인간비만세포에서 트립타아제 유전자 발현에 전사인자 MITF-A 아형이 미치는 영향

이선희 전북대학교 대학원 2009 국내석사

Mast cells play a central role in initiation and development of allergic diseases through release of various mediators. Tryptase may be a key mediator in mast cell-mediated inflammatory reactions. In the present study, we investigated whether the transcription of tryptase gene in human mast cells was involved in mi transcription factor (MITF). We observed that the human CD34+ progenitor drived cultures and HMC-1 cell line mast cells expressed strongly MITF-A, which is one of MITF isoforms. The overexpression of MITF-A elevated the production of tryptase in the immature human mast cell line HMC-1, while the introduction of specific siRNA against MITF attenuated their expression. Moreover, the transfection of MITF-A overexpression vector and tryptase promoter region-harboring reporter plasmid into Jurkat cells (MITF-negative) increased significantly the luciferase activity. Using mutant constructs of tryptase promoter, we identified that two E-box (CANNTG) motifs associate with MITF-A to transactivate tryptase gene. An experiment by EMSA also showed that these E-box are able to bind to MITF for tryptase gene transcription. These data suggest that MITF might play a role in regulating the transcription of tryptase gene in human mast cells. 비만세포는 다양한 알러지 유발 매개물을 통해 일어나는 알러지의 개시와 전개에 중요한 역할을 한다. 단백질분해 효소인 트립타아제는 비만세포 매개 염증반응의 중요한 매개물이다. 전사인자 MITF (mi transcription factor)는 bHLH-Zip(basic- helix-loop-helix-leucine zipper) 단백질계에 속하는 분자이다. 비만세포의 분화 및 특이적 단백분해효소들의 전사활성을 조절하는 중요한 전사인자임이 보고되었으며, 세포조직에 따라 다수의 MITF아형이 발현하고 있음이 알려졌다. 최근 마우스 골수유래 비만세포에서 MITF 아형 중MITF-A가 강하게 발현함을 보고하였다. 본 연구자는 인간비만세포에서의 트립타아제 유전자의 전사활성이 MITF와 관련함에 대하여 연구하였다. 이를 위해 인간 제대혈에서 전구세포를 분리하여 IL-3, SCF, IL-6존재 하에서 8주 이상 배양하여 성숙 및 분화 시킨 비만세포와 비만세포 세포주를 RT-PCR법을 통해 MITF아형 및 트립타아제 아형 mRNA발현을 분석하였다. 배양된 비만세포 세포주에서 전사인자 MITF-A, -E, H 의 다양한 mRNA가 강하게 발현함을 관찰하였다. 그러나 제대혈로부터 분화된 비만세포에서는 전사인자 MITF-A만 발현하고 있음을 관찰하였다. 트립타아제 아형 mRNA는 세포주와 제대혈로부터 분화된 비만세포주 모두에서 트립타아제 베타1 만이 발현함을 관찰하였다. 따라서 MITF-A가 트립타아제 전사 활성을 조절하는지 여부를 확인하기 위해 전사인자 MITF-A강제발현 프라스미드를 합성하였고, 트립타아제 프로모터영역을 삽입한 repoter 벡터 그리고 이들을 일정크기로 삭제하거나 점돌연변이 시킨 프라스미드를 제작하였다. 강제발현 프라스미드를 트립타아제 프로모터 프라스미드와 함께 Jurkat 세포에 형질도입 하였을 때. 트립타아제 전사활성이 MITF-A의 형질도입에 의해 의미 있게 증가됨을 확인하였다. 트립타아제 프로모터 영역을 일정크기로 단계적으로 삭제한 reporter 프라스미드를 HMC-1에 형질도입 할 경우 -817~-715 사이와 -421~-202 사이의 프로모터 영역이 삭제된 경우에서 Luciferase 활성이 유의적으로 감소함을 관찰하였다. 이 영역에 MITF 결합예상부위인 E-box (CANNTG)가 각각 1개씩 존재하였다. 이들 결합부위를 점돌연변이 시킨 reporter 프라스미드를 HMC-1에 도입 할 경우 전사 활성이 감소함을 확인하였다. EMSA에서 또한 두 전사인자결합부위 모두에 MITF가 결합을 확인하였다. 한편, 미성숙 비만세포주에 MITF-A의 강제발현에 의해 트립타아제 생산이 증가되었으며 MITF 특이적siRNA 의해 트립타아제 생산이 감소되었다. 이러한 결과들은 전사인자 MITF-A가 인간 비만세포에서 트립타아제 프로모터의 E-box 와 결합하여 트립타아제 전사를 조절하는 중요한 인자 일 것으로 사료된다.

Anti‐allergic effects of Chicoric acid of Taraxacum on allergic responses in human mast cell : 蒲公英에 함유된 chicoric acid의 항알레르기 효과

엄예진 상지대학교 일반대학원 2015 국내석사

Background and objectives: Currently, Many people are suffering from chronic allergic inflammatory diseases, such as atopic dermatitis, allergic rhinoconjunctivitis. Unfortunately, there is no definitive treatment of allergic disease. Chicoric acid is the component of Taraxacum. Although, anti‐inflammatory and anti‐oxidative properties of chicoric acid were investigated in several studies, anti‐allergic effects and mechanisms on late‐phase reaction of allergic response in human mast cells (HMC‐1 cells) have not been reported. The aim of this study is to investigate the basic mechanisms about anti‐allergic inflammation effects of chicoric acid in vitro. Methods: HMC‐1 cells were incubated with chicoric acid (6.25, 12.5, 25 and 50 µM) and 20 nM of phorbol 12‐myristate 13‐acetate plus 1 µM of A23187 (PMACI). Cytotoxicity was measured with a 3‐(4, 5‐dimethylthiazol‐2‐yl)‐2, 5‐diphenyl‐tetrazolium bromide (MTT) assay. Pro‐inflammatory cytokines productions were measured with enzyme‐linked immuno sorbent assay (ELISA). Expressions of mRNA and protein were measured with real‐time polymerase chain reaction (PCR) and Western blot analysis. Results and conclusions: Chicoric acid significantly suppressed the expression of tumor necrosis factor‐alpha (TNF‐α), interleukin‐6 (IL‐6) in PMACI‐activated HMC‐1 cells by inhibit mRNA expression. Furthermore, chicoric acid reduced the activation of nuclear factor‐kappa B (NF‐κB), mitogen‐activated protein (MAP) kinase pathway and caspase‐1. These results suggest that chicoric acid probably prove to be a useful agent for treating anti‐allergic inflammation diseases. Key words: Chicoric acid; Taraxacum; Anti‐allergic effects; Human mast cell (HMC‐1 cells) 최근 아토피성 피부염, 알레르기성 비염과 같은 만성 알레르기성 염증성 질환으로 고통 받는 인구가 증가하였으나 아직까지 알레르기 질환의 효과적인 치료방법은 없었다. 따라서 알레르기 질환 치료에 효과적인 성분을 찾는 것이 전 세계적인 관심사로 대두되고 있다. 포공영 뿌리의 주성분인 chicoric acid는 페놀 화합물의 일종으로써 항산화작용, HIV‐1 억제효과, 인슐린 분비 자극, 항염 작용 등이 보고되어 있으나 알레르기 염증 반응 조절기전에 대한 연구는 아직 보고된 바 없다. 본 연구에서는 염증 유발된 HMC‐1에서 chicoric acid가 알레르기 염증 반응을 효과적으로 억제하는가를 관찰하였다. 연구 결과 chicoric acid는 TNF‐α, IL‐6 와 같은 염증성 사이토카인의 발현을 감소시켰으며 pro‐caspase‐1의 분해 억제를 통해 caspase‐1의 활성을 효과적으로 억제하였다. 또한 이러한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과는 IκBα의 분해 억제를 통한 NF‐κB의 핵 내 이동 및 활성화 억제와 JNK, ERK, p38의 인산화 억제를 통한 MAPK 신호전달경로의 억제 기전을 통한 것임을 확인하였다. 결론적으로, chicoric acid는 염증성 사이토카인의 발현을 차단하여 비만세포 유래 알레르기 염증 반응을 효과적으로 조절하는 것으로 확인되었다. 이러한 연구 결과를 바탕으로 포공영에 함유된 chicoric acid가 알레르기질환 치료에 효과적인 후보약물이 될 수 있을 것이라 사료된다.

Xanthone의 in vitro 및 in vivo 모델 내 알레르기 접촉성 피부염 조절 효능 연구

Aye, Aye 전북대학교 일반대학원 2020 국내박사

Xanthone is a phenolic compound found in a few higher plant families such as gentian root. Xanthone has been known as having a variety of biological properties, such as anti-oxidant, anti-bacterial, anti-inflammatory and anti-cancer activities. However, the molecular and cellular mechanisms underlying the activity of xanthone in allergic contact dermatitis (ACD) remain to be explored. Therefore, the aim of this study was to investigate the regulatory effect of xanthone on allergic contact dermatitis in human keratinocytes (HaCaT), human mast cells (HMC-1) in vitro and in an experimental murine model in vivo. In the present study, treatment with xanthone reduced the production of pro-inflammatory cytokines and chemokine including interleukin (IL)-1β, IL-6, IL-8, and expression of chemokines thymus and activation-regulated chemokine (TARC) and macrophage-derived chemokine (MDC) in tumor necrosis factor (TNF)-α and interferon (IFN)-γ-stimulated HaCaT cells. Xanthone treatment also suppressed the production of pro-inflammatory cytokines, chemokine such as TNF-α, IL-6, IL-8, histamine and expressions of thymic stromal lymphopoietin (TSLP) in phorbol myristate acetate and calcium ionophore A23187 (PMACI)-stimulated HMC-1 cells. Furthermore, xanthone significantly suppressed the phosphorylation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs), nuclear factor-kappa B (NF-κB) signaling pathway and activation of caspase-1 in stimulated keratinocytes and mast cells. Additionally, xanthone administration alleviated epidermal hyperplasia in the murine model of 2,4-dinitrofluorobenzene (DNFB)-induced dermatitis by reducing the serum levels of immunoglobulin E (IgE), histamine, and pro-inflammatory cytokines and suppressing MAPKs phosphorylation. Xanthone administration also inhibited mortality due to compound 48/80-induced anaphylactic shock and suppressed the passive cutaneous anaphylaxis (PCA) reaction mediated by IgE. Collectively, these findings suggest that xanthone has a potential for use in the treatment of allergic inflammatory diseases. 잔톤(xanthone)은 용담초의 뿌리 등에서 발견되는 페놀성 화합물로 독특한 화학구조를 가지고 있다. 이것은 다양한 생리활성도 가지고 있어, 항산화, 항균, 항염증, 항암 효능 등이 보고되어 있다. 하지만, 잔톤의 알러지성 접촉성 피부염에 대한 효능 및 분자생물학적 기전은 거의 밝혀지지 않았다. 그래서, 본 연구에서는 인간유래 각질세포인 HaCaT, 인간유래 비만세포인 HMC-1와 동물모델을 이용하여 잔톤의 조절작용을 검토하였다. 잔톤은 tumor necrosis factor (TNF)-α, interferon (IFN)-γ로 자극된 HaCaT세포에서 interleukin (IL)-1β, IL-6, IL-8과 같은 전염증성 사이토카인의 생산을 감소시켰고, chemokines thymus and activation-regulated chemokine (TARC)과 macrophage-derived chemokine (MDC)의 발현을 억제하였다. 또한, 잔톤은 phorbol myristate acetate, calcium ionophore A23187 (PMACI)로 자극된 HMC-1세포에서 histamine과 TNF-α, IL-6, IL-8과 같은 전염증성 사이토카인의 분비를 억제하였고, thymic stromal lymphopoietin (TSLP)의 발현도 감소시켰다. 잔톤은 두 세포에서 모두 mitogen-activated protein kinase (MAPKs)의 인산화, nuclear factor-kappa B (NF-κB) 신호전달경로과 caspase-1의 활성화를 억제하였다. 2,4-Dinitrofluorobenzene (DNFB)으로 피부염을 유도한 동물모델에서 잔톤의 경구 투여는 혈청 immunoglobulin E (IgE), histamine, 전염증성 사이토카인의 감소를 통해 표피과형성을 억제하였다. 또한, 같은 모델에서 MAPKs의 인산화를 억제하였다. 더욱이, compound 48/80으로 유도된 anaphylactic shock 사망률과 IgE로 매개된 passive cutaneous anaphylaxis (PCA) 반응이 잔톤의 투여에 의해 감소되었다. 이러한 결과는 잔톤이 알러지성 염증 질환에 생리활성물질로 활용될 수 있다는 것을 보여주는 것이다.

Inhibitory effect of Semen Sinapis Albae on Immediate Hypersensitivity Reaction : 백개자의 즉시형 과민 반응에 대한 억제 효과

이규영 상지대학교 일반대학원 2014 국내석사

비만세포는 histamine, cysteinyl leukotrienes, cytokines, chemokines와 같은 염증 매개물질들을 분비함으로써 알레르기 질환의 발병에 중요한 역할을 한다. 또한 백개자는 천식을 비롯한 다양한 알레르기 질환의 치료에 흔히 사용되어 왔다. 하지만 아직까지 백개자의 항염증 및 항알레르기 작용과 관련하여 염증성 cytokine 발현 등에 중점을 두어 그 기전을 밝히는 연구는 이루어지지 않았다. 따라서 본 연구에서는 백개자 열수추출물이 활성화된 대식세포 및 사람 비만세포주, HMC-1에서 염증 반응을 효과적으로 억제하는가를 관찰하고자 하였다. 그 결과 백개자 열수추출물은 대식세포에서 LPS로 유도된 NO 생성 및 INOS, COX-2 단백질 발현을 농도 의존적으로 저해하였으며 HMC-1에서 PMACI로 유도된 히스타민의 생산과 p38 MAPK, ERK, JNK의 인산화 반응및 IκB-α의 분해와 NF-κB의 활성을 저해하였다. 백개자 열수추출물은 이러한 약리학적 작용을 바탕으로 대식세포 및 비만세포의 활성을 저해함으로써 최근 증가하고 있는 천식, 비염과 같은 알레르기 질환의 치료에 사용될 잠재성이 크다고 사료된다. Mast cells play an important role in the pathogenesis of allergic diseases through the release of inflammatory mediators such as histamine, cysteinyl leukotrienes, cytokines, and chemokines. Semen sinapis Albae (SSA, white mustard seed) has been used commonly for the treatment of various allergic diseases. The aim of our study was to examine whether the water extract of SSA (WSSA) modulates inflammatory reaction in stimulated human mast cells (HMC-1). WSSA decreased phorbol-12-myristate 13-acetate plus calcium ionophore A23187 (PMACI)-induced production of histamine in HMC-1 cells. WSSA inhibited PMACI-induced phosphorylation of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK), extracellular-regulated kinase (ERK), and c-Jun N-terminal kinase (JNK). In addition, WSSA suppressed nuclear factor (NF)-κB activation induced by PMACI, leading to expression of IκB-α degradation. These pharmacological actions of WSSA produce new suggestion that WSSA is a potential medicine for treatment of allergic diseases through the down-regulation of mast cell activation.

비만세포에서 용초와 양제근 복합처방의 알레르기 염증 억제 효과

강순식 경희대학교 대학원 2020 국내석사

The prevalence of allergic inflammation conditions such as allergic asthma, atopic dermatitis, and allergic rhinitis is increasing among modern-day people. These chronic diseases are common for both men and women of all ages, causing discomfort in everyday lives. In previous study, Rumecis Radix and Cordyceps militaris formula (YYF) have an anti-inflammatory effect on activated human mast cells. However, a regulatory effect of YYF on mast cell proliferation induced by thymic stromal lymphopoietin (TSLP) remains unclear. To identify an anti-proliferative effect and the fundamental mechanism of YYF, the author used a human mast cell line HMC-1. YYF increased the release of p53 and Bax. It also restored caspase-3 activity reduced by TSLP. YYF suppressed the release of murine double minute-2 protein, which is related to the regulation of p53 protein. Also, it decreased the level of interleukin (IL)-13 protein and mRNA. These findings suggest that YYF can be used as an effective material when developing an anti-inflammatory agents.

알레르기 매개 염증에 대한 바라후의 억제 효능에 관한 연구

이소연 전북대학교 일반대학원 2018 국내석사

사람 비만세포주(HMC-1)에서의 케모카인의 발현 양상

이희문 경희대학교 2000 국내박사

The mast cell is an essential effector cell in allergic inflammation through its capacity to respond to IgE dependent activation with release of both preformed and newly generated mediators. Mast cells also participate in the modulation of physiologic processes, but the role of mast cell in these processes is still unclear. Recently, the number of structurally defined chemoattractants for leukocytes has greatly increased, owing to largely to the identification of the chemokine superfamily. Chemokines are small proteins with molecular weights in the range of 8 to 12 kD and inducible in a number of pathophysiologic precesses. This study is aimed to examine the pattern of expression of chemokines in human mast cell line (HMC-1). HMC-1 were treated with PMA/ionophore and/or LPS and their induction of mRNA and protein were investigated by RT-PCR and ELISA. Messenger RNA of IL-8 , the representative CXC chemokine, was induced after PMA/ionophore treatment. All of the CC chemokines tested except eotaxin were induced after PMA/ionophore treatment and MIP-1α and MIP-1β were expressed their mRNA moderately in the resting state. CCR1, CXCR2, CXCR3 and CXCR4 were expressed in all test group regardless of activation. CCR3 was expressed only at 3 hours of activation. CCR2 and CXCR1 were not expressed in mast cell line. Production of chemokine protein was not detected in resting state and increased significantly after 3 hours of activation with PMA/ionophore. The effect of LPS treatment was negligible. MCP-1 protein was always produced without activation and accumulated in a time-dependent manner. These data suggest that the expression of mRNA and protein of chemokines and chemokine receptors are regulated transcriptionally and translationally. Human mast cell may respond to various stimuli by producing chemokines and their receptors to regulate their function and may act autonomously or through other inflammatory cell that they recruited.

Production and regulation of inflammatory cytokines in human mast cell line (HMC-1)

김미선 부산대학교 2002 국내박사

상백피가 사람정장에 의한 흰쥐 복강 비만세포의 활성화에 미치는 영향

배형운 전북대학교 대학원 1997 국내석사

Functional implications of spingosylphosphorylcholine in skin cells

최대경 충남대학교 대학원 2010 국내박사

Sphingosylphosphorylcholine (SPC) has been reported as a novel lipid mediator that exerts various actions on various cell type. The aim of this study is to evaluate the functional implications of spingosylphosphorylcholine in skin cells. First part, involvement of interleukin-6 (IL-6) in SPC-induced wound healing acceleration. We performed immunohistochemisty analysis to demonstrate the IL-6 induction by SPC. To analyze the signaling events, skin fibroblasts were treated with SPC, and then RT-PCR, ELISA, and Western blot analyses were carried out. SPC markedly induced interleukin-6 (IL-6) expression in rabbit ear wound. SPC also induced IL-6 expression at both themRNA and protein levels in human dermal fibroblasts cultured in vitro. SPC rapidly phosphorylated p42/44extracellularsignal-regulatedkinase(ERK). Pretreatment with PD98059, a specific MAPKkinase 1/2inhibitor, markedly suppressed SPC-inducedIL-6expression in a dose-dependent manner. Proteinkinase C(PKC) activation by phorbolmyristateacetate(PMA) potentiated IL-6 mRNA expression, whereas PKCinhibition by bisindolylmaleimide blocked SPC-induced p42/44ERK phosphorylation and IL-6 expression. Over-expression of PKC?? markedly induced the IL-6 expression and p42/44ERKactivation. These results suggest that SPC-induced IL-6 production is mediated by PKC-dependent p42/44 ERK activation in human dermal fibroblasts cultured in vitro. Second part, Sphingosylphosphorylcholine(SPC) induced pro-inflammatory signaling is mediated mast cell activation in skin. In the present study, we demonstrate that SPC stimulates the expression of IL-8 mRNA and protein levels in HMC-1 cells cultured in vitro, p42/44 ERK are involved in this process. In SPC injected rat model, hBD1 decreased in epidermis. And mast cell activation in dermis. SPC was further increased in this area by the finding that, in atopic dermatitis, there is increased expression of a previously unknown sphingomyelin acylase.(Fig. 2) As mentioned above, this enzyme breakdowns sphingomyelin to SPC. In whole epidermis from atopic dermatitis patients, sphingomyelin metabolism was significantly increased and was predominantly the result of sphingomyelin acylase activity [41,42]. SPC levels in atopic dermatitis epidermal lesions were 300% increased compared to control epidermis [43]. Although it is clear that levels of SPC are increased in atopic dermatitis epidermis, how this contributes to lesion formation is not known. For the effect of SPC mediated skin changes, we designed rat model(Fig. 10). Rats at 6 to 8 weeks of age were injected intradermally with 100 ??l of purified SPC(LSPC, DSPC) and TNF-alpha using a 10-gauge needle. We used at least eight rats for each experimental condition. After injection, rat skin biopsies were obtained 1, 3 and 7 days. In H&E stain of SPC injected rat skin(Fig. 11,12), TNF-alpha and SPC injected rat skins were slightly increased epidermal thickness then control(Fig. 11,12). The number of mast cells was increased in SPC injected rat skin from 1day and 1week after intra-dermal injection. AMPs downregulated in vivo and in vitro by SPC. Futher pro inflammatory cytokine secretion in HMC-1 cell. In summary, we have demonstrated that SPC induces mast cell activaion that this process is via the p42/44 ERK pathway. And AMPs downregulated in vivo and in vitro by SPC. Our results suggest that SPC may therefore act as a pro-inflammatory mediator in atopic dermatitis. 스핑고실포스포콜린(sphingosylphosphocholine,SPC)은 여러 라이소스핑고리피드에 속하는 것으로 여러 세포주에서 다양한 기능을 한는 것으로 보고되고 있다. 본 논문에서는 피부 세포에서 스핑고신포스포콜린의 기능적인 연관성에 대해 연구하였다. 첫 번째 부분에서는 피부에서 창상치유가 스핑고실포스포콜린에 의해 유도되어 가속화 과정에서 인터루킨-6가 연관이 된다는 내용이다. 이를 확인하기 위하여 토끼모델에서 스핑고실포스포콜린에 의해 인터루킨의 발현이 변화하는지 면역조직화학염색을 실시하였다. 또한 신호전달체계를 확인하기 위하여 사람피부의 섬유아세포를 이용하여 RT-PCR, ELISA와 Western blot을 통해 발현을 확인하였다. 토끼 귀의 상처에서 인터루킨-6이 스핑고신포스포콜린에 의해 증가되는것을 확인할 수 있었고, in vitro 상에서도 마찬가지고 mRNA나 protein 레벨을 증가시키는 것을 확인하였다. 스핑고실포스포콜리은 p42/44extracellularsignal-regulatedkinase(ERK)를 인산화 시키는 것으로 알려져 있는데 . PD98059(a specific MAPKkinase 1/2inhibitor)를 처리하였을때 농도가 증가함에 따라 인터루킨-6이 감소되는 것을 확인할 수있었다. Proteinkinase C(PKC)는 phorbolmyristateacetate(PMA)에 의해 인터루킨-6의 mRNA발현을 증가시키는데 PKC억제제를 처리하였을때 스핑고실포스포콜린에 의해 유도되는 인터루킨-6와 ERK의 발현을 감소시키는 것을 확인하였다. 또한 PKC??를 증가 시켰을 때, 인터루킨-6와 ERK의 발현이 유도되는 것을 확인하였다. 이상의 결과에서 in vitro상에서 사람의 섬유아세포에서 스핑고실포스포콜린에 의해 ERK의 발현증가에 따른 인터루킨-6가 증가하는 것이 PKC에 의한 거임을 알수 있었다. 두 번째 부분에서는 피부에서 외부자극에 초기 염증단계가 스핑고실포스포콜린에 의한 비만세포를 활성화와 연관이 있다는 실험이다. 기존의 연구에서 HMC-1 세포에서 인터루킨-8이 스핑고실포스포콜린에 의해 영향을 받는 데, ERK와 연관이 되는 것을 확인한 바 있다. 아토피 피부염 환자에서 스핑고실포스포콜린이 300%이상 증가되어 있다는 보고가 있다. 하지만 이런 현상에 대해 아직까지 확실하게 연구된 바는 없다. 본 실험에서는 동물모델을 디자인하여 in vivo상에서 실제로 SPC에 의해 rats 피부에서 아토피와 같은 변화가 있는 지 확인 하였다. 6-8주령의 SD-rat 등 쪽 피부에 스핑고실포스포콜린을 100 ??l 주사하였다. 이때 표피층이 대조군에 비해 약간 증가되는 양상을 보였고, AMPs의 하나인 hBD1의 발현이 표피에서 감소하는 것을 확인하였고 비만세포를 활성화 시키는 것을 확인하였다. 또한 HMC-1과 HaCaT에서 도 같은 양상을 보이는 데, HaCaT 세포에서 AMPs의 발현이 감소되고 HMC-1 세포에서 염증성 싸이토카인인 인터루킨-8이 증가하는 것을 확인하였다. 또한 이때 스핑고실포스포콜린에 p42/44 ERK이 증가됨을 western blot을 통해확인하였다. 이상의 결과들을 볼 때 비만세포에서 p42/44 ERK신호전달체계를 경유하는 것을 확인 하였고, in vivo나 in vitro상에서 AMPs 발현이 감소되는 것을 확인 하였다. 이상의 결과들로 보아 스핑고실포스포콜린이 아토피 피부염에서 초기 염증단계를 조절하는 것으로 보여진다.