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백모등 엑스의 제제화에 관한 연구(Ⅰ) : 사염화 탄소에 의한 흰쥐의 간장기능 장해와 백모등 엑스의 투여효과
백모등(Solanum lyratum, Thimb, Solanceae)은 야생하거나 재배되는 다년생 초본으로 잎은 호생(互生)으로 2~5技며, 화관은 백색으로 가을에 꽃이 피고 과실은 직경 8㎜ 정도의 작은 열매이며 성숙하면 적색을 뛰게 된다. 백모등은 중국의 상하이 지역에서 전통적으로 여러 가지 암치료에 사용되어져 왔고 민간에서는 해열 진통제로 사용해 왔는데 신농본초경, 본초강목등에 의하면 백모등은 해독작용, 항종양 작용, 급성 황달성 간염, 류마치스성 관절통, 수종, 임병(淋病)등에 대하여 치료 효과가 있는 것으로 기재되었다. 백모등의 성분규명은 구주산의 근속식물(Solanum dulcamara)의 莖部에서 tomatidenol, solasodine 및 soladulcidine이 있고 잎에서는 α,β-Solamarine, solasomine, solamargine, soladulcidine, tomatidenol, tomatida-3,5 dienel, tomatida-5-en-3β-ol 및 yamagenin 등으로 보고되었다. 한편, K. Murakami등은 백모등의 莖部에 대한 생리활성 물질을 검색할 목적으로 전체추출법을 이용해 온수로 추출한 후 그 추출액을 감압 농축하여 물 엑스를 얻었고 물 엑스로 부터 SL-(1)과 SL-0(2)의 결정상을 얻었다. SL-(1)은 무색 침상결정으로 당 부분은 glucose와 galotose로 이루어져 있고 aglycone부분은 tigogenin, neotigogenin, diosgenin 및 yamogenin으로 구성된 혼합물임을 확인하였으며 SL-0(2)는 무색 침상결정으로 강한 쓴 맞을 나타내고 furostanol형 배당체임을 보고하였다. 또한 莖部에서 steroid골격으로 alkaloid 배당체인 SL-c(1)와 SL-d(2)를 얻었는데 β-lycotrioside와 β-lycotetraoside로서 경부암 세포의 억제 효과가 뚜렷하다고 보고 하였다. 저자는 백모등이 급성 활달성 간염과 초기 간경변에 유효 하다는 임상보고에 따라 백모등의 간장에 대한 해독 작용의 유무를 관찰하기 위하여 백모등 엑스를 제조한 다음 사염화탄소로 간장해를 일으킨 흰쥐에 투여함으로써 손상된 간에 대해 미치는 영향을 검토아기 위해 간장의 중량변화, transaminase측정, cholesterol 및 bilirubin 측정, Bromsulphalein 측정 및 간세포의 병리학적 관찰을 통하여 지견을 얻었으므로 이에 보고하는 바이다.
결구상추 잿빛곰팡이병(Botrytis cinerea)에 대한 Bacillus licheniformis N1을 이용한 미생물농약의 제제화 및 그 방제효과
최근 결구상추의 소비 증가에 따라 시설재배 면적과 생산량이 증가하고 있으나, 봄과 겨울철의 하우스내 다습조건으로 인한 잿빛곰팡이병(Botrytis cinerea) 발생으로 결구상추의 수량감소와 품질저하 등 막대한 손실을 초래하고 있다. 이에 먼저, Botrytis cinerea LVF12 균주의 결구상추에 대한 병원성 검정을 실시하고, 결구상추 잿빛곰팡이병의 생물학적 방제를 위해 들깨 잿빛곰팡이병의 길항균으로 확인된 Bacillus licheniformis N1 균주를 이용하여 수화제, 액제, 유제 등 7종류의 제제를 제조하여 방제효과를 검정하였다. 또한, 제제의 방제효과 증진을 제고하고 포장적용을 위한 최적화시험으로 단수, 복수제제, 생균, 항생물질 및 혼합제제 등의 다양한 형태로 제제를 조제하여 하우스내 폿트에서 검정한 결과, 수화제형 N1K의 혼합제제를 단독으로 처리했을 때가 가장 효과가 우수하였다. 폿트내 검정에서 선발된 미생물농약 N1K수화제를 하우스내 토경재배와 농가하우스 포장검정을 통해 최적 처리 농도, 처리시기, 처리 횟수 등을 구명하였는데, 최적 처리 농도는 100배 희석액에서 방제가가 가장 높았고, 최적 처리 횟수 검정에서는 7일 간격으로 3회 처리한 시험구에서 80% 이상의 높은 방제가를 나타내었으며, 1회, 3일과 7일 간격으로 2회, 3일 간격으로 3회 처리한 시험구에서는 방제효과가 낮았다. 또한 화학농약과 개발된 미생물농약의 교차 또는 혼용시용을 통해 방제효과의 제고를 조사해 본 결과, 단독처리에서 방제가가 가장 높았고 다음으로는 교차처리, 혼용처리가 높았으며, 화학농약 단독처리가 가장 낮았다. 앞서 선발된 처리농도, 처리시간, 처리횟수를 따라 자연발병된 농가하우스의 포장에서 미생물농약과 화학농약의 방제효과를 검정하고, 미생물농약과 화학농약의 교차 또는 혼용 처리시의 방제효과를 검정하였는데, 그 결과, N1K 처리가 90.3%로 프로파수화제의 69.5%보다 높아 자연발병된 포장에서도 동일하게 적용됨을 알 수 있었고, 하우스내 토경재배 검정과 동일하게 미생물 농약 단독처리, 교차처리, 혼용처리, 화학농약 단독처리 순으로 방제가가 높았다. 따라서, 농가에서는 미생물농약과 화학농약을 교차 또는 혼용 시용하는 것이 화학농약만을 처리하는 경우보다 방제효과를 제고시켜 이를 권장하며 이 결과는 경제적, 환경적인 측면에서 매우 중요하였다. 제조한 미생물농약의 농가 하우스 또는 포장 살포시 용매에 의한 팽창으로 분무기 사용의 난점을 고려하여 희석농도에 따른 시간별 부피 팽창정도를 측정하는 팽윤도와 보관시 수분흡수에 따른 변질, 응고에 의한 방제효과 저하를 고려하여 온도와 습도에 따른 자체 수분 흡수력을 조사하는 흡습도 등의 물성조사를 실시하였는데, 팽윤도는 5%와 10% 희석액 까지는 분무에 문제가 없었으나 20% 희석액은 분무시간 10분 후부터 통과에 어려움이 있는 것으로 나타났고, 흡습도는 4℃가 보관 시 수분함량의 변화가 가장 낮아 미생물제제의 보관에 가장 용이한 것으로 조사되었다. 이로서 결구상추에 관한 잿빛곰팡이방제용 미생물농약의 제제화에 관한 연구는 처음으로 보고하는 것이며 상업화을 위한 기초자료를 제공하고자 하였다. An antagonistic bacteria, Bacillus licheniformis NI strain which effectively inhibited mycelial growth of gray mold rot pathogen, Botrytis cinerea was isolated from the rhizosphere of perilla crop. For the pathogenicity on head lettuce, the optimal concentration of conidial suspension of LVF12 which was made by 30% tomato-juice plus 0.1M KH_(2)P0_(4), was selected as 1×10^(6) conidia/ml. 2 wettable powder(WP), 3 liquid concentrate(LC), and 2 emulsified concentrate(EC) using Nl stain as a biological agents were developed for the first time and estimated its control effect on head lettuce in this study. Nl strain for the mass production of antifungal metabolites was mass-cultured in biji powder media, 7 far fermenter. For the NIK formulation, vegetative biomass of Nl strain from 5-day-old liquid culture in biji broth, was mixed with soy flour, rice flour, and glucose, then dried and pulverized. In pots of plastic house test, NIK and NIE formulations were effectually controlled gray mold rot as the control value of 79.6%, 68.6%, respectively, was more effective than chemical fungicide, porocymidone, showing the control value of 48.3%. also, In soils of plastic house test, NIK and NIE formulations were 88.1%, 64.7%, respectively. as a above results, NIK formulation was selected as a most effective formulation on a head lettuce. Besides, a several different types of formulation were developed and applied at the pots for the optimization of NIK for the field trials. In a pots, soils, and the fields naturally occurred gray mold rot in a plastic house, each of suitable spraying density, frequency was selected as a 1/100 diluent, 3 times per 7 days, respectively, In addition, the control value (%) of NIK spaying, mixed and crossed spaying with NIK and the chemicals, and, the chemicals spaying was effective in a order. In conclusion, the most effective and suitable formuation on a head lettuce was selected as the NIK formulation under the pots, plastic house, fields experiments which showed the significantly higher control values than those of chemical fungicide, procymidone. This is the first report on formualtions as a biological agent using B. licheniformis to gray mold rot caused by Botrytis cinerea, on head lettuce.
능이버섯 중에 함유된 단백분해효소를 제제화하기 위하여 용매추출실험, pancreatin 및 protease와 역가 및 최적 pH 비교실험, 안정성 비교실험, 소장내 가수분해 및 흡수비교실험, 제산제 복합실험 및 위산에 대한 안정도 실험을 실시한 결과 아래와 같은 결론을 얻었다. 1. 능이버섯 중 단백분해효소는 percolation법에 의하여 용이하게 추출되었으며 용매는 물이 가장 적합하였다. 2. 능이버섯엑스의 단백소화력은 pancreatin보다 높게 나타났고 protease보다는 낮았다. 3. 능이버섯효소의 최적 pH범위는 7.0~11.0 까지로서 pancreatin 및 protease보다는 넓게 나타났다. 4. 능이버섯효소의 온도에 대한 안정성은 pancreatin 및 protease보다는 월등하게 높았다. 5. 능이버섯효소의 pH에 대한 안정성은 약알칼리성에서 특히 높게 나타났다. 6. 능이버섯효소의 금속이온에 대한 안정성은 Al³+, Mg²+, Fe²+등에서 높았고 Ag+, Hg²+, Co³+ 등에서는 불안정하였다. 7. 능이버섯효소의 소장내 가수분해율 및 아미노산 흡수율은 pancreatin 및 protease와 큰 차이가 없는 것으로 나타났다. 8. 제산제 복합시 능이버섯효소는 pancreatin 및 protease보다 훨씬 높은 역가를 유지하였으며 위산에 대해서도 가장 안정하였다. 9. 능이버섯효소에 제산제를 복합할때는 산화마그네슘에서 가장 높은 역가를 유지하였다. 이상의 실험결과 능이버섯엑스는 단백소화효소제로서 제품개발 가치성이 높은 것으로 평가된다.
사구식물 복원용 다기능 근권세균의 식물생장촉진능 및 환경스트레스 저항능 유도
해안사구 지역은 해양생태계로부터 내륙생태계로 이행되어가는 생태적 이행대로서, 풍부한 생물다양성을 내재하고 있으며, 독특한 해안생태계를 이루고 있다. 이러한 해안사구는 퇴적물량을 조절하여 해안을 보호하고, 사구 고유생물의 서식지로서의 역할을 수행하고 있다. 또한 인간에게는 훌륭한 경관을 제공하여 쾌적한 휴식처가 되고 있다. 그러나 다양한 기능을 수행하고 있는 해안사구의 경우 현재 해수욕장, 해사채취, 도로 및 항만 건설 등과 같은 무분별한 개발과 지구온난화로 인한 해수면 상승과 같은 자연재해로 인하여 사구식생 및 해안사구 지형의 파괴, 해안침식과 같은 문제점이 발생하고 있으며, 이로 인하여 무한한 가치를 가지고 있는 해안사구가 회복할 수 없을 정도로 위협을 받고 있는 실정이다. 자연생태계는 스스로 치유, 복원하는 능력이 가장 강하고, 해안사구의 경우 인간의 힘에 의한 인위적인 훼손이 가장 큰 요인이므로 훼손된 사구식생 복원방법 중 가장 경제적이며 자연적인 방법은 자연적인 식생의 복원이다. 이러한 자연적인 식생의 복원을 위하여 미생물을 이용한다면 매우 경제적이며 효과적일 것이다. 근권미생물은 다양한 생태계에서 근권군서를 구성하고 있으며, 다양한 기능으로 공생관계를 가진다. 그리하여 사구식물근권미생물을 이용하여 점차 사라져가고 있는 해안사구복원을 위해 이용한다면 매우 효과적일 것이다. 균주분리를 위하여 경북 포항지역의 해안사구지역에서 서식하는 11종의 해안사구 식물의 근권으로부터 1,330종의 세균을 분리할 수 있었다. 이들 분리된 근권세균 중에서 생장촉진 호르몬 옥신과 지베렐린을 생산하며, 다양한 토양병원균에 대해 길항능을 가지는 23종의 균주를 선발할 수 있었다. 항진균성 기작 확인을 위하여 23균주에 대하여 기작조사를 하였으며 19균주가 항진균성 siderophore를, 4균주가 항진균성 β-glucanase를 생산하였다. 또한 13균주가 불용성 인산염 분해능을 가지고 있었으며, 1균주가 건조 및 염스트레스 완화물질 ACC deaminase를 생산할 수 있었다. 선발된 사구식물생장촉진 23균주들은 16S rDNA 염기서열 조사와 Bergey's manual에 의하여 99% 이상의 상동성을 가지는 Bacillus sp. 7균주와 Pseudomonas sp. 15균주들로 동정할 수 있었다. 이 중 옥신 및 지베렐린과 같은 식물생장촉진능, 인산가용화능, 식물병원균 길항능, ACC deaminase 생산능이 뛰어난 P. fluorescens IB4-14, P. aurantiaca IB5-8, IB5-10과 IB5-14를 최종적으로 선발하였다. 4종의 PGPR균주는 갯까치수영, 갯메꽃, 가는갯능쟁이, 갯완두의 종자발아촉진능 검증 결과 무처리구에 비하여 15% 이상 발아촉진능을 나타내었으며, in vivo 포트시험에서는 무처리구에 비하여 20%이상 높은 생장촉진능을 나타내었다. 또한 건조조건에서는 무처리구는 사멸하였지만 4종의 균주처리구의 경우 50일동안 50% 이상의 생존능을 나타내었다. P. aurantiaca IB5-10 과 IB5-14의 경우 HPLC와 GC-MS 분석결과 식물생장촉진호르몬인 ABA (abscisicacid), JA (jasmonicacid), zeatin (natural cytokinin)와 IPA (indole-3-propionicacid)를 생산하는 것으로 확인되었다. 그리고 P. aurantiaca IB5-10의 경우 5종의 지베렐린을 생산하였으며, P.aurantiaca IB5-14는 7종의 지베렐린을 생산하는 것으로 확인되었다. 또한 두 균주는 levan을 생산하는 것으로 확인되었다. 균주의 대량배양을 위하여 8L jar fermentor에서의 최적탄소원, 질소원, 온도, 배양속도, 공기주입량, pH, 배양시간을 조사한 결과 ammonium sulfate, molasses, 30℃, 200 rpm, 2.5 NI/min, pH 7.0, 20 hr 으로 조사되었다. 분말제제 제조를 위하여 최적 담체 선발한 결과 zeolite로 조사되었다. P. aurantiaca IB5-10과 IB5-14 의 분말제제의 경우 농진청이 고시한 온도안정성 조사에 따라 1년간 보증기간을 설정할 수 있었다. P. aurantiaca IB5-10과 IB5-14의 시제품을 갯메꽃과 갯까치수영, 갯쇠보리에 처리한 결과 무처리구에 반하여 30% 이상 높은 생장촉진능을 확인할 수 있었다. 또한 고온, 고염조건의 갯쇠보리시험구에서는 10일간 80%이상의 생존율을 확인할 수 있었다. 그리고 경북 포항의 화진해수욕장에서 in situ 시험을 실시한 결과 갯메꽃 무처리구에 반하여 35% 이상의 발아촉진능을 확인할 수 있었다. 이 결과 선발된 다기능 PGPR 균주가 다양한 환경스트레스조절과 식물생장촉진능을 나타내는 것을 확인할 수 있었으며 이것은 다기능 PGPR균주는 파괴된 해안사구생태계 복원에 매우 용이하다고 생각된다. 이것은 친환경 생태계복원용 미생물제제로서 매우 기대가 된다고 생각된다. Coastal sand dune lies on the border between the sea and land. This area exhibits its own unique ecosystem owing to the combination of various organisms. It also serves as a storage area for groundwater, breakwater, and also as a recreational area for people. However, broad area of Korea's coastal sand dune is threatened by coastal erosion, desertification, overdevelopment and sea level rises caused by climate change. These adverse factors could result in the loss of sand dune plant habitats with the destruction of the coastal sand dune ecosystem. Rhizobacteria is the most important community in many ecosystems. It has a significant role within many coastal sand dune ecosystem cycles. Therefore, using sand dune plant rhizobabacteria is by far the most effective method in preventing the decrease in the sand dune plant ecosystem. In order to develop the multi-functional rhizobacteria that can exert a positive effect on the growth of plants growing in the coastal sand dune located along East Coast of Pohang, Korea, rhizobacteria of 11 different plants from this area were isolated 1,330 rhizobacteria. Among these, 23 strains were able to produce plant hormones such as auxin, gibberellic acid, and these had spectrum of antagonism toward various phytopathogenic microbes. To know the mechanism of this antifungal activity, these 23 strains were subjected to further analyses; 19 strains of these produced siderophore as determined by color reaction on CAS-blue plate, 4 strains produced antifungal β-glucanase as judged by color change on CMC-Congo red plate, 13 strains were able to utilized insoluble phosphate salts, also determined by clear zone formation on Pikovskaya medium. Identification of the strain was assigned to all 23 strains by 16s rDNA sequence analysed, and all were identified to be in the genus of Bacillus and Pseudomonas. Multi-functional PGPR P. fluorescens IB4-14, P. aurantiaca IB5-8, IB5-10 and IB5-14 were selected from 23strains. Four PGPR were selected based on their high production rate of auxin, gibberellic acid and insoluble phosphate solubilizing enzyme. One strain of these, denoted P. fluorescens IB4-14, showed ACC deaminase activity which is known to be involved in the resistance of environmental stress such as salt and drought. Four PGPR could stimulate the seed germination up to 15% on Lysimachia mauritiana (Maurit Loosestrife), Atriplex gmelini C. A. Meyer.(Hosoba-hama-akaza), Lathyrus japonica wild. (Beach Pea) and Calystegia soldanella (Sea Bindweed). When the pots were treated with the P. fluorescens IB4-14, P. aurantiaca IB5-8, IB5-10 and IB5-14 the growth of C. soldanella was over 20% higher than non-treatment. As the selected PGPR were treated on C. soldanella under the high drought condition, the stressed plant could survive up to 50% for 50 days. Among these, P. aurantiaca IB5-10 and IB5-14 could be verified production capacity of ABA (abscisic acid), JA (jasmonic acid), and zeatin (natural cytokinin) as plant growth regulating hormone as well as IPA (indole-3-propionicacid) by HPLC and GC-MS. And P. aurantiaca IB5-10 could be verified 5 kinds different of gibberellic acids. P.aurantiaca IB5-14 could be verified 7 kinds different of gibberellic acids by GC-MS. Also, Two strains could produce levan. The optimal carbon source, nitrogen source, temperature, agitation, aeration, pH and culture time for the P. aurantiaca IB5-10 and IB5-14 growth were ammonium sulfate, molasses, 30℃, 200 rpm, 2.5 NI/min, pH 7.0 and 20 hr in 8L jar fermentor. The optimal inorganic carriers for the P. aurantiaca IB5-10 and IB5-14 stablization were zeolite. Powder-type formulation of P. aurantiaca IB5-10 and IB5-14 could set up guaranteed for a year by improvement and standard of thermal stability test (Rural development administration, Korea). When the pots were treated with the P. aurantiaca IB5-10 and IB5-14 commercial pilot products the growth of C. soldanella, L. mauritiana and Ischaemum anthephoroides (Gramineae). were over 30% higher than those with non-treatment. Also, P. aurantiaca IB5-10 and IB5-14 commercial pilot products were treated on Ischaemum anthephoroides under the high drought and salt condition, the stressed plant could survive up to 80% for 10 days. When pilot products were treated on Imperata cylindrica var. koenigii. under the high drought and salt condition, the stressed plant could be survive up to 80% for 10 days and the seed germination of Calystegia soldanella was over 35% higher than non-treatment on the field test in Hwa-jin beach, Korea. This research showed that the selected multi-functional PGPR have both plant growth promoting and environmental stresses resistance effects on sand dune plants. Therefore, this multi-functional PGPR will help to promotion of growth and germination rate in sand dune plants. That will make restoring damaged coastal sand dune ecosystem much easier. Also, it will be expected production of various biological control agents for environmental-friendly restoration of ecosystem.
Berberine 含有生藥의 製制化 및 生體利用率에 關한 硏究
Berberine 표준품 및 황련의 메탄올 엑스를 β-cyclodextrin과 포접화합물을 제조하여 침전형성을 방지하므로써 berberind의 약물효과를 증진시킬 뿐만 아니라, 용해도 및 유수분배 계수를 증가시켜 생체이용율을 높이고, 그외에 소장흡수실험, 혈중농도실험, 용출실험, 항균력 측정을 통하여 생체이용율을 비교 분석 하였다. Ber-HCI 표준품과 황련의 메탄올 엑스를 생체이용률을 향상시키기 위하여 β-cyclodextrin과 포접화합물을 제조하여 용해도 실험, 유수분배계수 측정, 주사형 전자 현미경 관찰, 위 및 소장 흡수실험, 혈중농도 측정, 항균력의 측정, 용출 실험을 한 결과, 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. BECD,MECD의 주사형 전자 현미경 관찰결과, BER 및 MEX가 β-cyclodextrin의 수소성 동공내로 유입되어, inclusion complex가 형성됨을 알 수 있었다. 2. 포접화합물의 물에 대한 용해도는 20℃ 및 37℃에서 모두 증가되었고, 유수분배계수는 용매 n-octanol, 크로로포름에서 각각 BER, MEX보다 높았다. 3. BECD 및 MECD의 흡수율은 위, 십이지장 및 공장에서 각가 BER 및 MEX보다 높았으며, BECD보다는 MECD의 흡수율이 증강되었다. 4. BER, MEX, BECD 및 MECD를 마우스에 경구투여했을 때 혈중 berberine의 농도는 모두 30분 후에 최고혈중농도에 도달하였으며, BER 및 MEC의 종합농도가 각각 증가되었고, BECD보다는 MECD의 혈중농도가 높게 유지되었다. 5. BECD 및 MECD의 항균력은 G(+)균 일부분, G(-)군에서 BER 및 MEX보다 각각 향상되었다. 6. BECD 및 MECD 중에 함유된 berberine의 용출율은 0.1N-HCl 용액 및 Ph6.8 인산염 완충액에서 각각 BER 및 MEX 보다 높았으며, MECD의 용출율은 BECD보다 2배 이상 증가하였다. 이상의 실험결과 β-cyclodextrin 포접화합물의 용해도 및 유수분배 계수가 증가되고, 환제 제조후 용출 실험 결과 용출이 크게 향상되는 등 생체이용률 향상에 크게 기여할 것으로 사료된다.
Solid dispersions of poorly water-soluble drug, itraconazole, were prepared with hydrophilic polymer, poly-N-vinylpyrrolidone (PVP) and organic acid, citric acid (CA), to improve the bioavailability. In order to investigate the correlation between bioavailability and physicochemical properties of the different preparation types, the samples were characterized by scanning electron microscopy, differential scanning calorimeter, Fourier transform infrared spectroscopy and x-ray powder diffraction. The particle sizes of solid dispersions were smaller than those of other preparation types. Also, it can be observed that the crystallinity of ITZ in solid dispersions was much smaller than that of other praparation types. The crystal structure of solid dispersed ITZ with PVP and CA (SITPC) was different that of intact ITZ. The bioavailability of SITPC was higher than that of solid dispersed ITZ with PVP or solid dispersed ITZ with CA. It is concluded that the solid dispersion using the spray-drying method with PVP, hydrophilic polymer, and citric acid, organic acid, may be effective for the improvement of the bioavailability.
알로에 및 흑목이 다당을 이용한 피부보습제의 제제화 연구
장영임 강원대학교 산업대학원 2014 국내석사
For the development of natural moisturizing cosmetics, the formulation optimization of Auricularia auricula extract and Aloe vera gel as basic ingredients were investigated using Taguchi’s approach. Effect of primary additive components(oil, chelating agent and preservative) on the base of Auricularia auricula extract and Aloe vera gel was also examined by design of mixture experiment. The optimum content of basic ingredients was obtained at Auricularia auricular extract of 0.625% and Aloe vera gel of 2.0%, and desirable results for viscosity, phase stability and color change as objective variables were obtained at oil of 0.37%, chelating agent of 0.63% and preservative of 1.0%(w/v)for the basic formulation. Water absorption-retention ability of Formulation 2, optimized by Taguchi method and design of mixture experiment was tested to compare with Formulation 1 which doesn't contain additive components. Formulation 2 showed a better film forming ability and exhibited very higher moisturizing ability than that of formulation 1. In order to keep the formulation from environment in its practical usage, challenge test in which the inoculation was made with three kinds of bacteria and two kinds of fungi was carried out and the conformance of Formulation 2 was identified in observation period of four weeks. Finally, the results of sensory test on Formulations 1 and 2 showed that the sensory score of Formulation 2 was higher than that of Formulation 1. It was found that the formulation prepared by this study had the potential of a good moisturizing product.