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박형준 국립부경대학교 대학원 2026 국내박사
최근 몇 년간 기후변화로 인해 넙치 양식장에서 대량 폐사가 발생하는 등 심각한 경제적 손실이 초래되고 있다. 여름 및 겨울철 수온 변동과 태풍 및 집중호우로 인한 담수 유입 등의 문제가 빈번히 발생하고 있으며, 이는 넙치 양식장의 사육 환경뿐만 아니라 넙치 개체에 환경 변화에 따른 스트레스를 유발하고 있다. 또한 전 세계적으로 해양환경에서 미세플라스틱이 검출됨에 따라 새로운 오염물질로서 환경 문제가 대두되고 있다. 미세플라스틱이 해양생물의 체내에 축적될 경우 강한 독성 효과로 인해 스트레스를 유발할 수 있으며, 이는 넙치 양식장으로 유입되어 넙치가 미세플라스틱에 노출될 위험을 증가시킨다. 따라서 환경 변화로 인한 넙치의 폐사를 저감하고 안정적인 생산을 도모하기 위해서는 적정 수온 및 염분 조건과 미세플라스틱 노출에 따른 영향에 대한 조사·탐색이 선행되어야 한다. 1. 수온변화에 따른 넙치의 스트레스 반응 본 연구에서는 수온 변화에 따른 넙치의 스트레스 반응을 조사하기 위해 수온 하강 및 상승 조건에서 넙치와 넙치 수정란을 대상으로 생리학적 지표와 스트레스 관련 유전자 발현을 비교·분석하였다. 수온하강에 따른 넙치의 스트레스 반응 급격한 수온 변화는 어류의 생리학적 측면에서 스트레스를 유발한다. 본 연구에서는 넙치를 각 수온 조건 (9, 12, 15, 18 및 21℃)에서 24시간 및 48시간 동안 노출시킨 후 혈액생리학적 분석, 스트레스 단백질로 알려진 Hsp70 mRNA 발현, 산소 소비량을 조사하였다. 혈액학적 분석 결과, hematocrit (Ht) 및 hemoglobin (Hb), 혈장 코티졸 및 글루코스, aspartate aminotransferase (AST) 및 alanine aminotransferase (ALT), NH₃, 삼투질 농도(osmolality), 총단백질(total protein, TP)은 9℃ 및 12℃ 처리구에서 다른 수온 처리구에 비해 대부분의 항목에서 유의적인 차이를 보였다. Hsp70 mRNA 발현은 9℃ 및 12℃에서 낮은 발현 수준을 나타내었다. 이러한 결과는 수온 하강에 따른 넙치의 스트레스 반응을 이해하기 위한 기초자료로 활용될 수 있다. 수온상승에 따른 넙치의 스트레스 반응 본 연구는 고수온 환경에 노출된 넙치의 생존율, 혈액생리학전 변화 및 스트레스 단백질인 Hsp70 mRNA 발현을 조사하였다. 15일 간의 생존율 조사에서는, 30℃에 노출된 넙치가 10일째에 전량 폐사하였으나, 22 및 24℃에서는 100% 생존율을 보였고, 26 및 28℃ 처리구는 각각 90 및 70%의 생존율을 보였다. 혈액학적 지표인 Ht 및 Hb, 코티졸 및 글루코스, AST 및 ALT, 암모니아, 삼투질농도 및 총단백질 등 대부분의 항목에서 대조구에 비해 28 및 30℃ 실험구에서 유의한 차이를 나타내었다. 또한 혈장 내 superoxide dismutase (SOD) 및 catalase (CAT)의 활성은 22℃인 대조구에 비해 30℃에서 유의적으로 높은 결과값을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 여름철 고수온으로 인한 넙치의 폐사 저감 및 양식장 사육환경 등의 개선을 위한 기초자료로 활용될 수 있을 것으로 기대된다. 수온변화에 따른 넙치의 혈액생리학적 분석 및 Hsp70 mRNA 발현 본 연구에서는 수온 변화에 따른 넙치 수정란의 부화율과 미성어 및 자어 단계에서의 스트레스 반응을 규명하기 위해 혈장 내 SOD 및 CAT 활성과 Hsp70 mRNA 발현을 조사하였다. 수온 변화에 따른 넙치 수정란의 부화율은 18℃ 처리구와 비교했을 때 10℃ 처리구에서 유의한 차이를 보였다. 수온별 부화 자어의 Hsp70 mRNA 발현을 RT-PCR 및 qPCR로 분석한 결과, 18℃ 처리구보다 10℃ 및 12℃ 처리구에서 높은 발현 수준이 확인되었다. 또한 넙치의 혈장 내 SOD 및 CAT 활성은 18℃ 처리구에 비해 9℃ 처리구에서 유의하게 증가하였다. 각 수온 조건에서 24시간 및 48시간 노출 후 조직별 Hsp70 mRNA 발현을 분석한 결과, 9℃와 21℃ 처리구를 비교했을 때 간, 신장 및 비장에서는 24시간 및 48시간 노출 동안 유의한 차이를 보였으나, 아가미에서는 유의한 차이가 나타나지 않았다. 이러한 결과는 넙치 종자 생산 및 양성 과정에서 수온 관리의 중요성을 시사하는 기초자료로 활용될 수 있다. 2. 염분변화에 따른 넙치의 스트레스 반응 스트레스를 유발하는 환경 요인 중 염분 변화는 어류의 생존과 성장에 큰 영향을 미친다. 본 연구에서는 넙치 양식에 적합한 염분 범위를 규명하기 위해 각 염분 조건(25, 20, 15 및 10 psu)에서 24시간 및 48시간 동안 넙치를 노출시킨 후 혈액생리학적 분석과 Hsp70 mRNA 발현을 조사하였다. 혈액학적 분석 결과, Ht 및 Hb, 혈장 코티졸 및 글루코스, AST 및 ALT, Na⁺, K⁺, Cl⁻, NH₃, 삼투질 농도 및 총단백질은 저염분 조건인 10 psu 및 15 psu에서 다른 염분 처리구에 비해 대부분의 항목에서 유의적인 차이를 보였다. 혈장 내 SOD 및 CAT 활성 또한 자연해수 대조구에 비해 저염분 처리구에서 증가하는 경향을 나타내었다. 스트레스성 단 백질로 알려진 Hsp70 mRNA 발현 역시 저염분 조건에서 유의적으로 증가하였다. 이러한 결과는 염분 변화에 따른 스트레스가 넙치의 생체 방어 메커니즘과 항상성 유지를 위해 혈액학적 반응, 호르몬 분비 및 단백질 발현 증가로 이어지는 것으로 판단되며, 저염분 환경에 대비한 넙치 양식의 기초자료로 활용될 수 있을 것으로 기대된다. 3. 미세플라스틱 노출에 따른 넙치의 스트레스 반응 미세플라스틱(microplastics, MPs)은 크기 5 mm 이하의 미세한 플라스틱 입자로 해양환경에서 광범위하게 검출되는 오염물질이다. 이는 하천 방류수, 하수 처리수, 양식 현장에서 사용되는 각종 사육 기자재(부표, 로프 등)로부터 발생하여 해저 퇴적물 및 육상 양식장 수조 내에 축적될 수 있으며, 양식 어류의 생리적 스트레스, 조직 손상 및 산화적 스트레스 반응을 유발할 수 있다. 본 연구에서는 미세플라스틱 노출에 따른 넙치를 대상으로 혈액생리학적 변화, 장내 미생물 군집 구조, 분자생물학적 발현 양상을 분석하였다. 장내 미생물 군집 분석 결과, 시료 유형에 따라 뚜렷한 군집 구조 변화가 관찰되었다. RNA-seq 분석을 통해서도 다양한 유전자의 발현 변화가 확인되었으며, 미세플라스틱 노출에 특이적으로 반응하는 유전자들이 규명되었다. 이러한 결과는 양식 현장 관리, 환경 정책 수립 및 학문적 응용 분야에서 실질적인 기초자료로 활용될 수 있을 것으로 판단된다.
ABSTRACT A Study on the Investment Decision of Olive Flounder Aquaculture Industry Considering Uncertainty Heon-Dong Lee Department of Food and Resource Economics, Korea University Advised by Professor Byeong-il Ahn Olive flounder(Paralichthys olivaceus) is one of the most important species in the aquaculture industry and the most popular sliced raw fish in Korea. However, industrial competitiveness has significantly deteriorated due to an increase the mortality rate in production, higher production costs, and food safety problems in recent years. Recirculating Aquaculture System(RAS) have been attracting attention as a mean to improve these chronic problems of olive flounder aquaculture industry. The introduction of RAS is expected to contribute to productivity improvement, reduction of farm operation cost, and competitiveness enhancement of the olive flounder aquaculture industry. Despite the need for RAS, however, it is necessary to make prudent investment decisions both farmers and government as it requires a lot of initial investment cost. This dissertation aims to analyze investment decision-making problems from the standpoint of farms and government in the Korean olive flounder aquaculture industry. First, a real option model is used to analyze the RAS investment decisions of olive flounder farms. It is assumed that the price of olive flounder is considered as a variable reflecting the uncertainty and follows the geometric Brownian motion(GBM) stochastic process. Second, to analyze the government's decision-making problem, I measured the social welfare change due to the introduction of RAS and derived the optimal support scale to balance with the investment cost. The analytical model is based on the stochastic model based on the Monte Carlo simulation, reflecting the uncertainty of the olive flounder price as well as the deterministic model with fixed price. The main results of this dissertation are summarized as follows. As a result of analyzing the investment decision problem of the nationwide average farm, the real option’s threshold price is 14,757 won, when productivity increased by 15% due to introduction of RAS. On the other hand, the investment threshold price for net present value(NPV) is 7,955 won under the same conditions. Thus, real option approach provides more conservative investment decision criteria than net present value. Analysis of the government decision-making problem showed that the total investment cost and social welfare change in the RAS project were balanced when 65~70 farms were supported in both deterministic and stochastic model. This is equivalent to 12~13% considering that the number of olive flounder farms are 522 as of 2018. The total investment cost is 2,275~2,450 billion won, and the net government expenditure is 1,365~1,470 billion won. When the number of sufficiently large Monte Carlo simulation is secured, the optimal support scale converges to the analysis of the deterministic model. Keywords : Olive Flounder, Price Uncertainty, Investment decision, Real Options, Social Welfare
한·중 FTA와 제주 넙치의 중국 수출 활성화 방안 연구
한·중 FTA 발효와 제주도 수출 1위인 양식 넙치의 대중국 수출 활성화 방안을 위하여 최근 10년(‘05∼’14년)간 양식 넙치에 대한 자료를 연구한 결과를 요약하면 다음과 같다. 우리나라 수산물 가운데 제주도의 양식 넙치 생산량 비중은 49.9∼62.4% 범위, 생산액은 48∼61.3% 범위 , 양식 수면적은 59.4%(1,308천㎡)으로 차지하는 것으로 나타나 우리나라의 양식넙치 생산량의 대부분을 차지하고 있었다. 또한, 양식 넙치의 주요 국가별 수출 변동 추이는 일본이 ‘05년 62.1%에서 ’14년에는 37.0%로 감소한 반면, 미국, 중국, 태국 등은 증가하고 있는 것으로 나타났다. 본 연구대상 국가인 중국에 대한 양식 넙치의 수출경쟁력을 분석한 결과 대중국 무역특화지수(TSI)는 넙치 활어가 2010년도에 1.0으로 수출특화로 나타난 것을 제외하고 전 기간 –0.25 ∼-1.00 범위로 모두 수입특화로 나타났다. 그 이유는 넙치 활어 대중국 수출이 시장진입을 위한 일시적인 노력은 있었지만 지속적으로 추진하지 못한 결과로 판단된다. 한편, 냉동 넙치는 전 기간 0.99∼1.00 범위로 수출특화 품목을 자리매김 하고 있는 것으로 나타났으며, 냉장 넙치도 2012년부터 수출특화로 나타난 것이 특징적이다. 한·중 FTA 발효 시 최근 10년(‘05∼’14년)간 대중국 넙치 수출입 효과 분석에서 수출효과는 연간 수출증가물량이 22톤으로 연평균 수출액의 3.3% 인 174천 달러로 추정된다. 반면 대중국 수입효과는 연간 수입 증가 물량이 22톤으로 180천 달러로 연평균 수입액의 18% 증가하는 것으로 추정된다. 그리고, 한·중 FTA 발효 후 10년간 수출입 효과를 예측한 결과 총 수출증가액은 2,204천(총 수출액 3.54%) 달러 증가하였다. 한편, 대중국 수입 넙치는 양허 제외 품목으로 현행 관세를 향후 10년간 유지한다고 했을 때 총수입증가액은 573천(총 수입 증가액의 4.37%)달러 증가하였다. 위와 같은 연구결과에서 제주 넙치의 대중국 수출 활성화를 위한 시사점은 다음과 같다. 가장먼저 제시된 문제점으로 중국내 제주 넙치 활어를 유통할 밴더 확보, 수출유통비용 부담, 대중국 넙치 소비시장 마케팅이 미흡 등은 시급히 개선해야 할 부분이다. 따라서 첫째, 제주도정에서 수출 전문어가 육성 및 전문 법인화 설립 유도, 둘째 도내 수산물수출단체 단일화 및 현지 법인 설립 추진, 셋째, 제주해운공사 설립 및 제주-중국-일본 정기운항선박 유치, 넷째 제주발전연구원 내 가칭 “국제시장관측센터” 설치를 통해 수출 상대국의 시장 환경을 파악하여 제주도 수출경쟁력 강화 할 수 있는 정보를 제공할 필요가 있다. This study is about farmed flatfish, which is the top export item of Jeju Island with the effectuation of the Korea-China Free Trade Agreement(FTA), in order to look into ways of activating its exports to China. The gist for the study is as follows. In the last 10 years(‘05∼’14), 49.9 to 62.4 percent of Korea’s farmed flatfish has been produced in Jeju Island and the flatfish output of Jeju Island accounted for 48.0 to 61.3 percent, that most flatfish output of Korea is made of, having 59.4 percent(1,308,000㎡) area of fish farming. In terms of the share of major countries’ trade, the share of Japan was 62.1 percent in 2005 but it dropped to 37 percent in 2014. On the other hand, the flatfish exports of the USA, China and Thailand are on the increase. According to the analysis on the export competitiveness of Korea to China based on the China Trade Specialization Index (TSI), index of the live fish stood at -0.25 to -1.00, which is “import specialization” for the whole period except for the index of 1.0, indicating “export specialization” in 2010. That’s because there have not been sustained efforts to break into Chinese flatfish market. Meanwhile, the index of frozen flatfish stood at 0.99 to 1.00, which is “export specialization” during the whole period and the index of refrigerated flatfish has indicated “export specialization” since 2012. On the analysis of the effects on exports of flatfish with the Korea-China FTA for 10 years (‘05∼’14), it was found that the annual export increase was 22 tons and 3.3 % of the average annual export, worth 174,000 USD. Also, the imports after the FTA for the period increased 3.54%, worth about 2,204,000 USD. Since the import of flatfish from China is not permitted, if the current tariff system is kept for the next 10 years, the total import increase will be 573,000 USD, which is 4.37% of the total import increase. According to the result of the study above, the followings can be suggested for export promotion of Jeju Island’ flatfish to China. Most of all, we need to work on securing vendor for the distribution of Jeju Island’s flatfish to China, bearing of the costs for the export distribution, improving the inadequate marketing in the Chinese market. Therefore, first, export specialists should be nurtured and the foundation of the specialized enterprise should be encouraged by Jeju Special Self-Governing Province. Second, the unification of the various marine product export organizations and the foundation of local enterprises are essential. Third, the foundation of Jeju Shipping Corp., Ltd. and the launching of regular running ships among Jeju, China and Japan are required. Finally, “International Market Observatory”, tentatively named by Jeju Development Institute, will help understand market environment of trading partners and provide information to strengthen export competitiveness of Jeju.
정재은 과학기술연합대학원대학교 2020 국내박사
The Olive flounder (Paralichthys olivaceus) is a flatfish which is an economically valuable in fisheries because of its large size and flesh quality. This species have the most extreme asymmetric body morphology of vertebrates to adapt a benthic lifestyle. However, the evolution of these developmental and physiological phenomena is still remains unknown part. We performed whole-genome de novo assembly as chromosomal scale and annotated the assembled genome. Through genome-wide comparative analysis with other teleost species, we illuminated the strategies of Olive flounder to adapt to dim benthic habitat. Olive flounder has 44 specific gene families including homeodomain-interacting protein kinase (Hipk) genes that functionally enriched to the eye development and migration during metamorphosis. And Olive flounder might have adapted to the dark environment by expansion rhodopsin (RHO), long wavelength sensitive opsin, gene family. Moreover, the sex of this species is determined by genetic background but also by environmental factor, such as temperature. We configured a hypothetical model of gender reversal at high temperatures. And the duplication of voltage-gated calcium channel alpha (CACNA) family genes suggest that calcium-dependent steroidogenesis process has been reinforced in Olive flounder. The olive flounder male genome presented here may contribute to provide a valuable genomic resource to study the genetic, genomic and biological basis. We expect to result of this study contribute to molecular breeding in the aquaculture industry. 넙치 (Paralichthys Olivaceus)는 가자미목 넙치과에 속하는 어류로, 크기가 크고 육질이 훌륭하기 때문에 양식업에서 경제적으로 가치 있는 어종이다. 일반적으로 암컷 넙치가 수컷보다 더 빨리 자라고 성체의 크기가 더 크다는 것은 잘 알려져 있다. 넙치의 성별은 유전적 배경뿐만 아니라 온도와 같은 환경적 요인에 의해 결정된다. 또한, 이 종은 해저 생활방식에 적응하기 위해 척추동물 중 가장 극단적인 비대칭적 신체 형태학을 가지고 있다. 그러나 이러한 발달과 생리적 현상의 진화과정은 여전히 알려지지 않은 부분으로 남아 있다. 본 연구는 양식된 넙치 수컷의 유전체를 분석하여 넙치 종의 진화와 생물학적 특징에 대한 통찰력을 제공하는 것을 목표로 한다. 이를 위해 단일 수컷 개체에서 전장유전체를 시퀀싱 하여 조립 후 주석을 달았다. 넙치를 포함한 11종의 해양생물의 유전체의 단백질 유전자를 비교 유전학적으로 분석한 결과 homeodomain-interacting protein kinase (Hipk) 유전자를 포함한 넙치의 변태 및 안구 이동과 관련이 있는 44개의 넙치 특이적 유전자 패밀리를 동정하였다. 넙치 확장 유전자 패밀리 분석을 통해 넙치가 해저의 어두운 환경에 적응하기 위해 long wavelength sensitive opsin (RHO) 유전자의 확장으로 시각계를 진화시켰음을 유추하였다. 또한 환경 스트레스로 인한 성 전환의 가상 메커니즘을 구성하였다. 특히, voltage-gated calcium channel alpha (CACNA) 유전자 패밀리의 확장은 칼슘 의존성 스테로이드 생성 과정이 넙치에서 강화되었음을 시사하였다. 이 연구의 결과는 넙치의 진화 과정을 이해하고, 복잡한 성 전환 메커니즘에 대한 통찰력을 제공할 뿐만 아니라 분자 육종에 기여할 것으로 기대된다.
양식 넙치에 감염되는 스쿠티카섬모충 Philasterides dicentrarchi에 관한 연구
Scuticociliatosis has been infamous for one of the most damaging diseases in flounder farms, showing more than 40% infection rates including mixed infection with viral and bacterial diseases. The present study has aimed to find suitable ways of minimizing the damages against the ciliates by investigating the infection routes and treatment methods. The ciliate isolated from the brain of juvenile flounder was identified as Philaseridies discentrachi by the morphological and genetic examinations, and investigated biological characters also. Since the ciliate showed distinctive pathogenic symptoms in juvenile flounder injected artificially with the pathogen, infection routes and treatment trials were also examined in vitro. The prevalence of the Scuticociliatosis in inland flounder farms in Jeju island was surveyed for ten years from 1995 to 2004. The occurrence ratio had maintained as less than 10% until mid 1990s, and shown increasing trends from year 1998. The ratio was equivalent to over 40% of overall disease occurrences in flounder farms since year 2000. The monthly infection rates by the ciliate indicated relatively higher levels from May to September, and mixed infection phenomena with bacterial disease of Vibriosis were common. The Scuticociliates has active propagation ability by utilizing organic matters obtained from cell strain, bacteria, assorted feed, brain tissue and rotifer tissue. The ciliate expressed population growth activity under the conditions of 5~45 ppt in salinity and pH 6-9. The ciliate had survived and propagated under the water temperature ranges from 10~30℃ showing active growth capability of 10~25℃ temperature range. To investigate its pathogenicity, the parasite was injected into two groups of flounder juveniles (3 and 5 cm in total length) and observed infection rate, time to brain invasion, and mortality of specimen. Smaller experimental group of 3 cm in total length had shown 40.0 and 90.1% infection rates 4 days and 24 days later, respectively. Larger group of 5 cm in total length had proved relatively late infection rates than in smaller group, showing only 20% infection rate at 8 days after inoculation, and 42% at 16 days. However the rate increased markedly as 81% at 24 days. But no infection observed at control group while test period. The days until invading to brain were 14 days and 20 days in both groups showing faster penetration in smaller fish. The ciliate had resulted in fatal casualties especially in smaller fish. The 3 cm fish group infected with ciliates was shown first mortality at 5 days after innoculation and fatal mortality of 95.6% 28 days later. The 5 cm group fish was observed first mortality on 18 days after inoculation and 71% mortality 28 days later. But ciliate infection and mortality of specimen were not shown in control groups in both size experimental groups. When the infection route traced by histopathological examination on artificially inoculated flounder, the ciliate had mainly gone through soft subcutaneous tissue such as caudal fish, mouth, and skin. The infection into caudal fin was initiated from the capillary vessel which distributed along the caudal fish membrane and soft ray and flowed into caudal peduncle. And the ciliate finally reached into brain through vertebra and spinal cord, and propagated rapidly. Infiltration from the dorsal and anal fins was started from the capillary vessel of fin rays, same as in the infection route from the caudal fin, destroyed fin membrane, and infiltrated into base muscle of the fin rays. The ciliate who penetrated into muscle had propagated by various methods such as necrotic symptoms of muscle from fins, propagation along the vertebra by infiltration into spinal column vertebra from muscle attached with neural spine and hemal arch, and infiltration into muscle from subcutaneous tissue of fins. The infection route through the head part was mainly initiated in oral part. The parasite had infiltrated into soft tissue of jaw as well as mouth, and spreaded into whole head tissue including eyes. Once the ciliate penetrated into eyes, it reached up to brain through optic nerve system. Some ciliate that did not succeed in passing into eyes could reach on brain from cranium through neural arch. After infiltrating into brain of the specimen, the ciliate had spreaded over the whole brain and proliferated up to tail part through spinal cord along the subcutaneous tissue of meninges. The infection route through the gill was observed on mouth at first stages. The ciliate moved to oral cavity after infiltration into mouth, then propagated in large quantities at soft oral cavity wall. Finally the ciliate reached into gill arch and filament. Some ciliate passed through the soft part of the operculum and reached to the gill. Other infiltration route was observed in anal or ventral fin, and moved to body surface and propagated to anus in large quantities. Also ciliates are infiltrated into abdominal cavity through anus. Some ciliates pass through into both intestine wall and pancreas tissue. Therapeutic experiments were tried with three kinds of chemical compounds of formalin, hydrogen peroxide, and Jenoclean (Bio-Resource, Korea). The extermination time of the parasites with formalin was at 30 minutes both in 300 ppm and 400 ppm, 60 minutes in 200 ppm, 90 minutes in 100 ppm, and 120 minutes in 50 ppm concentrations. In hydrogen peroxide treatments the time showed at 60 minutes in 300 ppm, 90 minutes in 200 ppm, and 150 minutes at 150 ppm and 100 ppm concentrations. And the ciliate was terminated after 90 minutes in 500 ppm, 120 minutes in 400 ppm, 150 minutes in 300 ppm of Jenoclean. 스쿠티카증은 넙치양식장에서 발병되는 전체 질병 가운데 혼합감염 포함 40% 정도의 발병률을 보이고 있어 양식넙치에 가장 문제가 되는 질병중의 하나이다. 본 연구는 이와 같이 육상수조에서 양식되는 넙치에 감염되어 많은 피해를 입히고 있는 스쿠티카충의 감염예방과 치료를 위한 자료를 제공코자 수행하였다. 먼저 이 질병의 발병동향을 파악하기 위해 최근 10년 동안 제주지역 넙치양식장의 스쿠티카증 발병현황 등을 조사하였다. 다음에 스쿠티카충이 감염된 넙치의 뇌에서 스쿠티카충을 분리하여 Philasterides dicentrarchi로 동정하였으며 생육환경 등의 생물학적 특성을 조사하였다. 그리고 넙치 치어에 인위감염 시험을 거쳐 이 충의 병원성을 확인하였으며, 감염예방과 치료 자료를 제공하기 위해 어체내 감염과정을 밝히고 화합물의 종류별 in vitro 구제실험을 실시하였다. 1995년부터 2004년까지 최근 10년 동안 제주지역 넙치양식장의 스쿠티카증 발병동향을 조사한 결과 1998년도부터는 급격히 발병비율이 증가하여 2000년도 이후에는 연간 발병건수는 500건 내외, 총 발병건수 대비 스쿠티카증 발병률은 40 % 전후로 높아졌다. 월별 발병동향은 5월에서 9월까지 많이 발병되었으며, 혼합 감염되는 세균성질병은 비브리오병이 가장 많았다. 양식넙치 치어의 뇌에서 스쿠티카충을 분리하고 형태적?유전적 검토 결과 P. dicentrarchi로 동정되었으며, 세포, 세균, 넙치치어 배합사료, 뇌 조직과 로티퍼 조직 등의 유기물을 먹이로 활발히 증식하였다. 생육환경은 염분농도 5~45 ppt, pH 6~9 범위에서 증식이 이루어졌으며, 온도는 10~30℃ 범위에서 생존 및 증식이 가능하나 10~25℃ 범위에서 활발한 증식이 이루어졌다. 이 스쿠티카충의 병원성을 밝히기 위해 넙치 치어 3 ㎝ 그룹과 5 ㎝ 그룹에 인위 감염시킨 후 감염에 따른 감염율과 폐사율 등의 병원성을 조사하였다. 감염률 시험결과 3 ㎝ 그룹인 경우 4일째에 40%가 감염되었으며, 24일째에는 감염률이 90.1%로 대부분의 실험어가 감염되었다. 5 ㎝ 그룹은 접종 후 8일째 최초로 20%의 감염률을 보여 3 ㎝ 그룹에 비해서 초기 감염률이 낮았으나 24일째에는 81%에 달했다. 뇌 침투는 3 ㎝ 그룹은 충 접종 후 14일 만에, 5 ㎝ 그룹은 20일 만에 각각 확인되어 어체가 작을수록 뇌에 침투가 빨리 이루어졌다. 폐사율 실험결과, 이 스쿠티카충 감염에 의한 3 ㎝ 그룹의 피해는 치명적이었다. 접종 후 5일째부터 폐사가 시작되었으며, 28일 만에 95.6%의 높은 폐사율을 보였다. 5 ㎝ 그룹은 인위 접종 후 18일째에 처음으로 폐사되기 시작하였으며, 28일 동안 71%가 폐사하여 3 ㎝ 그룹에 비해 폐사율이 낮았다. 인위 감염시킨 실험어를 병리조직학적 관찰을 통하여 어체 감염경로를 확인한 결과 최초 감염은 주로 지느러미나 머리 부분의 부드러운 조직에 감염된 후 체내로 침투하였다. 꼬리지느러미를 통한 감염과정은 꼬리지느러미 막과 모세혈관을 따라 미병부로 침투하였으며, 척추골과 척수에 침투한 후 척수 피하조직을 따라 뇌에 도달하였다. 등지느러미와 뒷지느러미를 통한 침투는 최초에 지느러미 모세혈관이나 지느러미 막에 침투한 후 지느러미 기부 근육으로 침투하였다. 그 후 지느러미 기부 근육을 괴사시키거나 신경극이나 혈관극과 평행으로 분포하는 근조직을 따라 척추 부위로 침투하였다. 이외에도 지느러미 표피를 따라 체표로 이동한 후 근육으로 침투하는 경우도 있었다. 두부 감염은 주로 주둥이를 통해서 감염된 후 두부 골격과 이를 덮고 있는 근조직 사이로 두부 전체에 확산되었으며 안구에도 침투하였다. 안구 침투 후 시신경을 따라서 뇌로 침투하였으며, 안구에 침투하지 않은 경우에도 두부에 감염되어 두개골 외벽에 도달한 후 신경공을 통해서 뇌로 침투하였다. 뇌에 침투한 후에는 뇌 전체로 확산되고 척수로 이행된 후 꼬리 쪽으로 이행 되었다. 아가미로 감염되는 과정은 주둥이에 감염된 후 구강으로 이행하여 부드러운 연조직인 구강벽에 증식하였으며, 구강의 표피조직을 따라 세궁으로 이행된 후 새엽의 상피조직과 모세혈관에 침투하였다. 이외에도 아가미뚜껑의 부드러운 피부조직에 감염된 후 아가미 뚜껑 피부조직을 따라 아가미로 이행되었다. 이외에 복강에도 침투하였는데 뒷지느러미나 배지느러미에 감염된 후 체표를 따라 이동하면서 항문주위에서 다량으로 증식하였으며, 항문을 통하여 복강으로 침투하였다. 이 충에 대한 화합물 구제실험 결과 포르말린 300, 400 ppm에 30분, 200 ppm에 60분, 100 ppm에 90분, 50 ppm에서 120분 만에 구제효과를 보였다. 과산화수소 약욕에 따른 구제효과는 300 ppm에서 60분, 200 ppm에서 90분 만에, 150 ppm 처리구와 100 ppm 처리구에서는 150분 만에 각각 운동성을 완전히 상실하여 효과를 보였다. 새로운 구제제로 개발되고 있는 Jenoclean 약욕에 따른 형태적 변화는 농도별 약욕시간에 따라 뚜렷한 차이를 보였다. 500 ppm에 90분, 400 ppm에 120분, 300 ppm에 150분 약욕으로 대부분 세포가 변형되거나 lysis되어 구제효과를 보였다.
시판 넙치용 EF(Expanded Pellet)사료의 품질 평가
문경수 麗水大學校 産業大學院 2003 국내석사
본 연구에서는 현재 생산되어 시판되는 넙치용 EP 사료에 대한 정확한 품질 평가를 통해 향후 품질 개선점과 개발 방향을 제시하고자 사료의 생산현황, 물성, 사료내 영양성분을 조사하고 넙치를 대상으로 사육실험을 실시하여 생물학적 효과를 검토하였다. 1. 넙치용 EP 사료의 현황 국내 양어사료의 2000∼2002년의 생산량은 93,722∼103,033톤 범위였으며, 이중 넙치용 배합사료가 차지하는 비율은 14.3∼15.7% 범위였다. 넙치 양식에서 사용되는 생사료, 분말배합사료 사용량과 생산량 및 배합사료 수입량에 대한 정확한 통계자료는 확보 할 수 없었다. 사료 포장지에 표기된 넙치용 EP 사료의 각 영양소별 함량 중 조단백질 함량은 50.0∼52.0%, 조지방은 7.0∼10.0%, 조섬유는 3.0∼4.0%, 조회분은 15.0∼l8.0%, Ca은 1.0∼2.5%, p은 0.5∼2.7%, Na은 E사만이 2.0%로 표기되어 있었다. 사료제조에 사용되는 사료원료 중 단백질원으로는 어분, 오징어분의 동물성 단백원과 식물성 단백원인 대두박을 주로 사용하였다. 지질원으로는 어유, 비타민은 국내의 경우 Mixture (혼합물) 형태로 공급되고 국외 제품은 혼합물 외에 별도의 비타민 C와 E를 추가적으로 첨가하고 있었다. 회사별 포장지는 주로 내부에는 비닐을 사용하였으며, 외부는 종이를 2∼3겹으로 포장하였고 비닐 코팅된 제품도 있었다. 사료 가루 발생정도는 A사가 가장 많았고, B사와 C사는 가루가 거의 발생하지 않았다. 사료 포장지 표기 내용은 국내 제품은 사료관리법에 의한 일반적인 사항만을 표기하고 있었으며, 국외 제품은 어분함량, 비타민 함량등의 자세한 내용까지 표기하고 있었다. 2. 시판 EP 사료의 물성 평가 사료의 외부 형태 측정결과 L/D 값은 국외 제품인 D, E사는 1.01 과 1.03으로 1:1 비율을 보였으며, 국내 제품은 0.78∼0.93 범위로 약간 납작한 형태를 보였다. L/W 비는 B사가 26.3으로 가장 낮았으며, 나머지 사료는 31.5∼34.5 범위였다. 균일도에서는 C사가 전체적으로 가장 균일하였으며, 그 다음은 D사로 판정되었다. A, E사는 길이와 지름의 편차가 컸으며, B사는 무게의 편차가 큰 것으로 나타났다. 부상율에서는 C사는 100%로 가장 높았으며, B사는 40%, A사는 10%이었다. E사는 2시간 이후 완전 침강하였고, D사는 30분 후 대부분 형태를 유지하지 못하고 가라앉았다. 팽창율은 27.2∼49.3% 범위로 회사별로 차이를 보였으며, 모두 2∼3시간째 최대 값에 이르는 것으로 조사되었다. 3. 영양학적 평가 1) 화학적 평가 일반성분 분석 결과, 포장지 표기 함량은 모두 지켜지고 있는 것으로 나타났다. 총에너지 함량인 DE는 D사가 높은 지방 함량으로 395.4 kcal/100g로 가장 높았으나, 전체적으로 넙치의 요구량 보다 낮은 에너지 함량을 보였으며, C/P 비도 심한 불균형 현상을 보였다. 아미노산 함량에서는 D사가 가장 높았고, E사, A사, B사 순이었으며, C사가 가장 낮았다. 필수아미노산 총량 값도 국외 제품인 D사와 E사가 높았으며, C사가 가장 낮았다. A/E 비율에서는 36.1∼38.8 범위였으며, 각각의 아미노산 성분에 대한 총아미노산 함량비는 사료별로 많은 차이를 나타내었다. 지방산 분석 결과, 포화지방산은 A사와 B사가 높았으며, C사와 D사는 낮았다. 불포화지방산 중 모노엔산은 D사와 E사가 높았으며, A사와 B사가 낮았다. 폴리엔산은 C사가 가장 높았고 B, D, A사 순이였으며, E사가 가장 낮았다. EPA+DHA에서는 E사가 가장 높았으며, C사가 가장 낮았다. 산패도(POV)는 D사가 47.4 meq/kg로 가장 높았으며, 나머지는 4.0∼11.7 meq/kg 범위를 나타내었다. 2) 생물학적 평가 성장률은 B사와 E사가 22.3%, 21.3%로 높았으며, MP구가 11.1%로 가장 낮았다. 사료효율은 A사와 E사가 109.7%와 105.3%로 높았으며, MP구가 43.0%로 가장 낮았다. D사는 80.7%로 EP 사료구 중 가장 낮았다. 단백질전환효율은 E사가 2.72로 가장 높았고, D사가 1.76으로 EP 사료구 중 가장 낮았으며, MP구는 1.43으로 가장 낮았다. 실험 종료 후 전어체의 수분, 조단백질, 조지방 및 조회분 함량에서 실험구간의 유의차는 없었다. 등근육의 수분, 조지방, 조회분 함량은 유의차가 없었으나, 조단백질 함량은 B사가 23.0%로 가장 높았으며, MP구가 20.6%로 가장 낮았다. 간의 수분 함량은 B사가 72.9%로 가장 높았으며, C사와 D사가 67.3%로 가장 낮은 값을 보였다. 조단백질 함량에서는 MP구가 14.6%로 가장 높았으며, D사와 A사가 각각 11.8%와 11.9%로 낮은 값을 보였다. 조지방 함량에서는 D사가 2.3%로 가장 높았으며, 나머지는 0.7∼1.5% 범위였다. 간중량비(HSI)는 D사가 2.7%로 가장 높았으며, MP구가 1.4%로 가장 낮았다. 내장중량비(VSI)는 D사가 7.0%로 가장 높고 MP구가 5.8%로 가장 낮았으며, 나머지 실험구는 6.0∼6.7% 범위였다. 비만도(CF)는 MP구가 1.02로 가장 높고 나머지 실험구는 0.84∼0.90 범위였다. 혈액 성분 중 Ht는 A사가 19.2%로 가장 높았으며, D사가 14.9%로 가장 낮았다. 나머지 실험구는 16.3∼17.0% 범위로 비슷하였다. Hb는 A사가 8.0 g/㎗로 가장 높았고, E사가 4.0 g/㎗로 가장 낮았다. 위 내용물의 양적변화에서는 MP구는 24시간째, A, B, D, E사는 48시간째 완전 배출되었으나, C사는 완전 배출되지 않았다. 장 전단부에서는 MP는 36시간째 완전 배출되었으며, A, B, D사는 48시간째 완전 배출되었다. C사와 E사는 48시간째 사료가 잔존하였고, C사가 더 많은 양이 잔존하였다. 장 후단부에서 MP구는 36시간째, A사는 48시간째 완전 배출되었고, B, E, C, D사 순으로 많은 양이 잔존하였다. 본 연구결과 현재 시판되는 상품용 EP 사료의 문제점과 개선점이 확인되었으며, 환경 친화적이고 고효율의 배합사료가 어민들에게 공급되기 위해서는 본 연구 결과를 토대로 영양적 균형을 고루 갖춘 사료를 제조하는 것이 최우선 과제로 판단되었다. In this study, in order to suggest a future quality improvement and a direction of development through the quality evaluation of commercial EP (Expanded pellet) diet for olive flounder on the present condition of production, physical properties and nutrition of diet were investigated and a breeding experiment was performed to examine biological effect. 1. The present condition of commercial EP diet for olive flounder As of 2000-2002, the output of domestic diet for culture fishes ranged from 93,722 to 103,033, and of this the assorted diet for olive flounder accounted for 14.3- 15.7%. Exact statistical data on the amount used of raw fish diet and commercial compound meal assorted diet and the output and the amount of assorted diet for import in culturing olive flounder could not obtained. Regarding nutrition content of EP diet for olive flounder, crude protein of 50.0-52.0%, crude lipid of 7.0-10.0%, crude fiber of 3.0- 4.0%, crude ash of 15.0-18.0%, Ca of 1.0-2.5%, P of 0.5-2.7%, and Na of 2.0% (only for E's diet) were indicated on the packing sheet. As protein source of raw materials used for diet production, animal protein source of fish meal and squid meal and vegetable one of soy bean meal were mainly used. In addition, fish oil was used as lipid source, and mixture form was supplied for interior product and vitamin C and E were added besides it for foreign product as vitamin source. As regards packing paper by companies, vinyl was mainly used in the inside, while a paper was packed with two or three folds or sometimes vinyl was coated in the outside. Concerning diet powder generation, A's diet was the most, while B's and C's diets were little. With regard to marking on the diet packing sheet, general matters on the Feed Administration Law were marked for domestic product, while details of fish meal content and vitamin content were marked for foreign product. 2. Evaluation of physical properties of commercial EP diet As a result of measuring the appearance of diet, 1.01 and 1.03 were shown as L/D value for D's and E's diets, which indicates proportion of one to one, while 0.78~0.93 were shown for domestic products, which indicates somewhat flat form. The L/W ratio was lowest in B's diet as 26.3, and was 31.5-34.5 in other diets. Concerning about uniformity, C's diet was the most uniform as a whole, and D's diet was the second. A's and E's diets had larger deviation in length and diameter, while B's diet had larger deviation in weight. In reference to the rate floating, C's diet was highest as 100%, B's, diet was 40%, and A's diet was 10%. E's diet fully settled down after 2 hours, and D's diet also settled down after 30 minutes with their form not maintained. Relative to the rate of expansion, they ranged from 27.2 to 49.3% by companies, and all reached peak at 2-3 hours. 3. Nutritional evaluation 1 ) Chemical evaluation As a result of analyzing proximate composition, they were all within the content indicated on the packing sheet. For DE of total energy content, D' s diet showed highest lipid content as 395.4 kca1/100g, but on the whole lower energy content than olive flounder's demand was shown. In addition, the C/P ratio was seriously unbalanced as a whole. For amino acids content, it was high by order of D's, E's, A's, B's, and C's diet. And, for the total amount of essential amino acid, D's and E's diets of foreign ones were highest and C's diet was lowest. The A/E ratio ranged from 36.1 to 38.8, and the content rate of total amino acid to each amino acid element was much different by diets. As a result of analyzing fatty acid, saturated fatty acid was high in A's and B's diets and low in C's and D's diets. Of unsaturated fatty acids, monoene fatty acid was high in D's and E's diets and low in A's and B's diets. Polyene fatty acid was high in order of C's, B's, D's, A's and E's diet. EPA+DHA was highest in E's diet and lowest in C's diet. Peroxide value (POV) was highest in D's diet as 47.4 meq/kg, and ranged between 4.0 and 11.7 meq/kg in other diets. 2 ) Biological evaluation The growth rate was high in B's diet and E's diet as 22.3%, 21.3%, respectively, and was lowest in MP as 11.1%. The diet efficiency was high in A's diet and E's diet as 109.7%, 105.3%, respectively, and was lowest in MP as 43.0%. Of the EP diet group, it was lowest in D's diet as 80.7%. The protein efficiency ratio was highest in E's diet as 2.72 and lowest in D's diet as 1.76 in the EP group, and was lowest in MP as 1.43. After experiment, no significant difference was found in moisture, crude protein, crude lipid and crude ash content of fish over the experimental group. There was no significant difference in moisture. crude ash and crude lipid content of the dorsal muscle, but crude protein content was highest in B's diet as 23.0% and lowest in MP as 20.6%. Liver moisture content was highest in B's diet as 72.9%, and lowest in C's and D's diet as 67.3%. Crude protein content was highest in MP as 14.6% and low in D's diet and A's diet as 11.8%, 11.9%. respectively. Crude lipid content was highest in D's diet as 2.3% and between 0.7 and 1.5% in others. Hepatosomatic index (HSI) was highest in D's diet as 2.7% and lowest in MP as 1.4%. Visceralsomatic index (VSI) was, highest in D's diet as 7.0% and lowest in MP as 5.8%, and ranged from 6.0% to 6.7%) in other groups. Condition factor (CF) was highest in MP as 1.02 and between 0.84~0.90 in other groups. Among constituent parts of the blood, Ht was highest in A's diet as 19.2% and lowest in D's diet as 14.996, which is similar to other groups as 16.3-17.0%. Hb was highest in A's diet as 8.0 g/dℓ and lowest in E's diet as 4.0 g/dℓ. Concerning quantitative changes in the stomach contents, MP was emptied at the 24th hour, and A's, B's, D's and E's diets were fully emptied at the 48th hour, but C's diet was not fully emptied. At the anterior intestine, MP was fully emptied at the 36th hour, and A's, H's and D's diets were fully emptied at the 48th hour. C's and E's diets were left at the 48th hour and C's diet more remained. At the posterior the intestine, MP was fully emptied at the 36th hour, and A's diet was fully emptied at the 48th hour, and B's, E's, C's and D's diets remained much in order. In conclusion, as results of this study, problem and what to improve of commercial EP diet were confirmed, and it is judged that to produce diet with nutritional balance on the basis of the result of this study is the priority problem so that environmental-friendly and high-efficiency assorted diet can be supplied to fishermen.
넙치 사료 내 EPA와 DHA 요구량 설정과 우지(牛脂) 및 계유(鷄油)의 어유 대체 가능성 연구
본 연구는 넙치의 필수 지방산인 EPA와 DHA의 각각의 요구량을 설정하고 어유 대체를 위하여 우지 및 계유로 어유 대체 가능성을 확인하였으며, 어유 대체에 따른 경제적 가치 평가를 실시하였다. 1. DHA 요구량 평가 본 연구는 치어기 넙치에 있어서 사료내 적정 DHA 요구량을 규명하는데 그 목적이 있다. 실험사료는 단백질원으로는 탈지어분(deffatted fish meal) 및 카제인(casein)을 사용하였으며, 지질원으로 코코넛오일(coconut oil)을 그리고 탄수화물원으로 덱스트린(dextrin) 및 밀가루(wheat meal)을 사용하였다. 넙치 치어의 DHA 요구량을 평가하기 위해 DHA 공급원으로 DHA(docosahexaenoic acid) 89%를 사용하여 실험사료내 총 DHA 수준을 0%, 0.5%, 0.75%, 1.0%, 1.25%, 1.5% 그리고 2.0%가 되게 디자인 하였다. 예비사육 후, 평균무게 3.51±0.12g (mean±SD)인 넙치 치어를 40ℓ 사각수조에 각각 15마리씩 수용하여 각 실험구당 3반복으로 무작위 배치하였다. 8주 동안 사육한 넙치의 증체률(WG)과 일간성장률(SGR)에 있어서 DHA를 1.25% 및 2.0%를 첨가하여 공급한 실험구가 대조구에 비하여 유의하게 높은 값을 나타났다(P<0.05). 또한 DHA 0.5%를 첨가한 실험구가 DHA 1.0%, 1.25%, 1.5% 및 2.0%에 있어서 유의한 차이가 있었다(P<0.05). 사료효율(FE)과 단백질전환효율(PER)에 있어서 대조구가 DHA를 1.25%, 1.5% 및 2.0%를 첨가하여 공급한 실험구에 비하여 유의하게 낮은 값을 나타내었다(P<0.05). 하지만 DHA를 0.5% 첨가하여 공급한 실험구가 DHA 1.0%, 1.25%, 1.5% 및 2.0%에 있어서 유의한 차이가 있었다(P<0.05). Broken line model 분석을 통한 최대 성장을 위한 DHA 요구량은 1.26%로 나타났으며, Second order polynomial analysis 분석을 통한 최대 성장을 위한 EPA 요구량은 1.68%로 나타났다. 따라서 본 연구의 결과를 통하여, DHA의 적정 요구량은 1.26%보다는 높아야 하지만, 1.68% 수준이면 충분할 것으로 사료된다. 2. EPA 요구량 평가 본 연구는 치어기 넙치에 있어서 사료내 적정 EPA 요구량을 규명하는데 그 목적이 있다. 실험사료는 단백질원으로는 탈지어분(deffatted fish meal) 및 카제인(casein)을 사용하였으며, 지질원으로 코코넛오일(coconut oil)을 그리고 탄수화물원으로 덱스트린(dextrin) 및 밀가루(wheat meal)을 사용하였다. 넙치 치어의 EPA 요구량을 평가하기 위해 EPA 공급원으로 EPA(eicosapentaenoic acid) 95%를 사용하여 실험사료내 총 EPA 수준을 0%, 0.5%, 0.75%, 1.0%, 1.25%, 1.5% 그리고 2.0%가 되게 디자인 하였다. 예비사육 후, 평균무게 3.50±0.10g (mean±SD)인 넙치 치어를 40ℓ 사각수조에 각각 15마리씩 수용하여 각 실험구당 3반복으로 무작위 배치하다. 8주 동안 사육한 넙치의 성장 결과 증체률(WG)과 일간성장률(SGR)에 있어서 대조구가 다른 실험구간에 있어서 유의하게 낮은 값을 나타내었으며(P<0.05), 또한 EPA+DHA를 각각 0.5%, 0.75% 및 1.0%를 첨가하여 공급한 실험구보다 유하게 낮은 값을 나타내었다(P<0.05). 사료내 EPA 함량이 증가할 수록 증체률(WG)과 일간성장률(SGR)이 증가하는 경향을 확인할 수 있었다. EPA+DHA를 각각 1.0%씩 첨가하여 공급한 실험구가 다른 실험구에 비하여 가장 높은 값을 나타내었다. 또한 EPA가 1.25% 수준을 넘어설때 부터 증체률(WG)과 일간성장률(SGR)이 감소하는 경향을 볼 수 있었다. 사료효율(FE)과 단백질전환효율(PER)에 있어서 또한 증체률(WG)과 일간성장률(SGR)과 유사한 경향을 보였으며, 대조구가 EPA 0.5%를 첨가하여 공급한 실험구를 제외한 구에 있어서 유의하게 낮은 값을 나타내었다(P<0.05). EPA와 DHA를 동일한 수준으로 첨가한 실험구간에 있어서는 EPA와 DHA를 각각 0.75%씩 첨가한 실험구가 가장 높은 값을 나타내었다. Broken line model 분석을 통한 최대 성장을 위한 EPA 요구량은 1.10%로 나타났으며, Second order polynomial analysis 분석을 통한 최대 성장을 위한 EPA 요구량은 1.59%로 나타났다. 따라서 본 연구의 결과를 통하여, EPA의 적정 요구량은 1.10% 보다는 높아야 하지만, 1.59% 수준이면 충분할 것으로 사료된다. 3. 어유 대체원으로써 우지의 수준별 대체 평가 본 연구는 치어기 넙치에 있어서 사료내 어유 대체원으로써 우지의 수준별 대체 평가를 규명하는데 그 목적이 있다. 실험사료는 단백질원으로는 어분(fish meal), 콘글루텐밀(corn gluten meal), 대두박(soybean meal), 새우밀(shrimp meal)을 사용하였으며, 지질원으로 반정제 연어유(salmon crude oil)와 우지(beef tallow)를 그리고 탄수화물원으로 밀가루(wheat meal)를 사용하였다. 실험사료는 어유을 100%로한 대조구 사료를 대상으로 어유 75%+우지 25%, 어유 50%+우지 50%, 어유 25%+우지 75%, 어유 25%+우지 100%, 어유 17%+우지 63%+DHA 20% 및 우지 75.9%+DHA 24.1%로 총 7가지의 사료를 조단백 53.3%, 조지방 11.1% 및 총에너지는 16.2 kJ/g으로 제작하여 평가하였다. 8주 동안 사육한 넙치의 증체률(WG)과 일간성장률(SGR)에 있어서 어유를 우지 75.9%+DHA 24.1%를 첨가하여 공급한 실험구가 대조구에 비하여 유의하게 높은 값을 나타내었다(P<0.05). 어유를 우지 75.9%+DHA 24.1%를 첨가하여 공급한 실험구가 어유 대체 25%, 50%, 75% 및 100% 대체구에 있어서 유의한 차이가 있었다(P<0.05). 사료효율(FE)과 단백질전환효율(PER)에 있어서 어유를 수준별로 대체한 실험구간에 있어서는 유의한 차이가 없었으나, 우지 75.9%+DHA 24.1%구에 있어서는 대조구에 비하여 유의하게 높은 값을 나타내었다(P<0.05). 따라서 본 연구의 결과를 토대로 53.9% 이상의 어분을 사용할 경우 성장률에 있어서 동물성유인 우지를 양어사료의 어유 대체원으로 100%까지 사용이 가능할 것으로 사료되어지나, 근육 내 EPA와 DHA 함량이 계유를 수준별로 증가시킬수록 감소하는 부분을 감안한다면, 25%까지는 대체하여도 성장 및 근육내 지방산 조성에 큰 영향을 끼치지 않을 것으로 사료 된다. 4. 어유 대체원으로써 계유의 수준별 대체 평가 본 연구는 치어기 넙치에 있어서 사료내 어유 대체원으로써 계유의 수준별 대체 평가를 규명하는데 그 목적이 있다. 실험사료는 단백질원으로는 어분(fish meal), 콘글루텐밀(corn gluten meal), 대두박(soybean meal), 새우밀(shrimp meal)을 사용하였으며, 지질원으로 반정제 연어유(salmon crude oil)와 계유(poultry oil)를 그리고 탄수화물원으로 밀가루(wheat meal)를 사용하였다. 실험사료는 어유을 100%로한 대조구 사료를 대상으로 어유 75%+계유 25%, 어유 50%+계유 50%, 어유 25%+계유 75%, 어유 25%+계유 100%, 어유 17%+계유 68.6%+DHA 14.4% 및 계유 82.8%+DHA17.2%로 총 7가지의 사료를 조단백 53.3%, 조지방 11.1% 및 총에너지는 16.2 kJ/g으로 제작하여 평가하였다. 8주 동안 사육한 넙치의 증체률(WG)과 일간성장률(SGR)에 있어서 어유를 계유로 50%로 대체한 실험구가 계유를 75% 및 100%로 보다 유의하게 낮은 값을 나타내었다(P<0.05). 사료효율(FE)에 있어서 106~115 이었으며, 단백질전환효율(PER)에 있어서 3.36~3.61로 전 실험구간에 유의한 차이가 없었다. 따라서 본 연구의 결과를 토대로 53.9% 이상의 어분을 사용할 경우 성장률에 있어서 동물성유인 계유를 양어사료의 어유 대체원으로 100%까지 사용이 가능할 것으로 사료되어지나, 근육 내 EPA와 DHA 함량이 계유를 수준별로 증가시킬수록 감소하는 부분을 감안한다면, 25%까지는 대체하여도 성장 및 근육내 지방산 조성에 큰 영향을 끼치지 않을 것으로 사료 된다. 5. 어유 대체에 따른 경제적 가치 평가 본 연구의 경제적 가치 평가에 있어서 어유를 우지 및 계유로 대체할 경우 성장률에 있어서는 두 종류 동물성유를 어분 함량이 53.9%일때 우지 및 계유로 100% 대체가 가능할 것으로 사료되어졌다. 넙치 EP 사료에서의 어유 대체 시 우지를 이용할 경우 약 6억원정도 및 계유를 이용시에 4억5천만원 정도의 가격을 절약할 수 있을 것이며, 양어사료 전체를 대상으로 할 경우 계유로 약 57억6천만원 및 우지로 100% 약 76억7천만원을 절약 할 수 있을 것으로 사료되어진다. 또한 이익 마진율에서는 계유를 100% 대체시 31.6% 및 우지를 100% 대체 시 42.1%로 절약할 수 있을 것이다. 하지만 어유 대체의 경우 근육내 지방산 조성 또한 중요한 부분으로 고려되어 단순히 성장률을 만을 가지고 어유 대체를 실시할 경우 어체 근육 내 지방산 조성에 있어서 EPA와 DHA 함량이 급격히 감소하여, 어유를 100% 대체 시 보다는 우지 및 계유를 25% 수준까지 대체할 경우에 어체 내 조직에 영향을 끼치지 않을 것으로 사료된다. 따라서, 성장률에 따른 어유를 우지 및 계유로 대체시 100% 대체가 가능하였으며, 넙치용 배합사료 기준 4억5천만원~6억원, 양어사료 전체를 대상으로 약 57억6천만원~ 76억7천만원을 절약할 수 있을 것이며, 이때 이익 마진율은 31.6~42.1%로 조사되었다. The present study were conducted to EPA and DHA requirements, and evaluation of dietary beef tallow or poultry oil as a fish oil replacer in olive flounder, Paralichthys olivaceus. In experiment I, the broken line analysis and second order polynomial analysis of weight gain indicated that the dietary DHA requirement of olive flounder are the than 1.26% but less than 1.68% in the diet for maximum growth. In experiment II, the broken line analysis and second order polynomial analysis of weight gain indicated that the dietary EPA requirement of olive flounder are the than 1.10% but less than 1.59% in the diet for maximum growth. In experiment III, based on the results of growth performance, beef tallow could replace fish oil up to 100% in the diet containing 53.9% of fish meal for juvenile olive flounder. In experiment IV, based on the results of growth performance, poultry oil could replace fish oil up to 100% in the diet containing 53.9% of fish meal for juvenile olive flounder. <EPA and DHA requirements in olive flounder diet> 1. Dietary DHA (docosahexaenoic acid) requirement levels in juvenile olive flounder The present study was conducted to evaluate dietary DHA requirement level of essential fatty acids (EFAs) in juvenile olive flounder cultured in a semi-recirculating system for 8 weeks. All the experimental diets were formulated to be isonitrogenous (50% crude protein, CP) and isocaloric (16.8 kJ/g energy diet). In the experiment, triplicate groups of 15 fish averaging 3.51±0.12 g (mean±S.D.) were fed one of the seven experimental diets for 8 weeks. Deffatted fish meal and casein were used as the main protein sources, while coconut oil was used as the lipid source. At the end of the feeding trial, the effects of DHA supplementation on weight gain (WG), specific growth rate (SGR), feed efficiency (FE), protein efficiency ratio (PER), survival rate (%) and hepatosomatic index (HSI) were evaluated. WG and SGR of fish fed DHA 1.25% and DHA 2.0% diets were significantly higher than those of fish fed control diet (P<0.05). FE and PER of fish fed control diet was significantly lower than those of fish fed DHA 1.25%, DHA 1.5% and 2.0% diets (P<0.05). Survival rate (%) fed DHA 1.0% diet was significantly lower than that of fish fed DHA 1.25% diet (P<0.05). Hepatosomatic index(HSI) of fish fed the experimental diets was not significant different. Broken line analysis of weight gain and second order polynomial analysis of weight gain indicated that the dietary DHA requirement of olive flounder could be are the than 1.26% but less than 1.68% in the diet for maximum growth. 2. Dietary EPA (eicosapentaenoic acid) requirement levels in juvenile olive flounder The present study was conducted to evaluate dietary EPA requirement level of essential fatty acids (EFAs) in juvenile olive flounder cultured in a semi-recirculating system for 8 weeks. All the experimental diets were formulated to be isonitrogenous (50% crude protein, CP) and isocaloric (16.8 kJ/g energy diet). In the experiment, triplicate groups of 15 fish averaging 3.50±0.10 g (mean±S.D.) were fed one of the seven experimental diets for 8 weeks. Deffatted fish meal and casein were used as the main protein sources, while coconut oil was used as the lipid source. At the end of the feeding trial, the effects of EPA supplementation on weight gain (WG), specific growth rate (SGR), feed efficiency (FE), protein efficiency ratio (PER), survival rate (%) and hepatosomatic index (HSI) were evaluated. WG and SGR of fish fed control diet was significantly lower than those of fish the other diets(P<0.05), and fish fed diets containing each EPA and DHA 0.5%, 0.75% and 1.0% were significantly lower than those of fish fed the other diets. FE and PER were shown the same trend as WG and SGR. There were no significant differences in survival rate (%) and hepatosomatic index (HSI) of fish fed the experimental diets. Broken line analysis of weight gain and second order polynomial analysis of weight gain indicated that the dietary EPA requirement of olive flounder could be are the than 1.10% but less than 1.59% in the diet for maximum growth. <Evaluation of beef tallow and poultry oil as a fish oil replacer in olive flounder diet> 1. Evaluation of beef tallow as a fish oil replacer in olive flounder diet The experiment was conducted to determine the optimum dietary inclusion level of beef tallow (BT) as a fish oil (FO) replacer in a diet for olive flounder, Paralichthys olivaceus. All the experimental diets were formulated to be isonitrogenous (53.3% crude protein, CP) and isocaloric (16.2 kJ/g energy diet). In the experiment, triplicate groups of 15 fish averaging 3.93±0.07 g (mean±S.D.) were fed one of the seven experimental diets for 8 weeks. Fish meal, corn gluten meal, soybean meal and shrimp meal were used as the main protein sources, while semi-crude salmon oil and beef tallow were used as the lipid source. At the end of the feeding trial, the effects of beef tallow supplementation on weight gain (WG), specific growth rate (SGR), feeding efficiency (FE), protein efficiency ratio (PER), survival rate (%), whole body proximate analysis, whole body fatty acids composition, liver fatty acids composition and serological characteristics were evaluated. WG and SGR of fish fed BT 75.9%+DHA 24.1% diet was significantly higher than those of fish fed control diets (P<0.05), then fish fed BT 75.9%+DHA 24.1% diet was not significantly different than those of fish fed BT 63%+DHA 20% diet. FE and PER of fish fed BT 75.9%+DHA 24.1% diet was significantly higher than those of fish fed control diet. There was no significant difference in survival rate (%) of fish fed the experimental diets. Based on the results of growth performance, we concluded that BT could replace FO up to 100% in the diet containing 53.9% of fish meal for juvenile olive flounder. 2. Evaluation of poultry oil as a fish oil replacer in olive flounder diet The experiment was conducted to determine the optimum dietary inclusion level of poultry oil (PO) as a fish oil (FO) replacer in a diet for olive flounder, Paralichthys olivaceus. All the experimental diets were formulated to be isonitrogenous (53.3% crude protein, CP) and isocaloric (16.2 kJ/g energy diet). In the experiment, triplicate groups of 15 fish averaging 3.93±0.07 g (mean±S.D.) were fed one of the seven experimental diets for 8 weeks. Fish meal, corn gluten meal, soybean meal and shrimp meal were used as the main protein sources, while semi-crude salmon oil and beef tallow were used as the lipid source. At the end of the feeding trial, the effects of beef tallow supplementation on weight gain (WG), specific growth rate (SGR), feeding efficiency (FE), protein efficiency ratio (PER), survival rate (%), whole body proximate analysis, whole body fatty acids composition, liver fatty acids composition and serological characteristics were evaluated. WG and SGR of fish fed PO 50% diet was significantly lower than those of fish fed PO 75% and PO 100% diets (P<0.05), then fish fed control diet was not significantly different than those of fish fed the other diets. There were no significant differences in FE and PER of fish fed the experimental diets. Survival rate (%) of fish fed the all diets were not significantly different. Based on the results of growth performance, we concluded that PO could replace FO up to 100% in the diet containing 53.9% of fish meal for juvenile olive flounder. <Value evaluation by replacing fish oil from other oil sources> From the results of the present studies, each beef tallow oil and poultry oil could replace fish oil up to 100% with use of fish meal containing 53.9% crude protein. In the consideration of economic value, feed companies could save 600 and 450 million won if fish oil in the flounder feeds were replaced by beef tallow oil and poultry oil, respectively, and also feed companies could save 5,760 and 7,670 million won if fish oil in the whole commercial feeds were replaced by beef tallow oil and poultry oil, respectively. In the aspect of the profit margin, feed companies could save 31.6 and 42.1% of production cost by replacing fish oil from beef tallow oil and poultry oil, respectively. However, fatty acid composition of fish fed diets containing beef tallow oil and poultry oil level up to 25% showed no significant difference with fish fed diets containing 100% of fish oil. Therefore, according to the results of growth performance, beef tallow oil and poultry oil could replace fish oil up to 100%, and feed companies could save 450 ~ 600 million won and 5,760 and 7,670 million won in the production cost of flounder feeds and whole commercial feeds, respectively. Also, feed companies could save 31.6 ~ 42.1% of profit margin with replacing fish oil from beef tallow oil and poultry oil, respectively.
김유진 세종대학교 관광대학원 2018 국내석사
본 연구에서는 아무것도 처리하지 않은 비 처리군, 이물질을 제거 후 다시마로 넙치를 감싼 ‘다시마 전처리군’, 이물질 제거한 다시마를 식초로 전 처리한 후 넙치를 감싼 ‘식초로 전 처리 한 다시마군’의 세 가지 보관방법을 달리한 넙치육의 전처리를 통해 시간의 경과와 환경에 따른 수분, pH와 총균수, 아미노산 측정 등의 방법을 통하여 감칠맛과 texture를 증가시키는 숙성과정에서 어떠한 성분변화와 작용을 하는지에 대한 수치화된 자료를 도출하고자 하였다. 저장시간에 따른 수분 함량을 분석한 결과 비 처리군 넙치의 수분 함량은 저장시간이 질어질수록 수분 함량은 증가하여 저장시간 8시간에 가장 높게 나타냈다. 다시마 전 처리군과 식초로 전 처리한 다시마군은 수분 함량이 8시간에 가장 낮게 나타냈다. 저장시간에 따른 pH를 분석한 결과 비 처리군 넙치의 pH는 저장 초기에 6가장 낮게 나타났으며 저장시간 8시간에 가장 높게 나타났다. 다시마 전 처리군과 식초로 전 처리한 다시마군은 시간이 지날수록 pH는 증가하였다. 본 연구에서 식초로 전 처리한 다시마군이 다시마 전 처리군과 비 처리군인 일반적인 넙치 보다 pH가 높게 나타난 것은 생선회를 일반적으로 저장하면 효소류의 작용과 미생물의 번식으로 암모니아와 염기성 물질에 의하여 pH가 상승한 것으로 판단된다. 저장시간에 따른 적정산도를 분석한 결과 비 처리군 넙치의 적정산도는 저장시간이 지날수록 적정산도는 증가하여 저장시간 8시간에 가장 높게 나타났다. 다시마 전 처리군과 식초로 전 처리한 다시마군의 적정산도는 일반적인 비 처리군 넙치와 같은 경향으로 저장시간이 지날수록 적정산도는 증가하였다. 이는 다시마의 첨가로 변질로 인한 산도의 증가율이 낮아진다 는 것을 알 수 있으며 다시마의 첨가가 생선회의 저장성에 효과가 있을 것으로 사료된다. 저장시간에 따른 glutamic acid를 분석한 결과 비 처리군 넙치는 저장 4시간까지는 증가하였으나 이후 저장시간이 지날수록 감소하기 시작하였다. 다시마 전 처리군과 식초로 전 처리한 다시마군은 같은 경향으로 비 처리군과는 다른 경향으로 나타나 저장시간이 지날수록 증가하였다. 분석 결과 다시마 전 처리군과 식초 전처리 넙치의 glutamic acid 함량이 비 처리군보다 저장시간이 높게 나타난 것은 다시마의 glutamic acid 성분이 넙치 근육에 흡수되어 증가한 것으로 보이고 시간이 지나면서 근육자체에서 생성되거나 또는 식초처리의 유기산으로 인하여 육성분이 분해된 결과로 보여 지며 이결과는 넙치 생선회 맛에 감칠맛을 증가시킬 것으로 판단되었다. 저장시간에 따른 texture를 분석한 결과 비 처리군 넙치의 경도는 저장시간 8시간에 경도는 가장 낮게 나타났으며 다시마 전 처리군과 식초로 전 처리한 다시마군의 경도는 일반적인 비 처리군 넙치와 같은 경향으로 나타냈다. 비 처리군 넙치의 응집성은 저장 8시간에 증가하였으며, 다시마 전 처리군과 식초로 전 처리 다시마군의 응집성은 저장 8시간에 가장 높게 나타냈다. 비 처리군 넙치의 탄력성은 저장시간이 지날수록 감소하여 저장시간 8시간에 가장 낮게 나타났으며 다시마 전처리군의 탄력성은 비 처리군 넙치의 탄력성과 같은 경향으로 저장 8시간에 가장 낮게 나타났으며 식초로 전 처리한 다시마군의 탄력성은 저장시간이 지날수록 감소하는 결과를 나타냈다. 비 처리군 넙치의 점성은 저장시간이 지날수록 감소하여 저장시간 8시간에 가장 낮게 나타났다. 다시마 전 처리군과 식초로 전 처리한 다시마군의 점성은 같은 경향으로 저장시간이 지날수록 감소하였다. 비 처리군 넙치의 씹힘성은 저장시간 8시간에는 가장 낮게 나타났으며 다시마 전 처리군과 식초로 전 처리한 다시마군의 씹힘성은 같은 경향으로 저장시간이 지날수록 감소하였다. 넙치 생선회를 냉장 저장 시 저장시간이 지날수록 응집성, 경도, 씹힘성, 탄력성이 감소한 현상은 생선의 어종에 따라 콜라겐 및 근섬유의 용적 등 성질과 함량의 차이에 따라 근소하게 차이가 있는 것으로 사료된다. 저장시간에 따른 총균수를 분석한 결과 일반적인 넙치인 비 처리군의 총균수는 저장 2시간까지는 2.0×102CFU/g 수준에서는 검출되지 않았으며 저장 8시간에는 가장 높게 나타나 저장시간이 길어질수록 총균수는 증가하는 것으로 나타났다. 다시마 전처리군은 같은 조건일 때 2시간까지는 검출되지 않았으며 저장 8시간에 가장 높게 나타났다. 식초로 전 처리한 다시마군은 같은 조건일 때 저장 6시간까지는 검출되지 않았으며 저장 8시간에는 3.4×102 CFU/g로 나타났다. 이와 같은 결과는 산염처리 한 다시마가 총균수 증식을 억제 할 수 있는 것으로 판단되며 다시마의 알긴산 성분으로 인해 다시마로 감싼 넙치가 비 처리군인 일반적인 넙치회 보다 저장시간이 길어질수록 총균수는 적게 나타난 것으로 사료된다. 저장시간에 따른 관능적 품질 특성을 분석한 결과 비 처리군 넙치의 비린 냄새, 감칠맛, 전체적인 기호도는 저장 4시간에 질감과 뒷맛은 저장 2시간에 가장 높게 나타냈다. 다시마 전처리군의 비린 냄새와 감칠맛, 전체적인 기호도는 저장 6시간에 질감과 뒷맛은 저장 4시간에 가장 높게 나타냈다. 일반적인 넙치 보다 다시마로 처리한 넙치의 저장성 및 기호도가 2시간 연장 된 것으로 나타났다. 따라서 이화학적 품질특성, 미생물 특성과 관능적 품질 특성을 종합해 보면 일반적인 넙치 보다는 다시마 전 처리군과 식초로 전 처리한 다시마군이 생선회의 품질을 알 수 있는 수분함량과 pH가 적게 나타났으며 생선 회의 감칠맛인 glutamic acid와 texture에서 높게 나타났다. 또한 다시마로 처리한 넙치가 일반적인 넙치 보다 저장성이 우수한 것으로 나타났으며 관능검사에서도 비 처리군 보다 높은 기호도를 나타내 우리나라에서 인기 있는 생선회인 넙치회를 먹을 때 일반적인 넙치 보다는 다시마로 처리 하는 방법이 위생적이면서도 감칠맛과 texture를 높일 수 있는 방법으로 판단된다. In this study glutamic acid and texture were measured by moisture, pH, total viable counts, and glutamic acid measurement according to storage time through pretreatment of flounder with control, non-acid kelp and acid kelp. And elucidate the quantitative data on what kind of composition change and action in aging process. The moisture contents of the flounder of control increased with the storage time, and the moisture contents was the highest at 8 hours storage time. The moisture contents was the lowest in pretreatment of non-acid kelp and pretreatment of acid kelp at 8 hours storage time. The pH of the flounder of control according to the storage time was the lowest at the beginning of storage and the highest at 8 hours storage time. Pretreatment of non-acid kelp and pretreatment of acid kelp increased with storage time. In this study, the pH of the pretreatment of acid kelp was higher than the flounder of control and the pretreatment of non-acid kelp. It was considered that the pH of the raw fish was increased by ammonia and basic substances due to the action of enzymes and the growth of microorganisms. The analysis of the titratable acidity with storage time, the titratable acidity of flounder of control increased with storage time and the highest at 8 hours storage time. The titratable acidity of pretreatment of non-acid kelp and acid kelp were similar to those of normal flounder of control. The titratable acidity increased with storage time. This suggested that the addition of kelp decreased the rate of increase of acidity due to alteration. The addition of kelp may be effective for the storage stability of sashimi. The result of glutamic acid with storage time, The flounder of control increased until 4 hours storage time, but began to decrease with storage time. The amount of glutamic acid of the flounder at acid kelp and pretreatment of flounder at acid kelp increased with storage time as same tendency, and showed a significant difference to the flounder of control. The results showed that the glutamic acid content of the Pretreatment of non-acid kelp and acid kelp was higher than the flounder of control. It indicated that the glutamic acid content of kelp was increased by absorption into the flounder muscle. Over time, it was produced either in the muscle itself or as a result of the degradation of the muscle component due to the organic acids in the vinegar treatment. The results showed that the glutamic acid was increased in the flounder sashimi. The analysis of texture with storage time, the hardness of flounder of control was lowest at 8 hours storage time. The hardness of the texture according to the storage time was the same as that of the pretreatment of the non-acid kelp and the pretreatment of the flounder at acid kelp. The cohesiveness of acid kelp was highest at 8 hours storage time. Pretreatment of flounder at non-acid kelp showed the same springiness as flounder of control and the highest at 8 hours storage time. The elasticity of the flounder of control decreased with storage time and was the lowest at 8 hours storage time. The elasticity of pretreated group showed the same tendency as that of the flounder of control. It was the lowest at 8 hours storage time. The elasticity of the pretreatment of acid kelp decreased with storage time. The viscosity of flounder of control decreased with storage time and was lowest at 8 hours storage time. The viscosities of pretreatment of non acid kelp and acid kelp decreased with storage time with same tendency. The chewiness of flounder of control was lowest at 8 hours storage time. The chewiness of non-acid kelp and pretreatment of flounder at acid kelp decreased with storage time. It was considered that the decreasing phenomena of cohesiveness, hardness, chewiness and elasticity with storage time of flounder in cold storage depended on fish species and the content of collagen and muscle fiber. As a result of analysis of the total viable count according to the storage time, the total viable count in the flounder of control was not detected at 2.0×102CFU/g until 2 hours of storage and was highest at 8 hours storage time. As the storage time increased, the total viable count increased. The pretreatment of non-acid kelp was not detected until 2 hours at the same condition and showed the highest at 8 hours storage time. The pretreatment of acid kelp was not detected until 6 hours after storage at the same conditions and was 3.4×102 CFU/g at 8 hours storage time. These results suggested that the pretreatment of acid kelp can inhibit the growth of total viable count. It was considered that the total viable count of the kelp wrapped flounder was lower than of control due to alginic acid of kelp as the storage time longer. Sensory evaluation according to storage time showed that fishy odor, glutamic acid and overall-acceptability of flounder of control shwed high preference in 4 hours storage time and texture and after-swallowing taste were high in 2 hours storage time. In the 6 hours storage time, the fishy odor, glutamic acid, and overall-acceptability And at the 4 hours storage time, the texture and after-swallowing taste showed a high preference in the pretreatment with kelp. The preference of pretreatment of flounder at kelp was 2 hours longer than that of flounder of control. Therefore the physicochemical quality characteristics, microbiological characteristics, and sensory quality characteristics are compared with those of pretreatment of flounder and of control. In the moisture and pH value which are quality of sashimi, the pretreatment of non-acid kelp and acid kelp were lower than the flounder of control. And in the glutamic acid and texture, they were higher respectively. Pretreatment of flounder at kelp was more hygienic than that of flounder of control. It was more preferable in sensory evaluation than flounder of control. It was judged that pretreatment with kelp was hygienic rather than the common flounder, and it was a method to increase the texture and glutamic acid of the flounder, most popular sashimi in Korea.
양식 넙치에 유행하는 Lymphocystis disease의 특성에 대한 연구
김애향 麗水大學校 産業大學院 2004 국내석사
본 연구는 우리 나라에서 양식중인 넙치에서의 Lymphocystis disease(LCD) 특성을 육안적 및 해부학적 관찰, 조직학적 및 전자현미경적 방법을 행하였으며, 또, 직접 제작한 Polyclonal 항혈청을 사용한 면역학적 방법으로 조사하였다. 넙치 표면에 Lymphocystis 종양을 가지는 어류와 Lymphocystis가 관찰되지 않았던 실험어 모두 해부하였을 때, 내장기관에서는 Lymphocystis가 관찰되지 않았다. 각 넙치의 장기를 HBSS로 균질화하여 그 상등액을 HINAE cell line에 접종하였을 때, 한 마리의 장기 기관 중 아가미와 장조직을 제외한 나머지 장기 기관에서 CPE를 관찰할 수 있었다. 또한 어체 표면에 lymphocystis 종양을 가지지 않던 넙치의 장기에서도 CPE가 확인되었다. isolated virus strain의 감염가는 10^(2.5)TCID_(50)/㎖로 나타났으며, 단 02116F-LCDV는 10^(2.75)TCID_(50)/㎖를 나타내었다. 또한 HINAE cells의 세포질에서 iridovirus로 추정되어지는 바이러스 입자가 관찰되었다. 정제된 바이러스 밴드는 40-57% 정도의 sucrose 연속 구배상에서 형성되었으며 10% SDS-PAGE 결과 20개 이상의 polypeptide를 확인할 수 있었는데 크기는 크게 14, 17, 24, 33, 46, 48, 50, 52, 170KDa이었다. -80℃에 보관하여 두었던 Lymphocystis를 균질화하여 초원심으로 바이러스를 정제한 후, 인위적으로 토끼에 접종하여 제작한 anti LCDV rabbit serum을 이용하여 면역학적 방법으로 특이 LCDV 항원 검출 실험을 행했다. ELISA법에 의한 넙치 장기 조직 내 LCDV 항원의 검출은 용이하였으나 HINAE cell line으로 배양한 바이러스를 대상으로 행한 LCDV 항원은 검출되지 않았다. LCDV 항원 검출률은 종양과 신장에서 100%를 나타냈으며, 비장과 간에서는 75%, 장에서는 50%를 보였고 lymphocytis가 형성되지 않았던 근육에서는 0%를 나타냈다. 반면, LCDV strain을 계대 배양한 HINAE cell line에서는 거의 LCDV 항원이 검출되지 않았다. FAT법에 의한 넙치 장기 조직과 HINAE cells내의 LCDV 항원의 검출은 용이하지 않았다. 실험어의 표면에 Lymphocystis가 관찰되었던 피부, 지느러미, 구강을 제외한 나머지 기관에서 Lymphocystis cell(Lc)는 관찰되지 않았다. 02320 넙치에서는 021015 넙치보다 초기발육 과정의 Lc가 많이 관찰되었다. 10월 넙치에서는 Lc의 성장이 중단되어 있었으며, 02320 넙치의 Lc는 평균 130.3×113.5㎛, 021015 넙치의 Lc는 403.3×370㎛, sea bass는 307.2×286.7㎛의 크기였다. 또한 hayline capsule은 넙치는 약 10-12㎛, sea bass는 약 5㎛의 차이를 보였다. 이 연구는 더 나아가 국내에서 양식되어지는 넙치 뿐 아니라 여러 어종들에 나타나는 Lymphocystis disease의 특성 비교 연구가 행해져야 할 것이다. This study investigated charateristics of Lymphocystis disease in cultured flounder, Paralichthy olivaceus that try, such as gross external observation, dissection and anatimical observation, histopathological examination and eletron microcopy and immunological examination. in vitro All fishes, formed nodules of tumour-like or not formed, was not obsenated lymphocystis in the internal organ by anatomical. Flounder lymphocystis virus isolates(F-LCDV strain) was obtained from HBSS 10% internal organ homogenate from flounders. After filtered by 0.45㎛ membrane filter, suspension were inoculated with 0.05㎖ in HINAE cell line into 24 well and incubated at 15℃ for 7 days. All the LCDV isolated were represented Cytopathic effect(CPE) in HINAE cell line, excepting gill and intestine in out of internal organ of one fish. Also, It was monifested CPE observation in HINAE cell line, not formed nodules to fish. Infectivity of culture grown LCDV isolates using the HINAE cells reached 10^(2.5)TCID_(50)/㎖. Only 02116F-LCDV reached 10^(2.57)TCID_(50)/㎖. The virus/viruses observated in the cytoplasm of infected HINAE cells. Purified virus bands obtained on a sucrose gradient. Lymphocystis disease virus structural protein was each 14,17,24,33,46,48,50,52,170KDa. -80℃ stock lymphocytis was homogenated and centrifuged, after was inoculated in rabbit. Then made anti LCDV rabbit serum. It was without difficulty detection of LCDV antigen from tissue of flounders. But subcultured LCDV antigen from HINAE cell line was not easy, by ELISA. Dectection rate(%) of LCDV antigen was showing that lymphocystis and kidney was 100%, spleen and liver was 75%,intestine was 50% and muscle was 0%(not formed nodule on the body). The other hand, dectection of antigen of internal organ and subcultured LCDV in HINAE cells by FAT. All flounder of internal organ was not observated lymphocystis cell by histopathological method. March sampling flounder many observated immature lymphocystis cell than october sampling flounder. October sampling flounder of lymphocystis cell was showing discontinuance. March sampling flounders of lymphocystis cell was average 130.3×113.5㎛, and october sampling flounder of lymphocystis cell was each other approximately 10-12㎛(flounder) and 5㎛(sea bass).