소듐냉각고속로 HT9 피복재 파손평가 결과에 대한 감육의 영향 분석

이소담 고려대학교 대학원 2017 국내석사

세계적인 대형 원전사고 이후 보다 안전한 원전에 대한 수요가 높아지며 차세대 원전형태로 소듐냉각고속로가 각광받고 있으며 원전시장 내 우위확보를 위해 전세계적으로 활발한 연구 중에 있다. 소듐냉각고속로의 중대사고 시 피복재 파손부터 큰 사고로 이어질 가능성이 높기에 안전성 확보를 위하여 피복재 파손에 기여하는 요소의 영향에 대한 연구가 필요하다. 본 연구에서는 소듐냉각고속로의 높은 구동온도로 인한 연료-피복재 사이의 기계적 상호작용 (FCMI) 과 공융발생으로 인한 감육현상이 피복재 파손평가 결과에 미치는 영향을 연성파손과 크리프파손으로 나누어 분석하였다. 여러 손상모델을 ABAQUS 를 이용한 유한요소해석에 user-subroutine 을 통하여 적용하였고, HT9 피복재의 구동환경과 감육정도에 따른 case study 를 진행하여 도출한 결과로부터 감육의 영향을 분석하였다.

Ameliorative Effects of Paeonia Extract Mixture HT074 on Acute Reflux Esophagitis in Rats via Anti-oxidative Activity

박연진 경희대학교 대학원 2023 국내석사

HT074, a multiherbal mixture containing extracts from Inula britannica flowers and Paeonia lactiflora roots, is commonly used in Korean medicine for the treatment of gastric disorders. The aim of this study was to investigate the mechanisms underlying the protective effects of HT074 on an acute reflux esophagitis (RE) rat model. First, the production of nitric oxide (NO) and the mRNA expression levels of Nrf2, HO-1, SOD, catalase, and GPx2 were evaluated in LPS-induced RAW 264.7 cells. And gastroesophageal reflux (GER) was induced in rats by ligating the transitional region between the fundus and the pylorus. HT074 (100, 300 mg/kg) and ranitidine (positive control, 50 mg/kg) were orally administered 1.5 hours in advance. Esophageal mucosal damage lesions and histological changes were observed. To investigate the mechanisms, gastric pH levels were measured, and the expression levels of Nrf2, HO-1, superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and GPx-1/2 were measured through western blot analysis. Pretreatment of HT074 reduced the NO production in a concentration-dependent manner in LPS-induced RAW264.7 cells. HT074 also increased the mRNA expression of antioxidant-related genes such as Cat and GPx2 in RAW264.7 cells. Oral administration of HT074 significantly decreased esophageal lesions induced by GER as evidenced by histopathological observations. HT074 had no effect on gastric pH. Furthermore, HT074 treatments significantly increased the expression of HO-1, SOD, GPx-1/2, and Nrf2, consistent with the in vitro findings. However, no significant difference was observed in Cat expression. These findings suggest that HT074 has esophageal protective effects against GER-induced esophagitis. The observed effect of HT074 is attributed to its ability to inhibit nitric oxide (NO) production and modulate antioxidant activity, leading to the activation of key cellular factors, including Nrf2, HO-1, GPx-1/2, SOD, and catalase. These findings support the potential of HT074 extract as a valuable therapeutic intervention for managing GERD.

Monitoring of T-2 and HT-2 Toxins in Cereals Using a Laboratory Validated, Simultaneous HPLC Detection Method

니마카심 경상대학교 대학원 2009 국내석사

Fusarium species are known as common contaminants of foods and feeds; they are responsible for the production of tricothecene mycotoxins. F. sporotrichoides, F. accuminatum and F. poae produce harmful T-2 and HT-2 toxins in cereals. This study established and validated a high performance liquid chromatography method for simultaneous detection of T-2 and HT-2 toxins, and the method was then used for monitoring of these mycotoxins in cereals. Immunoaffinity columns were used for sample purification and the purified toxins were derivatized with 1-Anthroylcyanide (1-AN) in presence of 4-Dimethylaminopyridine (4-DMAP) prior to HPLC coupled with FLD analysis. A binary gradient elution with the initial composition of 70% acetonitrile was gradually ramped to 100% within the chromatographic running time. The method was established using T-2 and HT-2 reference standards and spiked cereal samples. Results showed that, Phenyl Hexyl Luna column at 40℃ had a better sensitivity using toluene as a derivatization solvent with the molar ratio of 300 and 325 ㎍/ml of 1-AN and 4-DMAP respectively. Linearity (R2) of the standard curves were 0.9992 and 0.9979 for T-2 and HT-2 toxins respectively. Accuracy of the detection method (62 to 110%) for T-2 and (67 to 118%) for HT-2 were within the acceptable range (60 to 130%). Precisions ranged from 0.63 to 3.87 for T-2 toxin and 0.09 to 6.57 for HT-2 toxin. LOD and LOQ were 8 ng/g and 10 ng/g for T-2 and 6 ng/g and 8 ng/g for HT-2 toxins, respectively. The analytical range was 8 to 2000 ng/g for T-2 toxin and 6 to 2000 ng/g for HT-2 toxin. 75 cereal samples were monitored for the natural occurrence of T-2 and HT-2 toxins. Out of which 13 and 25 samples were found to be contaminated with T-2 and HT-2 toxins respectively, 4 samples were found to be contaminated with both toxins. This study provide not only a simultaneous detection method for the T-2 and HT-2 toxins in cereals but also the status of T-2 and HT-2 toxins in cereals in Gyongnam province, South Korea. T-2, HT-2 독소는F. sporotrichoides, F. accuminatum 그리고 F. poae 곰팡이들이 생성하는 독소로, 식품과 사료에 존재하며 인간과 동물에게 위해를 가한다. 곡류에서 T-2와 HT-2 독소를 검출하기 위하여 본 연구는 형광검출기를 장착한 고속 액체크로마토그래피 (High Performance Liquid Chromatography; HPLC)와 면역친화성컬럼 (Immunoaffinity column)을 통한 정제, 그리고 형광표지물질인1-Anthroylcyanide (1-AN)와 4-dimethylaminopyridine(4-DMAP)을 이용하여 검출방법을 확립하고 검증하였다. 덧붙여, T-2와 HT-2 독소의 자연적인 오염현황을 확인하기 위하여 75 종류의 곡류 시료를 선택하여 모니터링을 실시하였다. 유도체 과정에서 반응에 민감한 유도체 용매를 선택하기 위해 toluene과 acetonitrile을 시험하였고, 유도체화에 적합한 비율을 선택하기 위하여 1-AN과 4-DMAP의 비율을 달리하여 가장 민감하게 반응하는 비율을 선택하였다. HPLC 컬럼 조건을 선택하기 위하여, 다른 농도의 독소에 1-AN과 4-DMAP를 유도체화 하고, Waters Symmetry C18와 Phenyl Hexyl Luna column 컬럼을 각각 30, 40 그리고 45℃로 온도조건을 달리하여 HPLC에 주입하는 실험을 3회 반복 실시하여 피크를 비교하여 적합한 컬럼과 온도를 선택하였다. 이동상 용매는 두 용매를 이용하였는데, 처음은 70% acetonitrile로 시작하여 서서히 100% acetonitrile로 비율을 높여 사용한다. 검증을 위하여, 보리, 쌀, 옥수수 그리고 검은콩 시료에 인위적으로 T-2와 HT-2 독소를 100, 200 그리고 500 ng/g으로 오염시켜 NaCl과 80% MeOH로 추출하고, 면역친화성컬럼을 통해 정제하고 정밀성, 정확성과 분석 범위를 평가하였다. 특이성, 검출한계, 정량한계는 T-2, HT-2 독소를 인위적으로 오염시킨 시료의 크로마토그램을 통해서 결정하였다. 또한 표준곡선(6, 10, 20, 50, 100, 200, 500 ng/g) 의 직선성을 평가하였다. Phenyl Hexyl Luna column은 40℃에서 유도체용매로 toluene을 이용하면서 1-AN과 4-DMAP의 농도 비율이 각각 300, 325 ㎍/ml일 때 가장 민감한 것으로 보였다. 직선성을 평가하기 위한 상관관계 계수는 T-2는 0.9978, HT-2는 0.9998로 확인되었다. 검출 방법 중 정확성은 T-2 독소는 62-110%, HT-2 독소는 67-118%, 분석범위는 60-120%로 확인되었다. 정밀성 범위로 T-2 독소는 0.63-3.87, HT-2 독소는 0.09-6.57%로 나타났다. 검출한계와 정량한계는 각각 8 ng/g, 10 ng/g, T-2 독소는 6 ng/g, HT-2 독소는 8 ng/g로 확인되었다. 75 종류의 곡류 시료 분석에서 T-2와 HT-2 각각의 독소에 오염된 13종류, 25종류의 시료를 확인하였으며, T-2, HT-2 독소에 동시에 오염되어 있는 시료 4종류를 확인하였다.

5kW HT-PEMFC 시스템의 시동 시간 단축 연구

최민구 과학기술연합대학원대학교 2021 국내석사

HT-PEMFC(High Temperature Polymer electrolyte membrane fuel cell) 시스템은 LT-PEMFC(Low Temperature Polymer electrolyte membrane fuel cell) 시스템에 비해 구조가 단순하고 열 회수 효율이 높다. 하지만 HT-PEMFC 시스템의 시동 시간이 LT-PEMFC 시스템에 비해 느린 것은 상용화에 걸림돌로 작용 하고 있다. HT-PEMFC 시스템은 스택의 warm-up 과정이 필요하기 때문에 LT-PEMFC 시스템에 비해 시동 시간이 느리다. HT-PEMFC 스택의 warm-up은 Coolant heating과 Reaction heating을 결합한 방식이 주로 사용 되고 있다. 기존 방식에서 Air heating을 추가하는 것이 스택 warm-up 시간을 단축시킬 수 있을 것이라는 선행 연구가 있었지만 실험적으로 검증 되지 않았다. 본 논문에서는 5kW HT-PEMFC 시스템의 시동 시간 단축을 위해 3kW급 HT-PEMFC스택에 효과적인 warm-up 방식을 적용하는 실험들이 주를 이룬다. 첫째로, 히터 용량 별 Coolant heating방식의 승온 속도를 비교하는 실험이 진행 되었다. 둘째로, Air heating방식이 스택의 승온 속도 향상에 효과가 있는지 파악 하여 Coolant heating 방식과 비교 하였다. 셋째로, Air heating이 스택의 성능 향상에 영향을 줄 수 있는지 파악하였다. 실험 결과 Air heating이 3kW급 HT-PEMFC의 warm-up 시간을 단축 시킬 수는 있으나, Coolant heating에 비해 그 효과가 미미한 것으로 나타났다. 또한 단기적인 성능 향상 효과도 미미한 것으로 나타났다. Reaction heating은 에너지 분석 결과 warm-up 과정에 반드시 포함시켜야 하는 것으로 나타났다. 본 결과를 반영하여 한국에너지기술연구원에서 개발 중인 5kW HT-PEMFC 시스템 대상 사례 연구를 진행하였다. 운전 알고리즘과 시스템 구성 부품들의 전력 사용량을 분석하여 시간 순으로 소비전력 패턴을 도출 하였다. 또한 소비전력 제약 조건을 설정한 후 시동 시간을 최대한 단축 시킬 수 있는 개선 알고리즘을 제시하였다. 결론적으로 5kW HT-PEMFC 대상 시스템에서 시동 시간을 기존 대비 38% 단축 할 수 있다는 결과를 얻었다. The HT-PEMFC (High Temperature Polymer electrolyte membrane fuel cell) system has a simple structure and high heat recovery efficiency compared to the LT-PEMFC (Low Temperature Polymer electrolyte membrane fuel cell) system. However, the slower startup time of the HT-PEMFC system compared to the LT-PEMFC system is acting as an obstacle to commercialization. Since the HT-PEMFC system requires a warm-up process of the stack, the startup time is slower than that of the LT-PEMFC system. The warm-up of HT-PEMFC stack is mainly used in combination of coolant heating and reaction heating. Although there was a previous study that adding air heating in the existing method could shorten the stack warm-up time, it was not experimentally verified. In this paper, experiments that apply an effective warm-up method to a 3kW class HT-PEMFC stack to shorten the start-up time of a 5kW class HT-PEMFC system are mainly conducted. First, an experiment was conducted to compare the heating rate of the coolant heating method by heater capacity. Second, it was compared with the coolant heating method to determine whether the air heating method is effective in improving the heating rate of the stack. Third, it was investigated whether air heating could affect the performance of the stack. As a result of the experiment, air heating can shorten the warm-up time of 3kW class HT-PEMFC, but its effect is insignificant compared to coolant heating. It can also contribute to long-term durability improvement, but the short-term performance improvement effect was also found to be insignificant. As a result of energy analysis, reaction heating must be included in the warm-up process. Reflecting this result, a case study was conducted on the 5kW HT-PEMFC system being developed by KIER. The power consumption pattern was derived in chronological order by analyzing the operation algorithm and power consumption of system components. Also, after setting the power consumption constraints, an improved algorithm that can shorten the startup time as much as possible is presented. In conclusion, the result was that the starting time could be reduced by 38% compared to the previous system in the 5kW HT-PEMFC target system.

돌연변이 IDH1을 보유한 암세포의 이동성과 면역 회피 조절 기전에 관한 연구

박서연 경기대학교 대학원 2025 국내석사

암의 대사 신호와 관련된 유전자의 변이와 다양한 대사체들이 암 발생에 직접적으로 기여할 수 있다는 것이 밝혀지면서, 암세포의 대사 경로 조절을 통한 항암제 개발이 주목받고 있다. Isocitrate dehydrogenase 1 (IDH1)은 세포의 에너지 생산 과정에서 중요한 역할을 하는 효소로, 돌연변이가 발생하면 종양 형성 능력이 증가하는 것으로 알려져 있다. 변이된 IDH1은 D-2-hydroxyglutarate (D-2HG)와 같은 종양 대사산물을 생성하여 후성유전학적 변형(epigenetic modification)을 유발하고, 이를 통해 암세포의 분화와 성장을 촉진한다고 알려져 있다. 본 연구에서는 섬유육종(fibrosarcoma) 세포에서 IDH1의 arginine 132번 잔기가 cysteine으로 치환된 돌연변이형(IDH1 R132C)을 보유한 HT-1080 세포를 이용하여 IDH1이 암세포의 이동성과 사멸 저항성에 미치는 기능을 조사하고자 하였다. Nuclear factor-erythroid 2-related factor 2 (Nrf2)는 전사인자로서 세포 에너지 대사를 조절하여 세포 보호 기능을 수행하며, 종양미세환경에서 활성산소에 의해 발현이 증가하는 것으로 알려져 있다. HT-1080 세포는 다른 세포들과 비교하여 높은 수준의 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)을 생성하고 있으며, 이에 따라 Nrf2의 발현과 핵 내 이동이 증가한 상태로 관찰되었다. HT-1080 세포에서 IDH1 특이적인 siRNA를 사용하여 IDH1 발현을 억제하였을 때, Nrf2의 핵 내 이동이 현저히 감소함을 확인하였으며, 하위 조절 유전자인 NAD(P)H quinone oxidoreductase 1 (NQO1)과 glutamate-cysteine ligase catalytic subunit (GCLC)와 같은 항산화 효소들의 발현이 억제됨을 관찰할 수 있었다. 또한, 암세포 표면에 존재하여 암세포가 면역 시스템의 공격을 회피하도록 하는 역할을 하는 programmed-death-ligand 1 (PD-L1)의 발현도 IDH1 저해 조건에서 억제되는 것을 확인할 수 있었다. IDH1 R132H와 R132C에 대한 특이적인 저해제로 알려진 AGI-5198과 IDH305를 사용하여 암세포 악성화에 미치는 영향을 분석한 결과, 농도 의존적으로 HT-1080 세포의 이동 능력과 콜로니 형성 능력이 감소하는 것이 확인되었다. 이에 더하여 암세포 이동의 지표인 간엽성(mesenchymal) 유전자 vimentin의 발현이 AGI-5198과 IDH305 처리에 의해 억제되었으며 동시에 면역회피 유전자인 PD-L1의 발현도 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 이와 같은 결과를 종합하여 볼 때, 돌연변이 IDH1을 보유하고 있는 섬유육종세포에서 IDH1의 활성을 억제함으로써 Nrf2의 발현, 항산화 단백질 및 PD-L1의 발현을 저해하여 암세포의 이동과 면역 회피를 억제할 수 있음을 확인할 수 있었으며 이를 타겟으로 한 대사항암제 개발의 가능성을 제시하는 바이다. Isocitrate dehydrogenase (IDH1) is a component of the citric acid cycle and a key metabolic enzyme. After citrate, which is condensation of the two-carbon molecules and oxaloacetic acid, is dehydrated through the citric acid cycle to isocitrate, IDH1 transfers the hydrogen from isocitrate to NADP+ to produce a-ketoglutarate. Mutant IDH1 promote oxidative decarboxylation of a-ketoglutarate with NADPH to generate D-2-hydroxyglutarate (D-2HG) which is known as induce epigenetic modifications that drive the differentiation and growth of cancer cells. Mutant IDH1 is found in a variety of cancer cells, one of which, HT1080, is a fibrosarcoma with the IDH1R132C mutation, in which arginine at position 132 of IDH1 is replaced by cysteine. Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) is a crucial transcription factor in the cellular antioxidant response and is known to play a role in the survival and metastasis of cancer cells. This study use siRNA to knockdown the expression of IDH1 in HT1080 cells, the expression of Nrf2 and the antioxidant proteins NQO1 and GCLC, which are regulated by Nrf2, decreased. It was found a decrease in PD-L1, a protein that allows cancer cells to evade attack by the immune system. Previously known inhibitors of mutant IDH1 include AGI5198 and IDH305. AGI5198 inhibits tumour growth by interfering with the production of D-2HG in a dose-dependent manner, while IDH305 is a allosteric IDH1 inhibitor interfering D-2HG production and cell proliferation. Treatment of AGI5198 and IDH305 for HT1080 cells also confirmed the reduction of PD-L1 and additionally reduced Vimentin, a crucial protein for cell migration. Treatment of AGI5198 and IDH305 resulted in a decrease in cell migration and a decrease in the colony-forming ability. Taken together, the inhibition of IDH1 activity in HT1080 cells with mutant IDH1 can prevent cancer cell proliferation, migration and immune evasion by inhibiting the expression of Nrf2 and the expression of antioxidant proteins and PD-L1. Overall, the inhibition of IDH1 in fibrosarcoma HT1080 cells harboring mutant IDH1 R132C can prevent growth, proliferation, survival, and immune evasion of cancer cells. Therefore, We suggest the possibility of developing metabolic anticancer drugs targeting mutant IDH1.

5-HT 흡수억제성 항우울제들의 가토혈소판의 (³H)imipramine과 (³H)paroxetine 결합, (³H)5-HT흡수, 및 5-HT 함량에 미치는 영향

원경식 高麗大學校 1994 국내박사

HT-29 spheroid 세포에 대한 taxol 및 arsenic trioxide의 효과

이인수 연세대학교 대학원 2004 국내석사

Human colon cancer is the second most fatal disease among a variety of cancers to cause death in U.S.A. and its incidence rate is currently increased in Korea. Recently, many studies have been being progressed on the efficacy of diverse combination treatments. But results of these in vitro studies were not similar to those of in vivo. we compared the anticancer activities of arsenic trioxide and taxol respectively, against human colon cancer HT-29 cell line and combined use of two drugs. And these results compared with those of HT-29 spheroid cells having similar charactericstics to the solid tumor in vivo.The spheroid of HT-29 cells was formed by using a multicellular spheroid system and the result was observed through electron microscopy. The IC50 value for arsenic trioxide was 33 μM and taxol was 18 nM, which were evaluated in HT-29 monolayer cells. The combinational treatment of taxol and arsenic trioxide decreased the cytotoxicity on the HT-29 monolayer cells. The spheroid cells represented higher resistance against drugs than the monolayer cells. The DNA fragmentations were appeared after incubation with concentrations more than 10 μM arsenic trioxide and 100 nM taxol for 48 h on the monolayer cells. But the results of HT-29 cell line treated with the combination of taxol and arsenic trioxide were disappeared. And we couldn''t observe DNA fragmentation in the case of spheroid cells. These results suggest that apoptosis was not induced in the combinational treatment, which can be thought that arsenic trioxide might work as an antagonist for a taxol mechanism. And the spheroid cells represented higher resistance against drugs than the monolayer cells. 대장암은 미국에서 암에 의한 사망률중 두 번째를 차지하는 치명적인 암이며, 한국에서도 최근 발생률이 증가되고 있다. 최근 다양한 항암제의 복합처방의 효과에 대해서 연구가 진행중이다. 그러나 고형암에 대해서 실시한 이러한 연구의 결과들은 생체내에서 항상성을 나타내지 않았다. 본 연구에서는 대장암의 세포주중의 하나인 HT-29 세포주에 대하여 arsenic trioxide와 taxol을 각각 처리했을때 두약제가 나타내는 항암작용과 두약제를 조합하여 처리하였을때 두약제의 상호작용에 의해 나타내는 항암작용을 비교하였다. 그리고 고형암과 유사한 특징은 나타내는 HT-29 세포의 spheroid에 대해서도 동일한 실험을 하여 그 결과를 비교하고자 하였다. 먼저 지지체를 사용하지 않는 multicellular spheroid culture system을 사용하여 HT-29 spheroid 세포를 형성하고 그 결과를 전자현미경으로 관찰하였다. 또 단층세포에서 각각의 약제에 대한 세포독성능을 본 결과, IC50값이 taxol은 18 nM로 나타났고 arsenic trioxide는 33 μM로 나타났다. 그리고 두 약제를 복합처리할 경우에는 세포독성능이 감소하는 것으로 나타났다. 또한 spheroid 세포에서는 단층세포에 비해서 세포독성이 감소하는 것으로 나타났다. 또한 HT-29 단층세포에서 taxol은 100 nM 이상의 농도에서 DNA ladder가 형성됨을 확인하였고 arsenic trioxide는 20 μM 이상의 농도에서 DNA ladder가 형성됨을 확인하였다. 그러나 taxol과 arsenic trioxide를 복합처리한 HT-29 단층세포에서는 약제를 처리하지 않은 대조 세포에서의 결과와 유사하게 나타났다. 그리고 spheroid 세포에서는 taxol을 처리한 경우 단층세포에 비해서 DNA ladder가 현저하게 감소하는 것을 확인하였고 arsenic trioxide와 두 약제를 복합처리한 경우에는 DNA ladder를 관찰할 수 없었다. 또한 DAPI stain을 통한 형광현미경관찰을 통해서 sphreoid 세포내로의 약제의 침투가 어려움을 추측할 수 있었다. 위의 실험결과를 통해서 단층세포에서 각각 세포독성능을 갖는 약제가 동시에 처리하였을때는 서로 길항작용을 함을 알 수 있었다. 또한 조직세포와 가까운 spheroid 세포에서는 단층세포보다 더 높은 약제에 대한 저항성을 나타냄을 관찰할 수 있었다.

HT-29 결장암세포로부터 술잔세포 분화에 미치는 DMEM의 영향

이은진 창원대학교 2018 국내석사

세포주는 아미노산, 비타민, 포도당과 같은 영양분을 포함하는 배양 배지에서 유지된다. 그러나 배지 구성요소의 농도가 다르기 때문에 세포주의 증식과 분화는 배지에 따라 다르게 나타난다. 기본 배지인 Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM)은 Roswell Park Memorial Institute Medium 1640 (RPMI 1640)과 비교하여 더 많은 방향족 아미노산을 함유한다. 방향족 아미노산 중 하나인 tryptophan은 aryl hydrocarbon receptor (AhR) ligand로 작용하는 대사물질을 생성한다. AhR ligand의 수용체인 AhR은 intestinal epithelial cell (IEC), intraepithelial lymphocyte (IEL), innate lymphoid cell (ILC)과 같이 장관 면역 유지에 중요한 세포에서 발현된다. 따라서 본 연구에서는 AhR ligand로 작용할 수 있는 다른 농도의 아미노산들을 포함하는 RPMI와 DMEM에서 배양된 HT-29 세포로부터 IEC 중 하나인 goblet cell (술잔세포)의 분화를 조사하였다. 대부분의 HT-29 세포는 DMEM에서 배양될 때 줄기세포 marker인 Lgr5를 감소시키는 goblet cell로 분화했지만 RPMI에서는 미분화된 채로 남아있었다. DMEM에서 goblet cell의 분화는 tryptophan을 대사하는 첫 번째 효소인 indoleamine 2,3 dioxygenase-1 (IDO-1)의 억제제인 1-methyl-tryptophan (1-MT)에 의해 억제된 반면에 RPMI에서 tryptophan의 대사산물 kynurenine (KN)은 goblet cell 분화를 유도하였다. HT-29 세포에서 Notch1의 수준과 Notch1의 활성화 산물 Notch intracytoplasmic domain (NICD)의 수준은 RPMI보다 DMEM에서 더 낮았고, 1-MT에 의해 두 배지에서 증가되었다. 두 배지에서 배양된 HT-29 세포는 goblet cell 분화가 관찰되지 않는 이틀째에서 동일한 수준의 β-catenin을 발현하였다. β-catenin 발현은 두 배지에서 1-MT에 의해 증가되었고, KN에 의해 감소되었다. DMEM은 Hath1 발현을 높이는 동안 Hes1 발현을 감소시켰다. 마지막으로, AhR 활성은 goblet cell 분화를 유도하였다. 이러한 결과들은 KN을 포함하는 tryptophan 대사가 Wnt, Notch 그리고 AhR 신호 그리고 Hes1과 Hath1의 발현을 조절하면서 goblet cell 분화를 촉진한다는 것을 나타낸다. Cell lines are maintained in a culture medium containing nutrients such as amino acids, vitamins, and glucose. However, since the concentration of the media components is different, the proliferation and differentiation of the cell line varies depending on the medium. Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) contains more aromatic amino acids compared to Roswell Park Memorial Institute Medium 1640 (RPMI 1640). Tryptophan, one of the aromatic amino acids, produces metabolites that act as aryl hydrocarbon receptor (AhR) ligand. AhR, the receptor for AhR ligand, is expressed in cells important for maintenance of the immune system, such as intestinal epithelial cell (IEC), intraepithelial lymphocyte (IEL), and innate lymphoid cell (ILC). Therefore, in this study, examined the differentiation of goblet cells one of the IECs, from HT-29 cells in RPMI and DMEM containing different amounts of amino acids. Most of HT-29 cells differentiated into goblet cells down-regulating the stem cell marker Lgr5 when cultured in DMEM but remained undifferentiated in RPMI. The goblet cell differentiation in DMEM was inhibited by 1-methyl-tryptophan (1-MT), an indoleamine 2,3 dioxygenase-1 (IDO-1) inhibitor, whereas tryptophan and kynurenine (KN), a tryptophan metabolite, induced goblet cell differentiation in RPMI. The levels of Notch1 and its activation product NICD in HT-29 cells were lower in DMEM than those in RPMI and increased by 1-MT in both media. HT-29 cells grown in both media expressed β-catenin at the same level at day 2 when goblet cell differentiation was not observed. β-catenin expression, which was increased by 1-MT in both media, was decreased by KN. DMEM reduced Hes1 expression while enhancing Hath1 expression. Finally, AhR activation moderately induced goblet cell differentiation. These results suggest that tryptophan metabolism involving KN promotes goblet cell differentiation regulating Wnt, Notch, and AhR signals and expression of Hes1 and Hath1.

HT10의 VEGF 수용체 2 저해 효과

양유진 경북대학교 대학원 2011 국내석사

Angiogenesis is a multistep process that involves endothelial cell activation, proliferation, migration, the proteolytic degradation of the extracellular matrix and the formation of capillary vessels. To trigger this process, tumor cells release a number of angiogenic growth factors such as vascular endothelial growth factor (VEGF), fibroblast growth factor basic (bFGF) and scatter factors (Senger et. al, 1986). So blocking of vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2) which plays an important role in angiogenesis, can be an effective strategy to cancer therapy. Low molecular weight heparin derivative HT10 was found to interact with VEGFR2 and inhibit their function. In this study we prepared VEGFR2 overexpressed HEK293 cells through transient transfection and observed expression by western blotting. HT10 inhibited the expression of VEGFR2 phosphrylation on VEGFR2 overexpressed cells. This result indicates that HT10 block the function of VEGFR2 expressed cells. FITC labeled HT10 were treated on VEGFR2 expressed human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Immunoflourescence staining results indicated that HT10 robustly bind on VEGFR2. This was further confirmed through VEGFR2 siRNA treatment on HUVECs where binding of HT10 and VEGFR2 was almost decreased. Moreover, the strong binding between VEGFR2 and HT10 was found to be increased dose dependently. Thus, HT10 showed a significant inhibition potential of VEGFR2 function on HUVECs as well as VEGFR2 expressed HEK293 cells. Previous report showed that HT10 inhibit the expression of VEGFR2 through the interaction between HT10 and VEGF. But this study discovered that HT10 directly bind on VEGFR2 and inhibit the function of VEGFR2.

Study on the regulation of 5-HT3A receptor by triterpenoids

노신화 전남대학교 2018 국내석사

Schizandrin A (Sch A) and Schisandrin C (Sch C) are herbicides that have been used to treat spontaneous sweating, chronic asthma, insomnia and amnesia from long time. These compounds are isolated from the fruits of Schisandra chinensis (Song, 2016). In this study, we investigated the mechanism by which Sch A and Sch C work by exploiting cRNA injected into Xenopus oocytes to induce an internal current (I5-HT) in the presence of 5-HT3A receptors in the expressed 5-HT3A receptor. Cotreatment with Sch A or Sch C inhibited I5-HT in a dose-dependent, voltage-independent, and reversible manner. The IC50 values ​​of Sch A and Sch C in wild-type 171.7 ± 35.3 and 4 ± 0.6, respectively. Sch A also inhibited I5-HT at much lower concentrations. In addition, we have shown that the point mutation can regulate the channel activity of the 5-HT3A receptor. 이전 발표에 따르면, Schizandrin A와 Schisandrin C는 Schisandra chinensis (Turcz.) Baill. (Song, 2016)의 열매로부터 분리된 화합물로서 발한, 만성 천식, 불면증 및 기억 상실을 치료하기 위해 오래 전부터 사용되었습니다. 우리는 Xenopus oocytes에 주입된 cRNA를 이용하여 발현된 5-HT3A 수용체에서 Schizandrin A와 Schisandrin C에 의한 내부 전류 (I5-HT)를 유도하는 작용을 연구했습니다. Schizandrin A 또는 Schisandrin C를 이용한 treatment는 dose-response하고 voltage-independent이고 reversible inhibition인 방식으로 I5-HT를 억제했습니다. wild-type Schizandrin A와 Schisandrin C의 IC50 값은 각각 171.7 ± 35.3과 4 ± 0.6이었고 Schizandrin A가 I5-HT를 훨씬 낮은 농도로 억제한다는 것을 발견했습니다. 또한 point mutation이 5-HT3A 수용체의 채널 활성을 조절할 수 있음을 보여 주었습니다.