「살모넬라」症(Salmonellosis) : 그 臨床病理學的 病理解剖學的 及 病理組織學的 硏究

이성수 서울대학교 대학원 1959 국내박사

위암의 골수조직 미세전이와 관련된 CK20 mRNA와 CEA mRNA 변화에 관한 연구

김형길 고려대학교 대학원 2004 국내박사

위암은 근치적 절제술을 시행하여도 재발율이 높은 암으로 수술 당시에 혈행성 전이가 있음을 시사하나 기존의 진단 방법으로는 종양세포의 미세전이를 진단하기 어렵다. 골수내에는 상피 기원 세포가 정상적으로 존재하지 않기 때문에 골수에서의 상피 기원 세포의 발견은 미세전이 진단에 유효하여 유방암, 폐암, 대장직장암에서 예후와 관련이 있음이 다수의 연구에서 시사되었다. 골수내 미세전이의 규명은 검사법의 민감도와 특이도가 유동적이어서 문제가 되고 있고 면역조직화학염색법에 의한 골수내 미세전이의 연구에 대한 다연구분석 결과 유방암을 제외하고는 재발이 없는 생존과의 연관성이 증명되지 않았다. 역전사 효소반응과 중합효소 연쇄반응법(RT-PCR)을 이용하여 상피세포 특이 단백질을 찾는 방법은 매우 예민하지만 증폭 횟수을 늘릴 경우나 오염, 부적절한 전사로 인한 위양성이 문제되고 있다. 사이토케라틴 20은 상피세포의 골격을 이루는 중간 세사(intermediate filament)인 사이토케라틴단백의 하나로 악성화된 상피세포에서 계속 발현되어 골수나 말초 혈액에서 상피 기원 암세포를 찾는데 유용하다고 보고되고 대부분의 대장암에서 발현되며 위암, 췌장암에서도 발현율이 높다고 알려져 있다. 또한 RT-PCR을 이용한 암배아성항원(carcinoembryonic antigen)의 검출은 면역조직화학염색보다 예민하고 낮은 위음성을 보인다는 보고가 있다. 또한 원발암의 혈관 밀도는 신생혈관 생성과 혈관침윤의 지표가 되고 골수내 미세전이와 연관이 있다는 보고가 있다. 이에 본 연구에서는 위암환자의 골수천자액에서 RT-PCR법으로 사이토케라틴을 검출하여 환자의 임상병리학적 특성과의 연관성을 알아보고 더불어 RT-PCR법을 이용한 암배아성항원의 검사 결과와 비교하고 상기의 결과들과 종양내 미세혈관밀도와의 관계를 알아보고자 하였다. 위암을 진단받고 근치적 치료 목적으로 위절제술을 시행받을 환자 113명을 대상으로 한쪽 장골에서 골수를 천자하여 단핵세포를 분리하고 RT-PCR법으로 상피세포 특이항원인 사이토케라틴20과 암배아성항원의 mRNA를 측정하였다. 미세전이와 종양내 미세혈관 밀도와의 연관성을 알아보기 위해 수술로 적출된 종양조직의 파라핀 블록을 CD34로 면역염색을 시행하여 미세혈관 밀도를 측정하였다. 상기 검사의 결과들과 임상병리학적 특성과의 관계를 분석하여 아래의 결과를 얻었다. 1. 골수천자액의 CK20 mRNA의 양성율은 전체 113예중 27예인 23.9%이었고 조기위암이나 진행성위암, AJCC 병기, 종양의 침윤도, 림프절전이, 세포분화도, 림프혈관 침윤에 따른 유의한 차이를 보이지 않았다. 로렌분류에 따른 장형위암에서 14.6%(7/48), 미만형과 혼합형위암에서 30.8%(20/65)의 양성율을 보여 유의한 차이가 있었다(p=0.037). 골수천자액의 CEA mRNA 양성율은 측정을 시행한 75예 중 29예로 38.7%이었고 병리학적 특성에 따른 차이가 없었다. 골수천자액의 CK20 mRNA와 CEA mRNA 중 하나 이상에서 양성을 보인 44예와 모두 음성인 31예를 두 군으로 나누어 비교 하였을 때 임상병리학적 특성에 따른 유의한 차이가 없었다. 2. 종양조직에서 CD34로 면역조직화학염색을 하여 미세혈관 측정을 시행한 110예에서 미세혈관 밀도의 평균치는 77.3(+28.9)이었고 조기위암군의 평균치가 85.3(+26.7)으로 진행성위암군 71.7(+27.6) 보다 유의하게 높았다(p=0.005). 진행성위암군에서 종양 침윤도와 림프절전이에 따라 미세혈관 밀도가 증가하는 경향을 보였으나 통계적 유의성은 없었다. 조기위암군에서 림프절전이 유무에 따른 유의한 차이가 없었다. 그 외의 병리학적 특성에 따른 미세혈관 밀도의 차이는 없었다. 3. 골수천자액의 CK20 mRNA와 CEA mRNA 검출 유무에 따른 미세혈관 밀도는 진행성위암군이나 조기위암군에서 유의한 차이가 없었다. 4. 평균 24.7(+10.0)개월의 추적기간 동안 CK20 mRNA 검출 유무에 따른 생존분석은 유의하지 않았고 진행성위암군에서 미세혈관밀도의 중앙값 70.4(+28.9)을 기준으로 중앙값 이하군과 이상군으로 나누어 생존양상의 차이(생존곡선)를 보았을 때 유의한 차이가 없었다. 이상의 결과로 위암환자의 골수천자액에서의 RT-PCR법을 이용한 CK20 mRNA와 CEA mRNA의 측정은 임상병리학적 특성이나 종양조직내의 미세혈관 밀도와의 연관성이 미미하여예후 예측인자로서 적합성은 장기간의 추적 연구가 필요할 것으로 생각되며향후 위암의 골수 미세전이 연구에서 RT-PCR법은 민감도와 특이도를 높여 적용되어야 할 것으로 생각된다. Even after curative rection, there are many recurrences of the cancer in patients with gastric cancer. One may speculate hematogenous metastasis early in tumor development, but diagnostic techniques currently available are not sufficiently sensitive to detect micrometastasis. Systemic tumor cell dissemination detected in bone marrow holds a strong association with poor outcome in breast, lung and colorectal cancers, since cells of epithelial origin are not present in bone marrow under normal condition. Identifying micrometastasis can be problematic owing to varing sensitivity and specificity of detection methods. Meta-analysis onbone marrow micrometastasisdetected by immunohistochemical stain failed to show a correlation between such micrometastasis and relapse free survival except breast cancer. The detection of mRNA for a specific marker protein by polymerase chain reaction(PCR) is highly sensitive approach to micrometastatic tumor detection. But oversensitivity increase with the number of amplication cycles, contamination or illegitimate transcription. Cytokeratin 20 is a member of the epithelial subgroup of the multigene family of the intermediate filament proteins, cytokeratins. Nearly all colorectal cancer and many adenocarcinoma of the stomach and pancreas revealed CK20 mRNA and protein expression. RT-PCR techniques directed at carcinoembryonic antigen(CEA) detection in hematopoietic bone marrow samples have been reported accurate with low false negative rates and a greater sensitivity than immunohistochemistry. And the vascularity of the primary tumor, used as an index of angiogenesis and vascular invasion, correlates with the presence of bone marrow micrometastasis. The aims of our study is to evaluate correlation of cytokeratin 20 in bone marrow aspirates and clinicopathological characteristics of gastric cancer patients using reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) technique, to compare the results of RT-PCR for CK20 with that of CEA in bone marrow aspirates, and to evaluate correlation of the results of the above and microvessel density in tumors. This study includes 113 patients with primary gastric cancer, all of whom underwent curative resection. Bone marrow aspirates were otained in one side iliac crest and fraction of mononuclear cells was obtained. Dectection of CK20 mRNA and CEA mRNA was done by RT-PCR technique. Paraffin blocks of resected specimens were stained by CD34 to count microvessel density of the primary tumor and evaluated for correlation of micrometastasis in bone marrow and microvessel density. We analysed the results of the above and relationshipwith clinicopathological fators. The results were as follows. 1. CK20 mRNA in bone marrow aspirates was expressed in 27 patients out of 113 patients(23.9%). And there was no significant difference in expression rate between early gastric cancer and advanced gastric cancer groups. There were no significant differences in CK20 mRNA expression according to AJCC stage, depth of tumor invasion, lymphnode metastasis, histology and lymphovascular invasion. Diffuse or mixed type was significantly higher in CK20 mRNA expression rate than intestinal type(30.8% vs 14.6%, p=0.037). CEA mRNA was expressed in 29 patients out of 75 patients(38.7%) with no significant differences according to clinicopathologic factors. CK20 mRNA expression and/or CEA mRNA expression were found in 44 patients out of 75 patients. Compared with 31 patients who were all negative in both CK20 mRNA and CEA mRNA, there were no significant differences between two groups according to clinicopathologic factors. 2. Immunohistochemical staining by CD34 was performed in tumors of 110patients with gastric cancer. The average microvessel density in tumors of all patients was 77.3(+28.9). Average microvessel density was 85.3(+26.7) in early gastric cancer group and 71.7(+27.6) in advanced gastric cancer group with statistical difference(p=0.005). Microvessel density in advanced cancer group was increasing along with tumor stage and lymphnode metastasis without statistical significance. There was no significant difference in microvessel density in early gastric cancer between lymphnode negative and lymphnode positive groups. And there was no significant differences in microvessel density according to other clinicopathologic factors 3. There was no singificant differences in microvessel density according to CK mRNA and CEA mRNA expressions in both early gastric cancer and advanced gastric cancer group. 4. Follow up was performed for 24.7(+10)months in average. Analysis for overall survival according to CK20 mRNA expression was insignificant due to small number of mortality in CK20 mRNA expression group.There was no significant difference in overall survival between hypervascular group(MVD >70.4) and hypovascular group(MVD <70.4). In conclusion, expressions of CK20 mRNA and CEA mRNA in bone marrow aspirates had few correlation to clinicopathological factors and microvessel density in tumors, so more sensitive and specific RT-PCR methods are needed in reserch for bone marrow micrometastasis of patients with gastric cancer. And long term study was needed to evaluate the feasibility of bone marrow CK20 as prognostic factor.

IgA 腎病症에 對한 病理學的 및 免疫病理學的 硏究

이종대 忠南大學校 1988 국내석사

韓國人 口腔癌의 病理學的 및 組織化學的 硏究

조한국 서울大學校 大學院 1967 국내박사

齒간의 類腫瘍性 增殖病菓에 對한 病理學的 및 組織化學的 硏究

김홍석 서울大學校 大學院 1974 국내박사

한국인 조기 유방암에서 Ki-67과 MammaPrint 위험도의 상관관계 분석

김병수 건국대학교 대학원 2023 국내석사

MammaPrint는 유방암에서 일반 병리학적 검사와 더불어 광범위하게 시행되는 검사이다. 본 연구에서는 한국인의 조기 유방암 환자에서 병리학적 검사와 더불어 MammaPrint 검사를 시행했을 때 이들 검사의 임상적 의의를 알아보고자 본 연구를 진행하였다. 연구대상자는 2018년부터 2020년까지 건국대학교 서울병원에서 HR+, HER2-, N0-1의 National Comprehensive Cancer Network Guideline (Breast Cancer Version: 4.2022)의 표준 치료방식에 따라서 치료를 받고 MammaPrint 검사를 진행한 환자 72명을 대상을 선별하였다. 이후 연령, 종양 크기, 결절기, 조직학적 등급, ER, PR, HER-2, Ki-67, P53, P63를 환자의 의료 기록 및 병리학적 보고서로부터 얻었다. 자료수집은 해당 기관의 IRB(KUMC 2022-10-035)를 획득 후 진행하였다. 첫째, 조기 유방암 환자 72명 중 MammaPrint Low Risk 결과가 48명 (66.7%)이며, High Risk는 24명 (33.3 %)으로서 통계적으로 유의한 결과가 나타났다(p=0.001). 48명(66.7%)에 해당하는 MammaPrint의 위험도가 낮은 유방암 환자에게는 National Comprehensive Cancer Network Guideline(Breast Cancer Version: 4.2022)에 의거 보조 화학 치료요법이 고려되지 않는 것으로 나타났다. 둘째, 수술 후 진행된 많은 병리학적 요소 중 가장 큰 유의성을 지닌 Ki-67 지수의 25% 이하는 43명(59.7%) 였다. 또한, 25% 초과는 29명 (40.3%)로 통계적으로 차이가(p=0.001) 있었다. 셋째, 증식성 마커인 Ki-67 25% 이하에서 MammaPrint Low Risk가 38명(88.4%)으로 가장 많았고, 25% 초과에서는 MammaPrint High Risk가 19명(65.5%)으로 가장 많이 나타났다. 또한, Ki-67 지수가 25% 이하가 38명(79.2%)이었고, MammaPrint Low Risk가 48명(66.7%)과 비슷한 결과가 도출되었으므로, MammaPrint와 Ki-67은 양의 상관관계가 있었다. 국제 표준검사로 인정받은 다중유전자 검사 기술인 MammaPrint는 국내에서는 사용이 어렵고, 현재는 비의료급여 형태로 국내에서만 가능하다. 다만, 위의 사항들을 고려하여 활용한다면 MammaPrint를 효율적으로 사용할 수 있을 것으로 보인다. 또한, 이러한 데이터는 임상적 근거가 명확하다면 국내에서도 MammaPrint 검사를 대체할 수 있다는 단서를 제시한다고 볼 수 있다. 넷째, MammaPrint와 Ki-67의 일반적인 검토 사항은 신장과 체중 체질량지수, 초경 나이, 폐경 유무, 첫출산 나이 그리고 출산 자녀 수와는 별 차이가 없었다. 또한 가계(家系) 중 유방암 환자 유무와 종양의 좌, 우측 등도 통계학적 유의성을 찾을 수 없었다. 그러나 종양 크기에 있어서 MammaPrint Low Risk군은 1.63±.63과 High Risk 군은 1.96±.96 (P=.083)로서 High Risk 군 종양의 크기가 0.33 만큼 더 큰 것으로 나타났으나 통계적으로 유의성이 없었지만, 종양의 크기와 관련해서 MammaPrint의 위험도를 통해 추가 연구가 필요로 해 보였다. 본 연구에서 제시된 상세한 임상 및 병리학적 결과를 바탕으로 MammaPrint의 권장 사용 외에 병리학적 요인이 검토 가능하다면 기존보다 효율적인 유방암 환자들의 화학적 보조 치료요법 적용 방법에 대해 고려될 것이다. MammaPrint is a widely used test in conjunction with pathological examination in breast cancer. This study was conducted to find out the clinical significance of the MammaPrint test along with the pathological test in Korean patients with early-stage breast cancer. The study subjects were treated according to the standard treatment regimen of the National Comprehensive Cancer Network Guideline (Breast Cancer Version: 4.2022) for HR+, HER2-, and N0-1 at Konkuk University Hospital from 2018 to 2020 and underwent MammaPrint examination.72 patients were targeted for inclusion. Age, tumor size, nodule, histological assessment, ER, PR, HER-2, Ki-67, P53, P63 were then obtained from patient medical records and pathological reports. Data collection was performed after obtaining the institution's IRB (KUMC 2022-10-035). First, among 72 early breast cancer patients, MammaPrint Low Risk was 48 (66.7%) and High Risk was 24 (33.3%), showing statistically significant results (p= 0.001). Therefore, 48 patients (66.7%) were considered to have low genomic risk, and therefore did not require cancer treatment for breast cancer. Second, 43 patients (59.7%) had an Ki-67 index of 25 or less, and 29 patients (40.3%) had an Ki-67 index of more than 25, showing a statistical difference (p=0.001). Third, MammaPrint Low was the most common with 38 patients (88.4%) when the Ki-67 index was less than 25, and MammaPrint High Risk appeared the most with 19 patients (65.5%) when the Ki-67 exceeded 25. Also, since the Ki-67 index was low (25 or less) in 38 patients (79.2%) and MammaPrint low in 48 patients (66.7%), similar results were derived, so MammaPrint and Ki-67 had a positive correlation with each other. MammaPrint, which is a multi-gene test technology recognized as an international standard test, is difficult in Korea and is currently only available in Korea in the form of non-medical reimbursement. . However, if the above points are considered and used, it seems possible to use MammaPrint efficiently. In addition, these data can be seen as suggesting a clue that MammaPrint testing can be substituted in Korea if the clinical basis is clear. Fourth, general information about MammaPrint and Ki-67 index was not significantly different from height, weight, body mass index, age at menarche, presence of menopause, age at first birth, and number of children. In addition, there was no significant difference in the presence or absence of breast cancer patients in the household and the left and right side of the tumor. However, in terms of tumor size, the MammaPrint Low Risk group was 1.63±.63 and the High Risk group was 1.96±.96 (P=.083), showing that the size of the tumor in the High Risk group was larger by 0.33, but it was not statistically significant. Based on the detailed clinical and pathological results presented in this study, the inclusion of pathological factors in addition to the recommended use of MammaPrint will help to more efficiently apply chemically assisted therapy to breast cancer patients.

염증성 장 질환의 대장 조직에서 디지털 병리 기법을 활용한 컨볼루션 신경망 기반의 딥 러닝 기법으로 CD3 양성세포의 계측병리 연구

김소연 청주대학교 보건의료대학원 2025 국내석사

염증성 장 질환은 크론병과 궤양성 대장염을 포함하는 만성 염증성 질환으로, 장 내 미생물과 면역 반응의 복합적 상호작용에 의해 발생한다. 상피내 림프구는 장의 면역 균형을 유지하는 중요한 역할을 하며, CD3 양성 T 세포는 CD3 면역조직화학 염색으로 더 효과적으로 시각화할 수 있고 CD3 발현 수준은 면역 치료의 반응성을 평가하는데 중요한 바이오마커로 활용될 수 있다. 디지털 병리학은 유리 슬라이드를 디지털화하여 모니터를 통해 관찰, 해석, 분석하고 보관하는 체계로 이미지 분석의 정밀성을 높이며 질병의 조기 발견과 진단 정확성을 향상시킬 수 있는 접근법이다. 본 연구는 염증성 장 질환 환자의 대장 조직에서 디지털 병리 기법을 활용한 컨볼루션 신경망 아키텍처를 기반으로한 딥 러닝 기법으로 대장 조직에서 CD3 염색을 통해 T세포의 분포와 활성 상태를 분석하고, 이를 다변량 분석 기법으로 질병 상태와의 상관관계를 종합적으로 평가하였다. 오픈소스 소프트웨어를 사용하여 관심 영역을 설정하고 최상의 결과를 위한 임계값과 여러 매개변수를 도출하여 세포 검출 알고리즘을 실행하였다. 세포 검출 매개변수는 이미지 검출로 광학 합계로 도출하였으며, 감지된 세포에서 3,3′-디 아미노벤지딘 염색의 광학 밀도의 여러 지표를 활용하여 CD3 발현의 강도와 변동성을 평가하였다. QuPath 소프트웨어를 활용하여 CD3 양성 세포 46,168개와 음성 세포 46,794개를 검출한 후, 각 세포의 3,3′-디아미노벤지딘 염색의 강도를 분석하였다. 3,3′-디아미노벤지딘 염색의 최대 항원 발현 분석 결과 CD3 양성 세포에서 0.916 ± 0.364, CD3 음성 세포에서 0.186 ± 0.098로 도출되어 유의한 차이를 보였으며 (p < 0.0001), 이는 γδ 상피내 림프구가 대장염 발병에서 보호 역할을 하며 점막 항상성 유지에 기여한다는 기존 보고 내용과 일치하며, γδ T 세포가 면역 조절에 중요한 역할을 할 가능성을 시사한다. 3,3′-디아미노벤지딘 염색의 최저 항원 발현 분석 결과 CD3 양성 세포는 0.073 ± 0.076, CD3 음성 세포는 0.007 ± 0.021로 도 출되어 면역 활성도가 낮은 세포 간에도 유의한 차이를 보였다(p < 0.0001). 3,3′- 디아미노벤지딘 염색의 평균값 분석 결과 CD3 양성 세포는 0.37 ± 0.176, CD3 음성 세포는 0.075 ± 0.030으로 도출되었으며, 세포의 크기 분석 결과 CD3 양성 세포의 평균 면적은 438.9 ± 28.27, CD3 음성 세포는 45.36 ± 29.53으로 유의한 차이를 보였다(p < 0.0001). 이러한 결과는 활성화된 염증성 장 질환과 같은 만성 염증 질환에서 세포 면적이 커지고, 세포 면적 증가가 면역 세포의 활성화 및 염증 반응의 강도를 반영하며, 질병의 진행 상태와의 상관관계를 평가하는데 유용한 지표임을 시사한다. 본 연구는 디지털 병리학과 인공지능을 활용하여 컨볼루션 신경망 아키텍처를 기반으로 한 딥러닝 모델을 통해 대장 조직의 전체 슬라이드 이미지에서 CD3를 분석한 최초의 방법으로, 모든 연구 결과는 CD3 양성 세포는 양성으로, CD3 음성 세포는 음성으로 일관되게 판독하였다. 따라서 대규모 이미지 데이터셋에서 신속하고 일관된 분석이 가능하며, 복잡한 형태의 패턴과 차이를 정량적으로 평가하는데 유용한 것으로 나타났다. 이러한 접근법은 향후 염증성 장 질환의 진단, 치료 전략 수립, 치료 반응 모니터링에 중요한 기초 자료를 제공할 수 있을 것으로 기대된다. Inflammatory bowel disease, including Crohn's disease and ulcerative colitis, is a chronic inflammatory disorder caused by the complex interplay of immune responses with intestinal microorganisms. Intraepithelial lymphocytes play a critical role in maintaining intestinal immune balance. CD3-positive T cells can be more effectively visualized using CD3 immunohistochemical staining, and CD3 expression levels serve as key biomarkers for evaluating immunotherapy responsiveness. Digital pathology, a system that digitizes glass slides for observation, interpretation, analysis, and storage on a monitor, enhances the precision of image analysis and improves early disease detection and diagnostic accuracy. This study employed a deep learning technique based on a convolutional neural network architecture to analyze the distribution and activation of T cells through CD3 staining in the colon tissues of IBD patients using digital pathology. The correlation with disease status was comprehensively evaluated using multivariate analysis. Using open-source software, regions of interest were defined, and thresholds and parameters were optimized to achieve the best results. Cell detection parameters were derived as optical sums from image analysis, and the intensity and variability of CD3 expression were assessed using several optical density metrics of 3,3′-diaminobenzidine staining. QuPath software identified 46,168 CD3-positive cells and 46,794 CD3-negative cells, and the intensity of DAB staining was analyzed. Maximum antigen expression showed a significant difference between CD3-positive cells (0.916 ± 0.364) and CD3-negative cells (0.186 ± 0.098) (p < 0.0001), consistent with previous findings that γδ intraepithelial lymphocytes play a protective role in colitis and contribute to mucosal homeostasis. This supports the potential role of γδ T cells in immune regulation. Minimum antigen expression also showed a significant difference between CD3-positive (0.073 ± 0.076) and CD3-negative cells (0.007 ± 0.021) (p < 0.0001), even among cells with low immune activity. Mean antigen expression was significantly higher in CD3-positive cells (0.37 ± 0.176) compared to CD3-negative cells (0.075 ± 0.030), and cell size analysis revealed that CD3-positive cells (438.9 ± 28.27) were significantly larger than CD3-negative cells (45.36 ± 29.53) (p < 0.0001). These findings indicate that increased cell size in chronic inflammatory diseases such as IBD reflects immune cell activation and the intensity of the inflammatory response, serving as a useful indicator for evaluating disease progression. This study is the first to analyze CD3 in whole-slide images of colon tissues using a deep learning model based on convolutional neural network architecture combined with digital pathology and artificial intelligence. The results consistently identified CD3-positive cells as positive and CD3-negative cells as negative, enabling rapid and consistent analysis of large image datasets. This approach proves useful for quantitatively evaluating complex patterns and differences and is expected to provide valuable data for IBD diagnosis, treatment strategy development, and treatment response monitoring.

炎症性齒간組織의 免疫 病理學的 硏究 : 邊緣性 齒根組織의 連鎖狀球菌의 局在性에 對하여

김현겸 서울大學校 大學院 1974 국내박사

螢光抗體法에 依한 齒根端病巢의 免疫病理學的 硏究 : Streptococcus 및 Staphylococcus 抗原의 局在性에 대하여

윤주홍 서울大學校大學院 1975 국내박사

韓國人 口腔肉腫의 病理學的 및 組織化學的 硏究

이의웅 서울大學校 1974 국내박사