복막투석액의 pH와 삼투압이 백서의 복강 대식세포 탐식능에 미치는 영향

윤현진 연세대학교 대학원 2002 국내석사

복막투석은 말기 신부전 환자의 신대체 요법으로 널리 이용되는 방법이며, 합병증으로 발생하는 복막염은 투석치료의 성패를 좌우하는 중요한 요인이다. 복막염 발생시 일차적으로 대식세포가 주된 방어를 담당하지만 현재 사용하는 복막투석액은 높은 삼투압과 산성 pH로 인해 복강의 면역체계에 부정적 영향을 주는 것으로 알려져 있다. 최근에는 이와 같은 단점을 극복하기 위해 생체적합성이 좋은 다양한 투석액이 개발되어 생체내 방어기전에 미치는 영향을 줄이려고 노력하고 있다. 이에 본 연구에서는 기존의 복막투석액과 생체적합성이 좋은 것으로 알려진 아미노산 복막투석액과 Icodextrin 복막투석액에서 삼투압과 pH가 백서의 복강 대식세포의 탐식능에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 백서의 복강 대식세포를 분리하고 생리식염수, 1.5% 포도당 복막투석액, 1.1% 아미노산 복막투석액, Icodextrin 복막투석액을 기본용액으로 하여 각각 pH를 7.4로 교정하고 각 배지마다 C. albicans에 대한 대식세포의 탐식능을 측정하였으며 결과는 다음과 같다. 1. pH가 낮고 고장성인 포도당 복막투석액에서 대식세포의 탐식능이 가장 낮았다. 2. 등장성의 Icodextrin 복막투석액과 pH 6.5인 아미노산 복막투석액에서는 대식세포의 탐식능이 높게 나타났다. 3. pH 7.4로 교정 후 산성 pH이던 포도당 복막투석액에서는 대식세포의 탐식능이 의미 있게 증가하였다. 4. 아미노산 복막투석액과 Icodextrin 복막투석액에서는 pH 7.4로 교정 후에 대식세포의 탐식능에 유의한 차이가 없었다. 이상의 결과로 높은 삼투압과 산성 pH는 대식세포의 탐식능을 억제하며, 포도당 복막투석액에서는 pH의 교정이 대식세포의 탐식능 향상에 도움이 되지만 아미노산 복막투석액과 Icodextrin 복막투석액에서는 대식세포의 탐식능에 영향을 주지 않는 것으로 나타났다. Icodextrin 복막투석액에서는 pH의 영향보다는 삼투압이 대식세포의 탐식능에 더욱 영향을 주는 것으로 생각되며 복막투석액에 포함된 이온이나 Icodextrin자체로 인한 영향에 대해 연구가 진행되어야 할 것으로 생각된다. Background : Continuous ambulatory peritoneal dialysis(CAPD) is accepted as one of a standard renal replacement therapy for the management of chronic renal failure patients. But the peritonitis is major problem of CAPD. In CAPD patients, peritoneal macrophages are most predominant cell type in peritoneal fluid and it play role in host defense against invading microorganism. Non-physiologic composit ion of peritoneal dialysis solution such as low pH and high osmolality is known as a leading cause local peritoneal defense impairment. Recently more physiologic pH amino-acid dialysis solution and iso-osmolar Icodextrin dialysis solution are clinically introduced. Improvement of macrophage activity under the physiologic dialysis solutions were reported. Our study is designed for evaluation of the effect of pH and osmolality on the peritoneal macrophage(PM) phagocytic activity in various peritoneal dialysis solutions. Method : Peritoneal macrophages were isolated from Sprague-Dawley rat peritoneum. Four dialysis solutions which contain none(normal saline) or 1.5% glucose or 1.1% amino-acid or Icodextrin are used as a original pH and corrected pH 7.4 status respectively. Phagocytic activity of PM is measured by ratio of C. albicans(AT CC 10231) uptake macrophage under high power microscope field. Result : PM phagocytosis activity in Icodextrin dialysis solution or amino-acid dialysis solution is better than those in glucose dialysis solution(p<0.05). There is significant increment of phagocytic activity after pH 7.4 correction in glucose dialysis solution. But these effect is not found in amino acid and Icodextrin contained dialysis solution. Conclusion : Our data suggest that phagocytic activity of PM was increased in iso-osmolar Icodextrin dialysis solution and pH 7.4 glucose dialysis solution. But pH in amino acid dialysis solution and Icdextrin dialysis solution did not in dependently affect phagocytic activity of rat PM. Further study should be planned for the confirmation of direct effect of pH and osmolality on PM ph agocytosis.

Inhibition of Phagocytic Activity by Nitric Oxide in Murine Peritoneal Macrophages : Nitric oxide에 의한 생쥐 복강 대식세포의 탐식능 저해

이소영 전북대학교 대학원 1995 국내박사

본 연구에서는 Nitric oxide (NO)가 생쥐 복강 대식세포의 탐식능에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 하였다. NO가 생쥐 복강 대식세포의 탐식능에 영향을 줄 수 있는지를 알아보기 위하여, 실험관 내에서 화학적으로 NO를 생경하는 물질인 sodium nitroprusside (SNP)를 세포에 처리하고 유식세포 분리 분석기를 이용하어 탐식능을 측정 하였다. 탐식능은 SNP의 농도와 처리 시간에 비례적으로 저해 되었는데, 이것은 NO가 대식세포의 탐식능에 영향을 줄 가능성이 있음을 의미한다고 할 수 있다. 할성화된 대식세포에서 생성되는 내생적 NO가 탐식능에 어떠한 영향을 주는지 알아보기 위하여 interferon-gamma (IFN-γ)와 lipopolysaccharide (LPS)를 단독 혹은 복합 처리한 후 세포의 탐식능을 72 시간동안 12 시간 간격으로 측정한 결과, IFN-γ와 LPS를 함께 처리한 세포에 의해 유도된 다량의 내생성 NO가 있는 상태에서, 세포의 탐식능은 억제되었고 여기에 NO synthase 활성 억제제인 N^GMMA 나 arginase를 처리한 결과 탐식능이 대조군 수준으로 회복됨을 관찰 할 수 있었다. 또한 배지내로 분비된 NO를 제거했을 때에도 NO에 의한 탐식능 저해가 회복된다는 것을 알 수 있었는데, 이것은 할성화 된 대식세포에서의 탐식능 저해에 관여하는 주요한 물질이 NO임을 의미하고, 이 NO에 의한 탐식능 저해가 가역적임을 시사한다고 할 수 있다. NO에 의한 탐식능 저해의 기전을 알아보기 위해 세포질에 분포하고 와는 세포 골격구조를 phalloidin으로 염색하여 관찰한 결과, IFN-γ와 LPS로 활성화된 대식세포와 actin의 중합 반응을 저해하는 cytochalasin D를 처리한 세포가 비슷한 양상의 응축된 actin을 가지는 것을 볼 수 있었고, 더우기 흥미롭게도 IFN-γ와 LPS로 자극을 받은 세포의 모양이 배양후 48시간부터 방추형에서 원형으로 변화되는 것도 발견할 수 있었다. 그러나. N^GMMA를 처리한 실험군에서는 여전히 방추형의 세포가 관찰되었는데, 이 결과들은 NO가 actin의 중합 반응을 방해하여 위족형성을 억제하므로써 대식세포의 탐식반응을 저해할 것이라는 추측을 가능케 한다. 결론적으로, 본 실험 결과물로 미루어 보았을 때 NO는 세포 독성 중간물질로서의 역할 뿐 아니라 대식세포의 중요한 면역 기작의 하나인 탐식능을 억제하는 세포 조절 작용에도 관여함을 알 수 있다. We investigated the effect of nitric oxide (NO) on phagocytic activity of macrophages. To study whether NO affects the phagocytic activity of murine peritoneal macrophages, we incubated the cells with sodium nitroprusside (SNP), in vitro NO generating agent. The cells were examined for phagocytosis with fluorescent microbead (1.88㎛) by using flow cytometer with 200 mW argon laser. Phagocytosis was inhibited by SNP dose and time dependent manner. To elucidate the role of endogenous NO secreted by activated macrophages on the phagocytosis, TG-elicited macrophages (5×10^5cells/well) were incubated with interferon-gamma (IFN-γ) (5U/ml) plus lipopolysaccharide (LPS) (10ng/ml). The phagocytosis kinetics assay over a 60 hr period showed that endogenous NO induced by IFN-γ plus LPS-treated macrophages inhibited the engulfment of latex bead. However, incubation of the cells with IFN- γ plus LPS in the presence of N^G monomethyl-L-arginine (N^G MMA), an inhibitor of NO synthase (NOS), resulted in phagocytic activity like nontreated macrophages. The ability of N^G MMA could be mimicked by another inhibitor of NOS such as arginase. In addition, when we removed the NO in culture media, the inhibition of phagocytic activity could be overcome. It suggests that the effector molecule to inhibit phagocytosis in activated macrophages is NO and inhibition of phagocytosis by NO is reversible. To demonstrate the mechanism of phagocytic inhibition by NO, we observed the cytoskeletal structure stained by rhodamin-conjugated phalloidin. Actin filament composition in cytoplasm of IFN-γ plus LPS activated macrophage is similar to cytochalasin D treated macrophage's. Interestingly, when macrophages were incubated with IFN-γ plus LPS for more than 48 hrs, the cells were undergo a wave of morphological change, from a spindal shape into a round shape. These facts are suggested that NO may regulate the cytoskeletal composition and inhibit macrophage phagocytosis by defect of actin filament formation. Collectively, the present results strongly suggest that NO has a negative regulatory effect on phagocytosis during macrophage activation in addition to its better characterized roles as a cytolytic mediator.

抑制된 網內系 貪食能에 미치는 影響

김재천 전북대학교 대학원 1978 국내석사

In literature, it has been often implicated that the phagocytic activities of leukocytes and reticulo-endothelial system (RES) were promoted by administration of aristolodhic acid. Observing the effects of aristolochic acid in the rat under the condition of supressed reticulo-endothelial function, the author has investigated the phagocytic activity of RES after injection of cortisone and aristolochic acid si simultaneously, and the results were compared with the groups which were administered cortisone alone. 1. In the cortisone-treated group A (cortisone 1 mg/100gm of body weight), the phagecytic activity of RES was suppressed considerably in the early stage (3 hours after administration), and then reestablished gradually after first day. 2. In the group B which was administered cortisene (same amounts in group A) and 20 ug of aristclochic acids simultaneously, the phagocytic activity of RES was suppressed slightly mn the early stage. 3. In the group C which was administered cortisone (same amounts in grou A) and 2 ug of aristolochic acid simultaneously, th phagocytic activity of RES was not suppressed in all exporimental stages.

CAPD환자에서 복강대식세포의 탐식능과 살균능에 관한 연구

주운수 고신대학 1991 국내석사

女貞子가 大食細胞 貪食能에 미치는 影響

이광석 圓光大學校 1996 국내석사

飢餓 Mouse의 細網內皮系 貪食能에 미치는 鹿茸의 影響

손낙원 慶熙大學校 1986 국내석사

황기의 수침 및 메탄올 엑스가 Mouse 세망내피계의 탐식능에 미치는 영향

이보형 中央大學校 1991 국내석사

木通 Methanol엑기스가 쥐의 細網內皮系의 貪食能에 미치는 影響

이승목 中央大學校 1986 국내석사

綱內系 貪食能의 日週期 變動에 對한 實驗的 硏究

김흥곤 全北大學校 大學院 1979 국내석사

To investigate circadian rhythm of the phagocytic function of retculoendothelial system of the rats, the phagocytic activity was measured by means of carbon clearance clearance method with 4-h intervals for a 24-h span. The results were as follows. The phagocytic activity increased during the habitual rest light span of nocturnally active rat, but decreased during active dark span. There is no significant difference between male and female rats.

水溶性 Vitamin이 網內系 貪食能에 미치는 影響

崔昌基 全北大學校 1981 국내석사

To investigate the effect water double vitamins on the phagocytic function of reticuloendothelial system in rats, to the phagocytic activity was assessed by carbon clearance method after single injection of vitamins (50mg/100 mg of B.W., L.F.), vitamin B6 (10mg/100gm of B.M., I.M.), and vitamin B12 (10 ug/100 gm of B.W., I.M), The obtained result were as follows; 1. In the vitamin C treated group, the phagocytic activity showed an increased level since one hour after injection, and maintained increment until twelve hour after injection. 2. In the vitamin B6 treated group, the phagocytic activity showed an increased level by three hours after injection. Thereafter it returns gradually to the normal level by six hours. 3. In the vitamin B12 treated group, the phagocytic activity showed an increased level since on hour after injection. Thereafter it decreased gradually, but maintained increased level until twelve hours after injection compared with control group.