'자궁적출술' 환자의 자궁내막증 유병율

김미연 경북대학교 대학원 2008 국내석사

목적 : 전자궁 적출술을 시행 받은 환자를 대상으로 수술방식, 나이, 분만력, 비만도 및 병리학적 진단과 자궁내막증의 유병율과의 관련성을 알아 보고자 한다. 방법: 이 논문은 1999년부터 2006년까지 경북대학교 병원 산부인과에서 복식 전자궁 적출술, 질식 전자궁 적출술, 복강경식 전자궁 적출술을 시행 받은 환자를 대상으로 하여 임상 기록 및 병리 보고서를 바탕으로 하여 후향적으로 검토하였다. 이를 근거로 하여 나이(35세 미만, 35세-45세, 45세 초과), 분만력(무분만력, 초산, 다산), 비만도(18.5미만, 18.5-24.9, 25초과) 및 진단과 자궁 내막증의 유병율과의 관련성을 조사하였다. 진단 분류는 병리학적 진단을 바탕으로 하였다. 자궁내막증의 해부학적 부위와 수술 방법과의 관련성도 조사하였다. 통계는 SPSS version 12.0의 교차분석을 이용하였다. 결과 : 최근 7년간 본원에서 시행한 전자궁 적출술은 총 4,830례였다. 이 중 자궁내막증은 125례(2.5%)에서 동반되었고, 수술별로 보면, 복식 자궁 적출술 2,260례 중 76례(3.3%), 질식 자궁 적출술 1,589례 중 31례(1.95%), 복강경식 자궁 적출술 981례 중 18례(1.83%)에서 동반되었다. 복식 자궁 적출술이나 질식 자궁 적출술보다는, 복강경식 자궁 적출술과 자궁내막증 유병율의 관련성이 통계적으로 유의하게 높았다(p <0.05). 자궁 내막증을 해부학적 부위별로 살펴보면, 총 125례 중 난소 109례(87.2%), 자궁 천골 인대 7례(5.6 %), 복막 4례(3.2%), 더글라스와 3례( 2.4%), 난소 오목(ovarian fossa)에서 3례(2.4%), 복벽, 직장벽, 질벽, 소장유착부위에서 각각 1례(0.8%)로 발견되었다. 나이, 분만력, 비만도, 병리학적 진단과 자궁내막증의 유병율은 통계적 유의성이 없었다(p >0.05). 결론: 복강경 기술의 발달로 인해, 복강경식 자궁 적출술에서 자궁내막증의 유병율이 더 높았다. 대상군 중 자궁내막증의 유병율은 2.5%로 낮았으나, 자궁내막증이 의심되는 부위를 주의깊게 살펴보고 수술 했다. 왜냐하면 자궁내막증은 적절한 제거가 시행되지 않으면, 만성 골반통이 지속되고 재발율이 높기 때문이다. 복강경식 자궁 적출술의 확대 시야에서는, 다른 자궁 적출술 방식보다 더욱 선명히 자궁 내막증 의심 병변을 확인할 수 있다고 생각된다.

Evaluation of osteopontin expression in the eutopic endometrium and plasma osteopontin levels in patients with endometriosis

안영선 Graduate School, Yonsei University 2008 국내석사

Objectives: The aim of this study was to evaluate mRNA expression of osteopontin (OPN) in eutopic endometrium and plasma osteopontin levels in patients with endometriosis.Materials and Methods: 64 patients with histologically confirmed endometriosis and 40 patients without endometriosis participated in this study. Endometrial biopsies were performed during exploration laparotomy or operative laparoscopy and blood samples were collected by peripheral venous puncture before anesthesia. Real time quantitative RT-PCR was performed to quantify OPN mRNA expression of endometrial tissues, and plasma concentrations of OPN were measured using specific commercial sandwich enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA).Results: The mean OPN mRNA expression (mean±S.E.) was significantly higher in endometrial tissues of women with endometriosis than in endometrial tissues of controls (783.95±256.45 vs. 83.37±34.47, P=0.029). The mean ± S.E. levels of plasma OPN in patients with endometriosis and the controls were 407.31±37.80 ng/ml and 160.07±18.94 ng/ml, respectively (P < 0.001). Plasma OPNhave strong positive correlation between serum CA-125 levels (r=0.375, p=0.001), but no correlations between plasma OPN and the severity of the disease was noted. ROC analysis for plasma OPN revealed an AUC of 0.846, sensitivity of 93.6% and specificity of 65.7% at a cut-off value of 167.68 ng/ml.Conclusions: Expressions of OPN in eutopic endometrium and plasma OPN levels are increased in the patients with endometriosis. OPN may be involved in the pathogenesis of endometriosis and further evaluation of plasma OPN as a potential biomarker for the diagnosis of endometriosis is warranted. 목적: 본 연구는 자궁내막증 환자의 자궁 내막조직과 정상 대조군의 자궁내막 조직에서 세포간 부착에 관여하는 당 단백질의 하나인 osteopontin(OPN) mRNA의 발현을 알아보고, 혈중 Osteopontin level을 분석하여, 두 군간의 발현의 차이가 있는지 알아보고자 시행되었다재료 및 방법: 개복 또는 복강경 수술을 통하여 조직학적으로 확진된 64명의 자궁내막증 환자와 자궁내막증이 없는 것으로 확인된 40명이 실험에 참가하였다. 개복 또는 복강경 수술 시 자궁내막 조직이 생검 되었고, 마취 후 정맥혈 채취를 통해 plasma를 검사하였다. 자궁내막조직의 OPN mRNA의 발현은 실시간 역전사 중합효소연쇄반응 (Real time quantitative RT-PCR)을 이용하여 비교하였고, plasma의 OPN의 농도는 specific commercial sandwich ELISA (enzyme-linked immunosorbent assays, Immuno-Biological Laboratories [IBL], Gunma, Japan) kit를 사용하였다.결과: 자궁내막증 환자에서 자궁내막조직의 OPN mRNA의 발현은 정상 대조군보다 높게 나타났다 (783.95±256.45 vs. 83.37±34.47, P=0.029). 또한 자궁내막증 환자의 평균 plasma OPN은 407.31±37.80ng/ml으로 정상 대조군의 160.07±18.94ng/ml보다 통계학적으로 의의있게 높게 나타났다(P < 0.001). Plasma OPN은 혈중CA-125와 상관관계를 보였으나 (r=0.375, p=0.001), plasma OPN 이나 자궁내막증의 중증도와는 상관 관계를 보이지 않았다. Plasma OPN과 자궁내막증의 예측정도는 ROC analysis상 AUC 0.846으로, cut off value를167.68 ng/ml으로 하였을 때 sensitivity 93.6%, specificity 65.7%를 보여주었다.결론: 본 연구 결과에 의하면 자궁내막증 환자에서 자궁내막의 OPN mRNA 표현과plasma의 OPN level은 증가되어 있었다. 따라서 OPN이 자궁내막증의 발생에 있어 조직에의 부착이나 침윤에 역할을 할 것으로 생각되고, 또한 증가된 plasma OPN은 자궁 내막증의 biomarker로서의 가능성도 보여준 것으로 생각된다.

자궁 내막증의 병리조직학적 관찰

강대웅 고려대학교 대학원 의학과 1984 국내석사

Glucocorticoids에 의한 간세포 투명팽대의 본질 : 조직화학적 및전자현미경적 연구

강창의 연세대학교 1971 국내박사

Analysis of telomerase activity and human telomerase reverse transcriptase(hTERT) mRNA expression of the endometrium in patients with endometriosis

김청미 Graduate School, Yonsei University 2006 국내석사

목적 : 자궁내막증은 가임기 여성의 7-15%에서 발생하는 비교적 흔한 양성질환으로 종양화 과정과 유사한 특징을 가지고 있다. 주요 병리기전으로 생리혈의 역류현상과 유전적 또는 환경적 요인등이 중요하게 인식되었으나, 아직까지 자궁내막증의 착상 및 증식등에 관련해 정확히 밝혀진 바가 없다. 최근 연구에서 일부 유전자 또는 유전자 산물들이 자궁내막증 환자의 자궁내막 조직에서 발현이 증가되어있음이 보고되고 있다. human telomerase reverse transcriptase (hTERT) mRNA는 telomerase의 핵심 구성요소로서, telomerase와 함께 다양한 악성 조직에서 발현이 증가되어 있으며, 증식능 (replicative potential)과도 관련있는 것으로 알려져있다. 따라서, 본 연구에서는 정량적 hTERT mRNA와 telomerase 활성도를 이용해 자궁내막증이 있는환자에서 자궁내막 조직의 증식능을 살펴보고자 한다.대상 및 방법 : 본 연구는 수술중 자궁내막 조직검사를 이용해 채취한 자궁내막증 환자들의 자궁내막 조직과 자궁내막증이 없으며, 다른 자궁내막내의 병변이 없는 환자들의 정상 자궁내막 조직 각각 30개씩을 이용하였다. 각각의 군은 다시 생리주기와 자궁내막증 병기에 따라 분류하였다. hTERT mRNA의 발현은 Taq-Man fluorescence methodology에 근거한 real-time RT-PCR을 이용해 측정하였다. Telomerase activity 측정은 telomerase repeat amplification protocol (TRAP) assay를 이용하였다.결과 : hTERT mRNA의 발현양상을 살펴보면, 정상군에서는 80% (24/30)의 발현율을 보였으며, 자궁내막증군에서는 90% (27/30)가 발현되었다. 그 발현값은 정상군에 비해 자궁내막증군에서 통계적으로 유의하게 높았다 (p=0.004). Telomerase activity는 두 군 모두에서 90% (27/30)에서 관찰할 수 있었으며, 그 절대값은 정상군에 비해 자궁내막증군이 높았으나, 유의한 차이는 없었다. 그러나, 정상군과 자궁내막증 병기 III-IV 군만을 비교해 보았을때는 통계적으로 유의한 차이를 확인할 수 있었다 (p=0.048). 생리주기별로 증식기와 분비기로 각각 나누어 두 군의 hTERT mRNA 발현을 살펴보았을때, 자궁내막증 분비기의 값이 정상군의 분비기의 값에 비해 유의하게 증가되어 있었으며 (p=0.036), 증식기에서는 두 군간에 차이가 없었다. telomerase 발현도 역시 hTERT mRNA와 유사한 양상으로 나타났으나, 각 군간에 통계적으로 유의한 차이는 없었다. hTERT mRNA와 telomerase activity 모두 자궁내막증군에서 병기가 증가할 수록 그 값이 증가하는 양상을 관찰할 수 있었다 (p=0.038, p=0.016).결론 : 본 연구는 자궁내막증 환자의 자궁내막 조직에서 hTERT mRNA 및 telomerase activity가 정상군에 비하여 발현도가 증가되어있음을 보여주었다. 이는 자궁내막증의 자궁내막 조직이 정상조직과는 다른 증가된 증식능이 있음을 의미하는 것이고, 이것이 자궁내막증 병리기전에 관여할 것이라 사료된다. Introduction: Endometriosis is considered a frequent, benign disease with the ability to undergo neoplastic processes. Although retrograde menstruation theory, multiple genetic and environmental factors seem to be important, the critical factors that affect the implantation and propagation of endometriotic lesions are still largely unclear. Recent studies demonstrated that some genes or gene products were aberrantly expressed in the endometrium of endometriosis. Human telomerase reverse transcriptase (hTERT) mRNA is core functional components of telomerase activity. They have been detected in various cancers and are related with the proliferative potential. The aim of this study is to evaluate the limitless replication potential of eutopic endometrium in patients with endometriosis by examining quantitative human telomerase reverse transcriptase (hTERT) mRNA expression and telomerase activity.Materials and Methods: Endometrial tissues from 30 endometriosis patients (endometriosis group) and 30 patients without endometriosis (control group) were obtained via endometrial biopsy. Each group was subdivided and analyzed according to the menstrual phase and clinical disease stages.The expression of hTERT mRNA was determined by real-time RT-PCR assay based on Taq-Man fluorescence methodology. Telomerase activity was measured by telomerase repeat amplification protocol (TRAP) assay. The variables were analyzed by Student`s t-test, Kruskall-Wallis test and Pearson`s correlation coefficient.Results: The expressions of hTERT mRNA were detected in 24 of 30 (80%) normal group and in 27 of 30 (90%) endometriosis group. The normalized hTERT mRNA level was significantly higher in the endometriosis group than the control group (p=0.004). The hTERT mRNA level during the secretory phase in the endometriosis group was significantly higher than that of control group (p=0.036), although the difference was not significant during the proliferative phase. Telomerase activities were noted 90% in both group. We found a prominent difference of telomerase activity between moderate-to- severe endometriosis group and the control group (p=0.048). The level of hTERT mRNA and telomerase activity increased as the disease became more severe (p=0.038, p=0.016).Conclusion: This study showed the overexpression of hTERT mRNA and telomerase activity in the endometrium of endometriosis patients. This findings suggest that endometrial replication potential may have an important role in the pathogenesis of endometriosis.

한국인에서 자궁내막증 발생과 Progesterone Receptor Gene Polymorphism(PROGINS) 및 Estrogen Receptor Gene Polymorphism과의 관계

고희은 仁濟大學校 大學院 2004 국내박사

목 적: 자궁내막증은 자궁내막 조직이 자궁 외에 존재하는 것을 특징으로 하는 질환으로서 만성적인 골반통, 생리통, 성교통을 유발하며 불임의 원인이 될 수 있는 진행성 질환이다. 오랜 기간의 연구에도 불구하고 자궁내막증의 병인에 대하여 확실하게 밝혀진 것이 없지만 자궁내막증이 에스트로겐에 의존적인 질환이며 프로게스테론의 투여로 인하여 증상의 치료가 가능하다는 사실에 대해서는 이견이 많지 않다. 일부 유전적 연구 결과들을 살펴보면 자궁내막증과 에스트로겐 및 프로게스테론 수용체 유전자의 특정 다형성 부위와 연관성이 있음을 알 수 있다. 본 연구는 한국인 여성을 대상으로 하여 프로게스테론 수용체 유전자의 다형성(PROGINS) 양상과 에스트로겐 수용체 유전자의 PvuⅡ 및 XbaⅠ다형성 양상을 분석하여 자궁내막증 환자와 대조군에 차이가 있는지를 알아보고자 고안되었다. 방 법: 수술 및 병리조직 소견을 통하여 자궁내막증을 확진 받은 100명의 환자와 건강검진을 시행 받은 일반 인구군 110명을 대상으로 하였다. 대상 환자들의 말초혈액에서 DNA를 추출한 후 프로게스테론 수용체의 유전자 다형성 검사를 PCR-SSP (Sequence specific primer)방법으로 시행하였고, 에스트로겐 수용체-alpha유전자의 다형성을 PvuⅡ 및 XbaⅠ 두 가지 제한효소를 이용한 PCR-RFLP(Restriction fragment length polymorphism) 방법을 이용하여 검사한 후 자궁내막증 환자군과 건강대조군에 있어서 특정 유전자 다형성의 빈도에 차이가 있는지 x^(2)검정을 통하여 통계 분석하였다. 결 과: PROGINS 다형성 양상에서는 자궁내막증군과 대조군에서 각각 1명에서만 T1/T2 이형접합자로 확인이 되었고 나머지 개체에서는 모두 T1/T1 동형접합자임이 확인되었다. 에스트로겐 수용체 유전자 PvuⅡ 다형성 분석에서는 자궁내막증군에서 (pp) 유전자형을 가진 개체는 32명 (32%)로 대조군의 50명 (45.5%)에 비해 유의하게 낮은 수치를 보였다 (P<0.05). (Pp)와 (PP) 유전자형의 빈도는 두 군간에 유의한 차이가 없었다. (p) 유전자의 빈도는 자궁내막증군에서 109 (54.5%), 대조군에서 142 (64.5%)이었고 (P) 유전자의 빈도는 자궁내막증군에서 91 (45.5%), 대조군에서 78 (35.5%)로 두 군 간에 유의한 차이를 확인할 수 있었다 (P<0.05). 에스트로겐 수용체 유전자 XbaⅠ 다형성 분석에서는 자궁내막증군과 대조군에 있어서 (xx), (Xx), (XX) 유전자형의 빈도에 있어서 유의한 차이가 없었으며 (x) 유전자와 (X)유전자의 빈도에 있어서도 모두 통계적으로 유의한 차이가 없었다. 결 론: 이러한 본 연구의 결과는 한국인 자궁내막증 환자에 있어서 에스트로겐 수용체 유전자의 PvuⅡ다형성이 중요한 병인으로 작용할 수 있음을 시사하며 이러한 자료는 자궁내막증의 병인을 규명하는데 유용한 정보를 줄 것으로 생각된다. Objectives: Endometriosis is defined as the presence of endometrial tissue outside the uterus, causing diverse progressive diseases such as infertility, pelvic pain, and dysmenorrhea. Although the mechanisms responsible for its pathogenesis and progression remain poorly understood, it is well established that endometriosis grows and regresses in an estrogen-dependent fashion and that administration of progestin can relieve the symptoms caused by endometriosis. Some genetic studies have demonstrated the association between the estrogen or progesterone receptor gene polymorphism and the susceptibility to endometriosis. This study was designed to investigate the associations of the polymorphism of the progesterone receptor gene (PROGINS), PvuⅡ and XbaⅠ polymorphism of estrogen alpha receptor gene with endometriosis in the Korean population. Materials and Methods: A total of 100 women with surgically diagnosed and histologically confirmed endometriosis of stage Ⅲ-Ⅳ were enrolled as a patient population and a total of 110 female control subjects undergoing health examination were enrolled as control population. Following isolation of genomic DNA from peripheral blood, polymerase chain reaction-sequence specific primer assays were performed for analyzing progesterone receptor gene polymorphism (PROGINS) and polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism assays were performed for analyzing estrogen alpha receptor gene PvuⅡ and XbaⅠ polymorphism. The x^(2)-test was used to compare genotype distributions between endometriosis and controls. Results: Only one patient in each group was found to be T1/T2 heterozygote, and the rest of the subjects were all T1/T1 homozygotes. Analysis of Pvu Ⅱ has shown that the significantly lower number of patients had (pp) genotypes and (p) alleles in the endometriosis group compared with the control group (32 (32%) vs. 50 (45.5%), P<0.05; 109 (54.5%) vs. 14a (64.5%), P<0.05, respectively). There was no difference in the genotype distribution or allele frequency in fool polymorphism between the endometriosis group and the control group. Conclusions: These results suggest that the PvuⅡ polymorphism of the estrogen receptor-alpha gene is associated with the risk for endometriosis in the Korean population.

자궁내막증에서 프로게스테론 수용체 발현의 양상

민진영 울산대학교 대학원 2014 국내석사

국문요약 연구배경 및 목적: 자궁내막증은 자궁내막조직이 자궁이외의 조직에서 증식하는 질환으로 만성골반통과 불임의 주요원인이 된다. 많은 연구에도 불구하고, 아직까지도 정확한 병인 기전에 대하여 밝혀진 것이 많지 않은 가운데, 최근에는 자궁내막증의 병인과 병태생리에 프로게스테론에 대한 저항성이 중요한 역할을 할 것이라는 가설이 설득력 있게 제시되고 있다. 본 연구에서는 1) 자궁내막증 환자의 자궁내막과 자궁내막종 조직에서 실제로 프로게스테론 수용체 (progesterone receptor, PR)가 감소된 발현을 보이는지를 확인하고, 2) 자궁내막증에서 확인되는 프로게스테론 저항성이 자궁내막증 환자의 복강내 환경에 기인한 것인지를 알아보며, 3) 최종적으로 이미 자궁내막증 환자의 복강내에서 증가되어 있는 것으로 확인된 주요 시토카인(cytokine)의 투여가 자궁내막 세포의 PR발현에 어떠한 영향을 주는지를 살펴보고자 하였다. 연구대상 및 방법: 면역조직화학염색을 위해서는 자궁경부 상피내암으로 자궁적출술을 시행받은 환자의 자궁내막을 대조군으로 하였고 중증 자궁내막증으로 자궁적출술을 시행받은 환자의 자궁내막을 연구군으로 하였다. 세포배양에 이용할 조직은 자궁근종으로 자궁적출술을 받은 사람의 자궁내막조직을 이용하였다. 복강액은 복강경 수술을 통해 중증 자궁내막증으로 확진받은 환자의 복강액을 채취하여 처리하였다. 자궁내막 및 자궁내막종의 PR의 발현은 면역조직화학 염색 방법으로 분석한 후, 반정량적인 점수화를 통해 비교, 분석하였다. 자궁내막 세포 배양 후 자궁내막증 환자로부터 채취한 복강액과 종양괴사인자(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α), 인터루킨(interleukin-1beta, IL-1β)를 처리한 후 실시간 중합효소 연쇄반응(Real-time PCR)을 통하여 PR-A와 B 의 발현을 측정한 후 A/B 비율을 환산하여 대조 세포군과 비교하였다. 연구결과: 대조군 자궁내막의 선 세포와 기질세포에서 증식기와 분비기에 따른 PR-B 발현 양상을 면역조직염색으로 비교, 분석한 결과 선 세포와 기질세포 모두에서 분비기에 PR-B 발현이 유의하게 낮았다. 대조군과 자궁내막증 환자군의 PR-B 발현 양상을 면역조직염색으로 비교, 분석한 결과, 자궁내막증 환자군의 자궁내막과 자궁내막종에서 PR-B 발현이 유의하게 낮았다. 자궁내막 세포배양 모델에서 자궁내막증 환자의 복강액을 투여하고 1시간과 6시간 후 각각 PR-B/PR-A 비를 확인한 결과 선 세포(Ishikawa)에서는 1시간, 6시간 모두에서 PR-B/PR-A 비가 유의하게 낮았고 기질세포(ESC)에서는 1시간째에서 PR-B/PR-A 비가 유의하게 낮았다 자궁내막 세포배양 모델에서 TNF-α와 IL-1β를 이용하여 실시간 중합효소 연쇄반응 후 1시간, 6시간 째 PR-B/PR-A 비를 구하였다. 선 세포에서 TNF-α처리 후 1시간째에 10ng/ml, 25ng/ml 두 농도에서 모두 PR-B/PR-A 값이 유의하게 낮아짐이 확인되었고 기질세포에서는 1시간째에 TNF-α 25ng/ml농도에서 PR-B/PR-A 값이 유의하게 낮았다. 결론: 자궁내막증 환자의 자궁내막과 자궁내막종 조직에서 PR-B의 발현이 감소되어 있다. 또한 자궁내막 세포배양 모델에서 자궁내막증 환자의 복강액 또는 TNF-α를 처리했을 때 PR-B/A 비가 유의하게 감소하였다. 이러한 본 연구의 소견은 자궁내막증 환자의 자궁내막과 자궁내막증 조직에서 PR이 실제로 감소되어 있고 PR의 감소는 자궁내막증 환자의 복강내 염증성 환경에 의해, 특히 증가된 TNF-α의 영향에 의한 결과임을 강력히 시사한다.

한국 자궁내막증 여성에서 인터루킨(IL)-1, IL-2, IL-8, IL-18계 유전자다형성 양상

전성욱 서울대학교 대학원 2012 국내박사

Introduction: Endometriosis is a common gynecologic disease, but its etiology has not been clearly defined. It is well known that susceptibility to endometriosis depends on complex interactions between genetic, immunologic, hormonal and environmental factors. The interleukin (IL) system is believed to play an important role in the pathophysiology of endometriosis. The purpose of this study was to identify the genes related with endometriosis by investigating the associations between endometriosis and the polymorphisms of the IL-1, IL-2, IL-8 and IL-18 system genes, and serum levels of IL system in Korean women. Methods: Twenty-four single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the IL system genes were analyzed by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, TaqMan assay, or direct DNA sequencing in Korean women with endometriosis (n=138) and in normal control women (n=214): -889C>T SNP in IL-1α gene, 86bp variable number tandem repeat in IL-1 receptor antagonist (IL-1RA) gene, 52C>A, 294C>T, 1498T>C and 1632A>G SNPs in IL-1 receptor 1 (IL-1R1) gene, 1989T>C and 1626T>C SNPs in IL-1R2 gene, c.113T>G SNP in IL-2 gene, c.248C>T, c.750C>T and c.1173C>A SNPs in IL-2Rβ gene, -845T>C, -738T>A, -353A>T, 2670A>T and 2767A>G SNPs in IL-8 gene, c.1003C>T and c.2607G>C SNPs in IL-8R1 gene, c.785C>T SNP in IL-8R2 gene, -607C>A, -137G>C and 105A>C SNPs in IL-18 gene and -68G>A SNP in IL-18R1 gene. Serum levels of IL-1α, solube IL-1RA (sIL-1RA), sIL-1R2, IL-2, IL-8, IL-18 and sIL-18R1 were measured by enzyme-linked immmunosorbent assay (ELISA). Results: The 52C>A SNP in IL-1R1 gene, c.248C>T SNP in IL-2Rβ gene, -845T>C and -738T>A SNPs in IL-8 gene and c.1003C>T SNP in IL-8R1 gene were not observed in study participants. IL-1R1 1498T>C SNP and IL-18R1 -68G>A SNP were found to be related with early-stage endometriosis but not with advanced-stage endometriosis among the polymorphisms measured. The frequencies of T allele of the IL-1R1 1498T>C polymorphism and A allele of the IL-18R1 –68G>A polymorphism were significantly lower in early-stage endometriosis than in control. The distributions of the haplotype genotype defined by combination of IL-1R1 294C>T and 1498T>C SNPs were different between women with early-stage endometriosis and normal controls. The TAG haplotype allele composed of IL-8 -353A>T, 2670A>T and 2767A>G SNPs were related with early- and advanced-stage endometriosis, and the CGA haplotype allele and the gentotypes carrying at least one CGA haplotype allele defined by combination of IL-18 -607C>A, -137G>C and 105A>C SNPs were less frequently observed in early stage endometriosis. Serum IL-1α and IL-2 were not detectable in study participants in whom they were measured. Serum sIL-1R2 and IL-18 levels were found to be significantly lower in women with early-stage endometriosis compared with in normal controls after adjusting for age and body mass index, whereas serum sIL-1RA, IL-8 and sIL-18R1 levels in women with endometriosis were not different from those in normal controls. No differences were noted in serum sIL-1RA, sIL-1R2, IL-8, IL-18 and sIL-18R1 levels between women with early-stage and advanced-stage endometriosis. Neither single genotypes nor combined haplotype genotypes of the SNPs of IL-1, IL-8 and IL-18 family affected serum levels of each IL system in normal controls. Conclusions: These data indicate that IL-1R1 1498T>C SNP, IL-18R1 -68G>A SNP, the haplotype genotypes of IL-1R1 294C>T and 1498T>C SNPs, the haplotype allele of IL-8 -353A>T, 2670A>T and 2767A>G SNPs and the haplotype allele of IL-18 -607C>A, -137G>C and 105A>C SNPs are the genetic factors related with endometriosis in Korean women. The measurement of these polymorphisms may be useful in identifying Korean women at risk of endometriosis. 서론: 자궁내막증은 흔한 부인과적 질환이지만 아직까진 그 원인에 대하여 정확히 알려져 있지 않다. 자궁내막증의 발생에 있어서 유전적, 면역학적, 호르몬 및 환경 인자의 복합작용이 관여하는 것으로 알려져 있다. 인터루킨계는 자궁내막증 병인에 있어 중요한 역할을 수행하는 것으로 생각되어 지고 있다. 본 연구자는 한국여성에서 자궁내막증과 인터루킨-1(interleukin-1, IL-1), IL-2, IL-8, IL-18계 유전자다형성 및 IL계 혈청 농도 사이의 상호 연관성을 분석하여 자궁내막증과 연관된 유전자를 규명하고자 하였다. 방법: 자궁내막증 한국여성 138명과 정상여성 214명에서 IL-1α 유전자내 –889C>T 단일뉴클레오티드유전자다형성(single nucleotide polymorphism, SNP), IL-1 수용체 길항제(IL-1 receptor antagonist, IL-1RA) 86 bp variable number tandem repeat(VNTR), IL-1 1형 수용체(IL-1 type I receptor, IL-1R1) 유전자내 52C>A, 294C>T, 1498T>C, 1632A>G SNP, IL-1R2 유전자내 1989T>C, 1626T>C SNP, IL-2 유전자내 c.113T>G SNP, IL-2Rβ 유전자내 c.248C>T, c.750C>T, c.1173C>A SNP, IL-8 유전자내 -845T>C, -738T>A, -353A>T, 2670A>T, 2767A>G SNP, IL-8R1 유전자내 c.1003C>T, c.2607G>C SNP, IL-8R2 유전자내 c.785C>T SNP, IL-18 유전자내 -607C>A, -137G>C, 105A>C SNP, IL-18R1 유전자내 -68G>A SNP 등 24가지 SNP를 중합효소반응-제한절편길이다형성, TaqMan 측정법과 염기서열분석법을 이용하여 분석하였다. 혈청 내 IL-1α, 수용성 IL-1RA(sIL-1RA), sIL-1R2, IL-2, IL-8, IL-18 및 sIL-18R1 농도를 효소면역분석법으로 측정하였다. 결과: 모든 연구대상자에서 IL-1R1 52C>A SNP, IL-2Rβ c.248C>T SNP, IL-8 -845T>C, -738T>A SNP, IL-8R1 c.1003C>T SNP는 관찰되지 않았다. 측정된 SNP 중 IL-1R1 1498T>C SNP와 IL-18R1 –68G>A SNP가 초기 자궁내막증과 연관성이 관찰되었는데, 초기 자궁내막증 환자에서 IL-1R1 1498T>C SNP의 T 대립인자의 빈도와 IL-18R1 –68G>A SNP의 A 대립인자의 빈도가 정상대조군에 비해 유의하게 낮았다. IL-1R1 294C>T, 1498T>C SNP로 구성된 haplotype 유전자형의 분포양상이 초기 자궁내막증 환자에서 정상대조군과 차이가 있었다. IL-8 -353A>T, 2670A>T, 2767A>G SNP로 구성된 haplotype TAG 대립인자의 빈도가 초기 및 후기 자궁내막증 모두에서 정상 대조군과 유의한 차이를 보였으며, IL-18 -607C>A, -137G>C, 105A>C SNP로 구성된 haplotype 대립인자 CGA의 빈도 및 CGA haplotype 대립인자를 적어도 1개 이상 가진 유전자형의 빈도가 초기 자궁내막증 환자에서 정상대조군에 비해 유의하게 낮았다. 모든 환자에서 혈청 IL-1α, IL-2는 검출되지 않았다. 혈청 sIL-1R2 와 IL-18 농도는 연령과 신체질량지수를 교정 후에 비교한 결과 초기 자궁내막증 여성에서 정상대조군에 비하여 유의하게 낮았으며, 반면 sIL-1RA, IL-8, sIL-18R1 농도는 자궁내막증 여성과 정상대조군 간에 차이를 보이지 않았다. 초기 자궁내막증과 후기 자궁내막증사이에 혈청 sIL-1RA, sIL-1R2, IL-8, IL-18, sIL-18R1 농도 차이는 없었다. 정상대조군에서 IL-1계, IL-8계, IL-18계 SNP와 이들의 haplotype 유전자다형성은 혈청 sIL-1RA, sIL-1R2, IL-8, IL-18, sIL-18R1 농도에 영향을 미치지 않았다. 결론: 한국여성에서 IL-1R1 1498T>C SNP, IL-18R1 -68G>A SNP와 IL-1R1 294C>T, 1498T>C SNP로 구성된 haplotype 유전자형, IL-8 -353A>T, 2670A>T, 2767A>G SNP로 구성된 haplotype 대립인자 및 IL-18 -607C>A, -137G>C, 105A>C SNP로 구성된 haplotype 대립인자가 자궁내막증과 연관성이 있는 유전인자로 보인다. 이러한 유전자다형성들의 측정은 자궁내막증의 위험성이 있는 여성을 판별하는데 유용할 것으로 기대된다. * 본 내용의 일부는 American Journal of Reproductive Immunology (Chun S, Kim H, Ku SY, Suh CS, Kim SH, Kim JG. The Association Between Endometriosis and Polymorphisms in the Interleukin-1 Family Genes in Korean Women. Am J Reprod Immunol. 2012 August;68(2):154-63.)에 게재된 내용임

중증 자궁내막증 환자의 자궁 내막과 이소성 자궁내막증 병변에서 cyclooxygenase-2의 발현

박수현 연세대학교 대학원 2006 국내석사

자궁내막증은 가임기 여성의 10-15%에서 발생하는 비교적 흔한 질환으로 자궁내막조직이 자궁강 외부에 착상되어 생리통, 성교통 및 만성 골반통 등의 증상을 일으키며 불임의 주요한 원인이 되고 있다. 자궁내막증의 주요 병리 기전으로 생리혈의 역류 현상과 유전적 또는 환경적 요인 등이 중요하게 인식되었으나 최근에 스테로이드 생산 이상 및 면역학적 체계 이상 등이 자궁내막증 병변의 착상 및 전이에 중요한 기전으로 대두되었다. 또한 자궁내막증 병변에서 스테로이드성 급성 조절단백질 및 aromatase 이상 발현이 PGE2에 의해 유도된다는 연구가 보고되었고, cyclooxygenase-2 (이하 Cox-2로 약함)의 발현이 증가되었다는 보고와 함께 자궁내막증의 병리기전에 관한 Cox-2에 대한 연구가 활발히 진행되어 왔다. 이에 자궁내막증에서 발현되는 Cox-2에 대해 조사하여 자궁내막증의 병리기전을 확인하는 것은 의미있는 일이라고 할 수 있겠다. 따라서 본 연구에서는 자궁내막증 환자에서 Cox-2 발현 정도 및 발현 양상에 대해 살펴보고, 자궁내막증의 여러 가지 임상적 요인과의 상관관계에 대해 평가하였다.본 연구는 2005년 4월부터 9월까지 연세대학교 의과대학 영동 세브란스 병원에 내원하여 자궁내막증 또는 기타 양성 부인과 질환으로 수술을 진행한 환자를 자궁내막증 환자군과 자궁내막증이 아닌 대조군으로 분류하여 각각 자궁내막과 자궁내막종 또는 다른 난소 병변의 조직을 채취하여 semiquantitive RT-PCR을 이용하여 Cox-2 발현 정도를 조사하였다. 자궁내막증 환자군의 Cox-2 발현 정도 및 발현 양상을 대조군과 비교하였고, 생리주기, 자궁내막증 병기, 혈중 CA125 수치 및 자궁내막종 크기에 따른 Cox-2 발현에 대해 분석하였다.자궁내막증 환자군의 자궁내막과 자궁내막종에서 Cox-2 발현이 대조군에 비해 통계학적으로 유의하게 증가하였고 (각각 p=0.035, 0.023) 생리주기에 따라 비교한 결과, 자궁내막증 환자의 증식기 자궁내막과 분비기 자궁내막종에서 Cox-2 발현이 통계학적으로 유의한 증가를 보였다 (각각 p=0.046, 0.002). 각각의 병변내에서 생리주기에 따른 Cox-2 발현의 변화는 통계학적으로 유의하지 않았고, 혈중 CA125 및 자궁내막종 크기는 자궁내막과 난소 병변에서 보이는 Cox-2 발현과 유의한 상관관계를 나타냈다.요컨대 자궁내막증 병변에서 증가된 Cox-2는 PGE2 생성을 유도함으로써 자궁내막증의 발생 및 병리 기전에 관여할 것으로 추정되며, 선택적 Cox-2 억제재는 자궁내막증 치료에 이용될 수 있을 것으로 사료된다. 또한 생리주기에 상관없이 자궁내막증 환자의 자궁내막에서 통계적으로 유의하게 증가되어 있는 Cox-2 발현을 볼 때, 자궁내막증 환자에서 자궁내막의 변화와 차이를 예측해 볼 수 있었다. 또한 여러 가지 임상적 요인들과 상관관계를 확인함으로써, 자궁내막증 진단하거나 치료 반응 평가, 재발 유무 확인 및 예후를 평가하는데 이용할 수 있는 가능성을 확인하였고, 자궁내막종의 직경이 커짐에 따라 Cox-2 발현이 증가되는 점으로 보아 Cox-2는 자궁내막증의 전이 및 진행 과정에 작용할 것으로 사료된다 Introduction: Endometriosis, a common and complex gynecologic disorder, accounts for infertility, dysmenorrhea, dyspareunia and pelvic pain in 10%?15% of women of reproductive age and is a histologic disorder that is characterized by the presence of endometrial tissue in ectopic sites outside the uterus. Many studies have been reported about the pathophysiology of endometrioisis. Although retrograde menstruation theory and multiple genetic and environmental factors seem to be important, the critical factors that affect the implantation and propagation of endometriotic lesions are still largely unclear. Recent studies demonstrated that aberrant expression of steroidogenic acute regulatory protein and aromatase in endometriotic stromal cells is stimulated by the same molecule (PGE2). The study that the expression of Cox-2 increased in endometriotic lesions was reported recently and many researches were performed to find out the mechanism of Cox-2 involving the pathogenesis of endometriosis.Objectives: we studied to evaluate the expression grade and pattern of Cox-2 in endometriosis and to investigate the correlation between the expression of Cox-2 and several clinical characteristics (the stage of endometriosis, CA125 level, diameter of endometrioma).Materials and Methods: Eutopic endometrium was sampled by endometrial biopsy. Ectopic endometriotic tissues were sampled from endometriotic cysts in patients with endometriosis and ovarian tissue in control group was sampled frome other ovarian benign pathology. We isolated total RNA and synthesized cDNA. cDNA was amplified through semiquantitive RT-PCR and the products were loaded on agarose gel and electrophoresis was performed. The intensity of each band, after normalization with GAPDH mRNA, was quantified by the photographed gels with a densitometer.Results: The expression of Cox-2 in eutopic endometrium and ectopic endometriotic lesions of patients with endometriosis increased significantly (respectively p=0.035, 0.023). According to the menstrual phase, the expression of Cox-2 increased significantly in eutopic endometrium of proliferative phase and endometrioma of secretary phase in patients with endometriosis (respectively p=0.046, 0.002). The changes of Cox-2 expression in endometrium and ovarian lesion according to the menstrual phase were not significant statistically. The expressions of Cox-2 in endometrium and ovarian lesion were correlated significantly with serum CA125 and diameter of endometrioma.Conclusions: Cox-2 seems to be involved in pathogenesis of endometriosis through inducing the synthesis of PGE2 and selective Cox-2 inhibitor will be useful in treatment of endometriosis. We should consider the basal differences of Cox-2 expression in eutopic endometrium between endometriosis patients group and control group. At the point that there were significant correlations between Cox-2 expression and serum CA125 level or diameter of endometrioma, we assumed the possibility of using the Cox-2 expression level in the diagnosis, response evaluation and the prediction of prognosis of endometriosis and considered the involvement of Cox-2 in the pathogenesis of endometriosis by inducing the inflammatory process and angiogenesis within the endometrioma and the propagation of endometriosis.

한국여성에서 자궁내막증의 발생위험도와 Cytochrome P450 17alpha-Hydroxylase, Catechol-O-methyltransferase, Estrogen receptor 유전자 다형성과의 관련성에 관한 연구

이사라 이화여자대학교 대학원 2003 국내석사

자궁내막증은 가임기 여성의 10-15%를 차지하는 흔한 부인과적 질환이지만 원인과 병태생리는 아직 명확하게 밝혀진 바가 없으며 환경적 요인과 더불어 여러 유전자간의 상호작용에 의하여 생기는 다유전적인 질환으로 알려져 있어 원인 유전자를 찾는 연구들이 활발히 진행되고 있다. 자궁내막증은 에스트로겐에 의존적인 질환이므로 에스트로겐의 합성, 대사, 및 작용에 관여하는 유전자의 다형성이 자궁내막증의 발생기전에 중요한 역할을 할 수 있다. 이에 본 연구에서는 한국인 여성에서 cytochrome P450 17α-Hydroxylase(CYP17), catechol-O-methyltransferase(COMT) 및 에스트로겐 수용체 α (estrogen receptor-α, ER-α)의 유전자 다형성이 자궁내막증의 발생 위험도를 증가시키는 지에 대해 연구하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. CYP17 유전자의 MspA1 다형성의 분포는 자궁내막증 환자군에서 A1/A1군이25명(18.4%), A1/A2군이80명(58.8%), A2/A2군이 31명(22.8%) 이었으며 대조군에서의 분포는 각각 70명(27.9%), 100명(39.8%), 81명(32.3%)이었다. A2 allele을 가지는 경우에 위험도 1.717(95%CI,1.027-2.871)로 자궁내막증의 발생 위험도가 유의하게 증가하는 것으로 나타났다(P=0.039). 2. COMT 유전자의 NIaIII 다형성의 분포는 자궁내막증 환자군에서 COMT ^(HH) 군이 77명(56.6%), COMT ^(HL)군이 47명 (34.6%), COMT ^(LL)군이12명(8.8%) 이었으며 대조군에서의 분포는 각각 127명(50.6%), 99명(39.4%), 25명(10.0%) 이었으며 자궁내막증 환자군과 대조군 사이의 유의한 차이는 없었다. 3. ER-α 유전자의 PvuII 다형성의 분포는 자궁내막증 환자군에서 PP군이 20명(14.7%), Pp군이 53명(39.0%), pp군이 63명(46.3%) 이었으며 대조군에서의 분포는 각각 35명(13.9%), 97명(38.7%),119명(47.4%) 으로 나타났으며 자궁내막증 환자군과 대조군 사이의 유의한 차이는 없었다. 이상의 결과로 볼 때, 한국인 여성에서 자궁내막증의 발생위험과 COMT, Estrogen receptor-α 유전자 다형성간에 연관성은 없는 것으로 나타났으나 CYP17의 경우에는 MspA1 유전자 다형성 중에서 A2 allele을 가지는 경우, 자궁내막증의 발생위험도가 증가하는 것으로 나타나 에스트로겐의 합성에 관여하는 cytochrome P450c17α의 유전자인 CYP17의 단일염기서열다형성이 자궁내막증과 연관성이 있는 것으로 나타났다. 본 연구결과를 토대로 한국인 여성에서 자궁내막증 발생의 위험이 높은 여성을 선별할 수 있는 임상적 방법이 될 수 있을 것이다. Endometriosis is estimated to occur in 10-15% of woman in reproductive age. But it’s exact cause and pathophysiology remained unknown. It is known as a polygenic disease which is caused by the interaction of environmental factors and genetic factors. A number of genetic studies have revealed association between the development of endometriosis and genetic polymorphisms. However the exact genes that play the key role in the susceptibility of development and progression of endometriosis are still unknown. Endometriosis is known as an estrogen dependent disease thereby the polymorphisms of the genes which are responsible for the synthesis, metabolism and the action of estrogen would play a major role in the occurrence of endometriosis. We aimed to investigate whether polymorphisms of genes encoding CYP17, COMT and Estrogen receptor-αare associated with the risk of endometriosis in Korean women, the results are as follows. 1. We studied 136 patients 18-41 years with histopathologically confirmed endometriosis rAFS stage Ⅲ/IV and 251 control group women who were surgically proven to have no endometriosis. 2. The distribution according to MspA1 genetic polymorphisms of CYP17 were as follows. A1/A1, A1/A2, and A2/A2 genotypes were 18.4%(25 women), 58.8%(80 women) and 22.8%(31 women) in the study group and 27.9%(70 women), 39.8%(100 women) and 32.3%(81 women) in the study group. In case of women having A2 allele, the risk of endometriosis was significantly increased(odds ratio =1.717, CI,1.027-2.871). 3. The distribution according to NIaⅢ genetic polymorphisms of COMT were as follows. COMT ^(HH),COMT ^(HL), and COMT ^(LL) genotypes were 56.6%(77 women), 34.6%(47 women) and 8.8%(12 women) in the study group and 50.6%(127 women), 39.4%(99 women) and 10.0%(25 women) in the study group. There was no significant difference between the study group and the control group. 4. The distribution according to PvuII genetic polymorphisms of ER-αwere as follows. PP, Pp, pp genotypes were 14.7%(20 women), 39.0%(53 women) and 46.3%(63 women) in the study group and 13.9%(35 women), 38.7%(97 women) and 47.4%(110 women) in the study group. There was no significant difference between the study group and the control group. In conclusion, in this study the SNP of CYP17 which encoding the cytochrome P450c17αpolymorphism was associated with the risk of developing endometriosis in Korean women but COMT and Estrogen receptor-αgenetic polymorphisms were not. In the MspA1 genetic polymorphism of CYP17, having A2 allele is associated with the increased risk of endometriosis. This result could suggest a clinical tool which can predict the occurrence of endometriosis in Korean women.