 또는 단독으로 두 군의 토끼에 면역하고 특이항체를 생산하였다. 항혈청을 ELISA로 분석한 결과 그 adjuvant와 함께 면역한 경우 항체역가(titer)가 높게 나타났다. 가장 높은 항체역가(1 : 16,000)를 나타낸 항혈청 및 그로부터 정제한 항체를 이용하여 간접법 및 직접법에 의한 경합적 ELISA(ciELISA 및 cdELISA)를 각각 확립하였다. 이 항체의 유사독소와의 교차반응을 ciELISA로 조사하였을 때, FB_3에 대한 교차반응율은 2%로 매우 낮았으나, FB_2에 대한 것은 179%로 다소 높았다. FB_1의 검출한계는 ciELISA에서 0.03ppb, cdELISA에서 0.3 ppb로 각각 나타났다. 실제 곡물시료의 분석에 ELISA 활용가능성을 조사하기 위하여 인위적으로 FB_1을 오염시킨 옥수수를 75% methanol로 추출하고 그 회수율을 측정한 결과, 분석이 불안정하여 회수율이 일정하게 나타나지 않았다. 그러나 방해물질의 제거를 위하여 시료추출액을 strong anion exchange(SAX) cartridge를 거쳐 세척한 다음 분석하였을 때, 3~10 ppm 범위의 FB_1 오염 옥수수에서 평균 34%(CV의 평균, 8.2%)의 안정된 회수율을 보였다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

In order to develop enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for fumonisins, production of specific antibodies, establishement of ELISA conditions, and quantitation of the toxin from spiked corns by ELISA were performed. Fumonisin B_1 (FB_1) conjugated to cholera toxin (CT) with or without Freund's adjuvant was subcutaneously injected into 2 groups of rabbits. When the titer of the antisera produced by each rabbit tested, higher titer was observed in case of the immunization with the adjuvant. By use of the antiserum showing the highest titer (1 : 16,000) and its purified antibodies, competitive indirect and direct ELISA's (ciELISA and cdELISA) were established, respectively. When the cross-reactivity of the antibody against fumonisin analogs was investigate by the ciELISA is was very low against B_3 (2%) but high against fumonisin B_2 (179%). The sensitivity of the ELISAs was also very high, because the detection limit for FB_1 was 0.03 ppb in ciELISA and 0.3 ppb in cdELISA. When the ELISA's were applied to the spiked corns after extraction with 75% methanol, the assay recovery of FB_1 was too unstable to assay. However, when cleanup by strong anion exchange (SAX) cartridge was introduced to remove interfering materials, the mean ELISA recovery of FB_1 from corns spiked to 3~10 ppm was found to be 34.0% and stable (mean of CV, 8.2%).