성장인자 없이 전기자극으로 중간엽줄기세포의 연골분화 유도 연구

이규석 忠南大學校 大學院 2016 국내석사

ATP oscillations which are crucial for prechondrogenic condensation in chondrogenesis In this study, we found that ES(Electrical Stimulation) generated ATP and calcium oscillations and induced chondrogenesis without addition of exogenous growth factors. The actions of ES for ATP oscillations and chondrogenesis depended on extracellular ATP signaling via P2X4receptor.Inaddition,ESinducedthesignificantincreaseinexpressionof-β1 and BMP2, and inhibition of either -β or BMP signaling prevented the ES-induced chondrogenesis.

Enhancement of CQA Derivative Content in Aster chusanensis by UV Irradiation and Validation of Analytical Method by HPLC-DAD

김주연 경상국립대학교 대학원 2025 국내석사

미용전공 대학생의 셀프리더십이 진로결정 자기효능감과 진로준비행동에 미치는 영향

최성희 영산대학교 2017 국내석사

Youth unemployment is coming, and knowledge into economic and social change, a college student in the future for growth as to mature to be able to live productive lives. You should polish your foundation. However, despite concrete action in the course of carrying out their course is very important in the process so far, like knowledge and attitudes and cognitive path. The side has been highlighted. Beauty art career choice by a college student, your composition, in the case of major interest, ability to grow through the professional to high cost and time despite the fact that different. Choose careers for other areas due to lack the job market for the Explorer or turn a completely different as their major cases is happening. This study analyzed the mediating effect of self-efficacy for career decision making in the relation between self leadership and career preparation behavior, and the effect relation that behavior centered strategy and cognitive strategy influence to the career preparation behavior which are the strategy of self leadership by college students with beauty major. The results analyzed through empirical study of this study are as follows. First, the analysis result of difference level of self leadership, the self-efficacy for career decision making and career preparation behavior according to statistical characteristic, shows that there exists no difference according to age, the hair and make up major shows higher cognitive strategy of self leadership than hair and make-up while the skin major shows higher problem solving of self-efficacy for career decision making than make up major. It was proved that two-year beauty college shows higher future plan of self-efficacy for career decision making than four-year beauty college. The case experienced in leadership training shows higher behavior centered strategy, cognitive strategy of self leadership than the case not experienced while the case experienced shows higher future plan, goal selection of self-efficacy for career decision making than the case not experienced. Second, it was proved that the behavior centered strategy and cognitive strategy of self leadership of college students with beauty major influence positively to the career preparation behavior of college student with beauty major, the cases where the problem solving, future plan, goal selection and career information of self-efficacy for career decision making are performed, positively influence to career preparation behavior. Through above study, we can say that nothing is more important than the cognitive strategy which can prevent the negative and critical thinking through behavior centered strategy and positive self-dialogue of self leadership which is the influential power that college students with beauty major can set their goal themselves lead the course of effort and self evaluation. It is expected that the development of self leadership can bring the result which corresponds to the leadership training theory including the promotion of self-efficacy, the satisfaction increase of college life and basic career ability, is the ultimate goal of college. Therefore, it is considered that it would contribute to the successful career preparation and future organizational life adaptation if the self leadership competency development program of college student is developed based on the result of this study. It is meaningful that the result verified by this study can provide the basic data for various measures which can be applicable to the actual work and theoric knowledge of support program that is changeable to the active career preparation for college students with beauty major by analyzing various educational system for the enhancement of the self-efficacy for decision making. 청년실업 문제가 대두되고, 지식경제 사회로 변화하면서 대학생은 미래의 삶을 생산적으로 살아갈 수 있는 성숙한 직업인으로서 성장하기 위한 기초를 닦아야 한다. 그러나 이러한 과정에서 진로수행의 구체적 실천과정이 매우 중요함에도 불구하고, 지금까지는 진로에 관한 지식이나 태도와 같은 인지적인 측면만이 부각되어 왔다. 미용전공 대학생의 경우, 본인의 적성, 흥미, 능력에 의한 진로선택을 통해 전문 미용인으로 성장하기 위해 고비용과 시간을 들였음에도 불구하고 다양한 직업분야에 대한 탐색기회 부족으로 인해 다른 분야의 직업을 선택하거나 전혀 다른 전공으로 전향하는 경우가 발생하고 있다. 본 연구는 미용전공 대학생의 셀프리더십의 전략인 행동 중심적 전략과 인지적 전략이 진로준비행동에 미치는 영향관계와 셀프리더십과 진로준비행동과의 관계에서 진로결정 자기효능감의 매개효과를 분석하였다. 본 연구의 실증연구를 통해 분석된 연구결과는 다음과 같다. 첫째, 인구통계학적 특성에 따른 셀프리더십, 진로결정 자기효능감, 진로준비행동의 정도에 대한 차이를 분석한 결과, 연령에 의한 차이는 존재하지 않았으며, 대학 전공이 피부인 경우에 비하여 헤어와 메이크업인 경우가 셀프리더십의 인지적 전략이 높게 나타났고, 메이크업인 경우에 비하여 피부인 경우가 진로결정 자기효능감의 문제해결이 더 높게 나타나는 것을 알 수 있었다. 대학 구분에 따른 4년제 미용대학인 경우에 비하여 2년제 미용대학인 경우가 진로결정 자기효능감의 미래계획이 더 높게 나타나는 것을 알 수 있었다. 리더십 교육 참여 경험이 없는 경우에 비하여 있는 경우가 셀프리더십의 행동 중심적 전략, 인지적 전략이 더 높게 나타나는 것을 알 수 있었고, 또한 참여 경험이 있는 경우 진로결정 자기효능감의 미래계획, 목표선택이 더 높게 나타나는 것을 알 수 있었다 둘째, 미용전공 대학생의 셀프리더십의 행동 중심적 전략과 인지적 전략은 미용전공 대학생의 진로준비행동에 긍정적인 영향을 미치며, 더불어 진로결정 자기효능감의 문제해결, 미래계획, 목표선택, 직업정보를 통했을 경우에는 상대적으로 진로준비행동에 긍정적인 영향이 크게 미치는 것으로 나타났다. 이상의 연구결과를 통해 미용전공 대학생에게 있어 본인 스스로 목표를 설정하고 이에 대한 노력과 자기평가의 과정을 이끌어 갈 수 있는 영향력인 셀프리더십의 행동 중심적 전략과 긍정적인 자기대화를 통해 부정적이고 비판적인 사고를 예방할 수 있는 인지적 전략은 무엇보다도 중요하다 할 수 있다. 셀프리더십을 개발하면 자기효능감이 촉진되어 기초직업능력과 대학생활 만족도를 높일 수 있다는 대학의 궁극적 목표인 리더십 육성이론에 부합하는 결과를 기대할 수 있다. 따라서 본 연구의 결과를 바탕으로 대학생의 셀프리더십 역량 개발 프로그램들이 개발된다면 대학생의 성공적인 진로준비 및 향후 조직생활 적응에 도움이 될 것이라 사료된다. 본 연구에서 검증된 결과는 진로결정 자기효능감을 제고할 수 있는 다양한 교육체계를 분석하여, 미용전공 대학생의 적극적인 진로준비로 전환될 수 있는 지원 프로그램의 이론적 지식과 실무에 적용 가능한 다양한 방안들에 대한 기초적인 자료를 제공해 줄 수 있다는 점에서 그 의의를 찾을 수 있다.

미용서비스 종사자가 지각하는 내부마케팅이 고객지향성과 직무성과에 미치는 영향

김보라 영산대학교 2017 국내석사

국내 미용서비스 산업은 급속도로 변하는 환경 속에서 점포수의 포화상태 현상, 평준화된 미용기술, 새로운 형태의 미용서비스 시설 탄생에 따른 소비자들의 선택폭이 확대됨에 따라 경쟁체제가 심화되었다. 이러한 미용서비스 산업에서는 인적자원의 의존도가 높기 때문에 종사자의 고객 지향적 사고 배양을 위해 종사자 지향적인 내부마케팅의 필요성이 대두되고 있다. 본 연구는 미용서비스 종사자가 지각하는 내부마케팅이 종사자의 고객지향성과 직무성과에 미치는 영향을 알아보고, 내부마케팅을 통해 종사자의 고객지향성을 높임으로써 직무성과에 미치는 영향을 파악하고자 한다. 본 연구의 결과를 살펴보면 미용서비스 산업에서 내부마케팅은 종사자의 고객지향성과 직무성과에 유의한 영향을 미치며, 종사자의 고객지향성은 직무성과에 유의한 영향을 미치는 것으로 나타났다. 또한 내부마케팅이 미용서비스 종사자의 직무성과에 미치는 영향은 고객지향성에 의해서 매개되는 동시에 직접적 영향을 미치는 것으로 나타났다. 미용서비스 종사자의 인구통계학적 특성에 따라 내부마케팅, 고객지향성 직무성과에 차이가 나타났으며, 40대 이상의 연령, 5년 이상의 경력, 헤어분야, 월 소득 200만원 이상, 전문대졸 이하의 학력의 조사 대상자가 대부분의 변수에서 높게 나타났다. 결론적으로 미용서비스 종사자의 내부마케팅은 고객지향성과 직무성과에 유의미한 영향을 미친다는 것을 알 수 있으며, 각 변수들은 서로 상호보완적 관계이므로 내부마케팅을 보다 효과적으로 활용하여 종사자들의 의식과 자긍심을 향상시켜준다면 종사자의 고객지향성은 물론 보다 높은 직무성과를 달성할 수 있을 것으로 사료되며 이러한 연구를 통해 미용서비스 산업의 마케팅 전략에 기초자료를 제공하고자한다.

동서양 플레이어의 게임 서사구조 비교 연구 : Steam 리뷰 및 LDA 토픽 모델링을 중심으로

WANG ZHENXU 가천대학교 글로벌캠퍼스 일반대학원 2026 국내석사

게임 산업의 세계화가 심화되면서 서사(narrative)는 플레이어 경험의 형성과 상업적 성과를 좌우하는 핵심 설계 차원으로 부상하였다. 본 연구는 동서양 문화권의 가치체계와 인지양식 차이가 게임 서사의 수용, 해석, 평가 구조에 어떠한 차이를 생성하는지 실증적으로 규명하는 것을 목적으로 한다. 비교 사례로 서구 판타지 전통의 신화적 세계구성, 파편화된 서사, ‘해석의 여백’으로 특징화되는 Elden Ring과, 중국 고전 『서유기』를 서사 자원으로 삼아 동양적 서사 관습을 AAA 제작 수준으로 구현한 Black Myth: Wukong을 선정하였다. 분석 자료는 Steam에 게시된 중국어 및 영어 사용자 리뷰이며, 코퍼스 정제 및 토큰화, 불용어 처리 등 전처리 후 LDA 토픽 모델링으로 서사 관련 주제를 도출하고, 토픽 분포 기반 클러스터링을 통해 평가 프레임을 유형화하였다. 나아가 핵심 개념의 공출현 네트워크를 구축하고 CONCOR 분석을 적용하여 문화권별 서사 인식의 구조적 패턴을 비교하였다. 분석 결과, 중국어권 플레이어는 세계관, 문화적 배경(WORLD)을 서사 이해의 주요 진입점으로 삼은 뒤 인물, 사건을 해석하는 경향이 두드러진 반면, 영어권 플레이어는 인물의 동기와 전투, 행위 경험(AGENTS/EVENTS)을 중심으로 서사 의미를 구성하는 경향이 우세하였다. 이러한 차이는 동아시아의 총체적(holistic) 인지와 서구의 분석적(analytic) 인지의 대비로 해석될 수 있으며, CONCOR 결과는 해당 차이가 표현상의 언어 차원을 넘어 구조적 수준에서 형성됨을 뒷받침한다. 본 연구는 중국 시장을 겨냥한 글로벌 내러티브 게임의 기획 및 현지화 전략과, 중국 서사의 국제 확산을 위한 서사 설계 도출에 데이터 기반 시사점을 제공한다. As the globalization of the game industry deepens, narrative has emerged as a core design dimension that shapes player experience and influences commercial performance. This thesis empirically examines how differences in value systems and cognitive styles between Eastern and Western cultural contexts generate distinct patterns of reception, interpretation, and evaluation of game narratives. Two contrasting cases are analyzed: Elden Ring, characterized by mythopoeic world-building within Western fantasy traditions, fragmented storytelling, and interpretive “narrative gaps,” and Black Myth: Wukong, which draws on the Chinese classic Journey to the West and realizes Eastern narrative conventions at an AAA production level. The dataset comprises Chinese- and English-language user reviews posted on Steam. After corpus construction and preprocessing (including data cleaning, tokenization, and stopword removal), narrative-related themes were identified using Latent Dirichlet Allocation (LDA). Topic-distribution–based clustering was then employed to typologize players’ evaluative frames. In addition, co-occurrence networks of salient concepts were constructed, and CONCOR analysis was applied to compare the structural patterns of narrative perception across cultural groups. The results reveal clear cross-cultural differences in narrative entry points and sequences of attention: Chinese-speaking players tend to approach narrative understanding primarily through world-building and cultural background (WORLD) and subsequently interpret characters and events, whereas English-speaking players more often construct narrative meaning by foregrounding character motivations and combat/action experiences (AGENTS/EVENTS). These differences are consistent with the contrast between holistic cognition in East Asian cultures and analytic cognition in Western cultures. CONCOR results further indicate that such divergences are structural rather than merely linguistic. This thesis provides data-driven implications for the planning and localization of global narrative games targeting the Chinese market, and for deriving narrative design principles that support the international dissemination of Chinese narratives.

Construction of the glyco-engineered Saccharomyces cerevisiae without mannosylphosphorylation

김영훈 忠南大學校 大學院 2018 국내석사

Saccharomyces cerevisiae is a traditional yeast that is a well-established eukaryotic model system and was the first eukaryotic organism whose genome was sequenced. This yeast has been widely used for the recombinant protein expression (Romanos et al. 1992). Mannsoylphosphorylated glycans are found in fungi including yeast, and the removal of mannosylphosphates from glycans is a prerequisite for yeast glyco-engineering to produce human-compatible glycoproteins. The MNN4 and the MNN6 genes have been known to play important roles in mannosylphosphorylation in the traditional yeast Saccharomyces cerevisiae, but disruption of these genes did not completely remove the mannosylphosphates in N-glycans. This study was performed to find unknown key gene(s) involved in N-glycan mannosylphosphorylation in S. cerevisiae. For this purpose, I constructed the quadruple-disrupted och1Δmnn1Δmnn4Δmnn6Δ strain by disrupting MNN4 and MNN6 genes from the och1Δmnn1Δ strain in which yeast-specific hyper-mannosylated glycan and immunogenic (1,3)-mannose structures were already abolished. However, yeast-specific mannosylphosphorylated N-glycan structures were still observed in the och1Δmnn1Δmnn4Δmnn6Δ strain, which suggests that there is another unknown gene involved in mannosylphosphorylation. From the och1Δmnn1Δmnn4Δmnn6Δ strain, I further disrupted the genes (MNN14, YUR1, KTR2, KTR4, KTR5, or KTR7) having homology with MNN4 or MNN6 genes. Analyses of N-glycans obtained from cell wall mannoproteins of six quintuple-disrupted strains showed that mannosylphosphorylated glycan structure was completely abolished only in the och1Δmnn1Δmnn4Δmnn6Δmnn14Δ strain, indicating that MNN14 gene, a MNN4 paralog with unknown function, is essential for mannosylphosphorylation. Moreover, it was found that double disruption of MNN4 and MNN14 genes was enough to eliminate N-glycan mannosylphosphorylation. Further, I also showed that either MNN4 or MNN14 gene expression restored mannosylphosphorylation in the quadruple-disrupted och1Δmnn1Δmnn4Δmnn14Δ strain, which supports that MNN4 and MNN14 can play a redundant role for mannosylphosphorylation. My results suggest that the och1Δmnn1Δmnn4Δmnn14Δ strain, in which all yeast-specific N-glycan structures including mannosylphosphorylation were abolished, may have a promise as an useful platform for glyco-engineering to produce therapeutic glycoproteins with human-compatible N-glycans. 출아 효모인 Saccharomyces cerevisiae는 전통 효모로서 분자 유전 기술을 다루기 쉬운 진핵 세포 모델이며, 진핵 생물로는 처음으로 전체 염색체 서열이 밝혀지고, 생리학적 측면에서 많은 연구들이 현재까지 이루어 지고 있다. 또한, 목적 단백질을 생산 하기 위한 단백질 발현 효모로써 가장 널리 사용되고 있다.(Romanos et al.1992) 만노오스 인산화 당사슬은 효모를 포함한 균류에서만 발견되며, 당사슬로부터 만노오스 인산화를 제거하는 것은 효모의 당사슬 엔지니어링이 인간과 친화적인 당 단백질을 생산하기 위한 전제조건이다. MNN4와 MNN6 유전자는 전통적인 효모 Saccharomyces cerevisiae에서 만노오스인산화에 필요 하지만 이 유전자를 파괴해도 N-당사슬에서 만노오스 인산화가 완전히 제거되지는 않습니다. 이 연구는 S. cerevisiae에서 N-당사슬 만노오스 인산화에 관여하는 알려지지 않은 주요 유전자를 찾기 위해 수행되었다. 이를 위해 효모 특이적 만노오스화 당사슬과 면역원성 α(1,3)-만노오스 구조가 이미 파쇄된 och1Δmnn1Δ 균주에서 MNN4와 MNN6 유전자를 파괴시킴으로써 4 중 파쇄 och1Δmnn1Δmnn4Δmnn6Δ 균주를 구축 하였다. 그러나 och1Δmnn1Δmnn4Δmnn6Δ 균주에서는 효모특이성 만노오스 인산화된 N-당사슬 구조가 여전히 관찰되었으며 만노오스 인산화와 관련된 또 다른 유전자가 있음을 시사한다. och1Δmnn1Δmnn4Δmnn6Δ 균주로부터, 우리는 MNN4 또는 MNN6 유전자와 상동성을 갖는 유전자 (MNN14, YUR1, KTR2, KTR4, KTR5 또는 KTR7)를 추가로 파괴시켰다.6개의 유전자를 결손한 균주의 세포벽 만노오스 단백질로부터 얻어진 N-당사슬의 분석은 만노오스 인산화 당사슬 구조가 모두 제거된 och1Δmnn1Δmnn4Δmnn6Δmnn14Δ 균주에서만 나타냈다. 세포벽 만노오스 단백질과 돌연변이체에서 생산된 분비 재조합 단백질의 N-당사슬 프로파일 분석은 MNN14 유전자가 기능이 알려지지 않은 MNN4 유전자가 N-당사슬 만노오스 인산화에 필수적이라는 것을 보여 주었다. MNN4와 MNN14 유전자의 이중 파쇄는 N-당사슬 만노오스 인산화를 파쇄시키기에 충분했다. 하나의 유전자(MNN4 또는 MNN14)의 보완은 MNN4 및 MNN14가 하나의 유전자의 결손에 여분의 역할을 할 수 있음을 지지하는 och1Δmnn1Δmnn4Δmnn14Δ 균주에서 만노오스 인산화를 회복시켰다. 이러한 결과는 만노오스 인산화를 포함한 모든 효모 특이적인 N-당사슬 구조가 파쇄된 S. cerevisiae och1Δmnn1Δmnn4Δmnn14Δ 균주가 인간형 N-당사슬을 제작하여, 치료용 당 단백질을 생산하기위한 glyco-engineering을위한 유용한 플랫폼으로 기대할 수 있음을 시사한다.

Saccharomyces cerevisiae에서 단백질 분비경로 조작을 통한 IGF-1 생산

이형규 忠南大學校 大學院 2018 국내석사

IGF-1은 성장 호르몬 (GH)의 자극에 의해 간에서 생성되며, 인슐린과 구조적으로 매우 유사하다. IGF-1은 세포 성장을 유도하기 때문에, 상처 치유나 신장 장애와 같은 질환을 치료할 때 이용되기도 한다. 본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae를 이용하여 rhIGF1을 생산하고자 했다. 기존에 효모에서 생산된 rhIGF1이 분자 간 이황화 결합으로 인해 불활성 이량체(dimer) 또는 다량체(multimer)로 분비된다는 것이 알려졌다. 따라서, 분비되는 rhIGF1의 안정도를 증가시키고, 보다 많은 양을 얻기 위해 rhIGF1을 인간 혈청 알부민 (Human Serum Albumin, HSA)과 융합하였다. 다음으로, 배지 조건 (YPD + 2% galactose), 초기 접종 양 (OD=0.4), 그리고 feeding 조건 (YPD+2% galactose)을 최적화 하여 분비되는 rhIGF1의 양을 전보다 대략 10.8배 증가시켰다. 그리고 기존에 재조합 단백질의 분비 효율을 증가시킨다고 알려진 HSA의 truncated form과 GAS1 결손을 통해 rhIGF1의 분비를 더 증가시키고자 했다. HSA의 truncated form과 융합된 rhIGF1의 분비는 감소한 반면, GAS1이 결손된 돌연변이 균주는 야생형 균주보다 2.4배 증가했다. 하지만, 세포 내에는 여전히 많은 양의 rhIGF-1이 HSA과 융합된 형태로 관찰되었다. 이를 개선하고자 HSA와 rhIGF1을 연결하는 부위를 잘라주는 효소인 Kex2를 과발현시켰으나 분비되는 단량체의 rhIGF1의 양이 감소했다. 한편, HSA와 융합된 일부 재조합 단백질이 소포체-골지체를 거치지 않고, 소포체-bud tip을 통해 분비된다는 것이 알려진 바 있다. 이를 개선하고자 Kex2의 C-terminal 부위에 HDEL 서열 (ER targeting sequence)을 표지하였다. 그 결과, 융합된 형태로 발현되는 rhIGF1의 분비는 감소했고, 단량체 형태의 rhIGF1의 분비가 전보다 1.4배 증가했다. 결론적으로, 본 연구를 통해 단량체 형태로 분비되는 rhIGF-1의 양을 대략 0.3mg/L에서 12mg/L까지 증가시켰다.

Mitochondrial segregation in neural stem cell

황희곤 忠南大學校 大學院 2019 국내석사

Adult neurogenesis plays an important role in brain function, brain homeostasis, and brain repair. Although adult NSCs produce neurons through self-renewal and differentiation during the lifetime, it has been recently reported that adult NSCs lose their stem cell characteristics with aging, and the pool of NSCs and adult neurogenesis decrease in rodent brain. However, how the NSCs lose their stemness with aging is unknown. Interestingly, in an immortalized human mammary epithelial stem-like cell line, old mitochondria are asymmetrically apportioned between two daughter cells during mitosis, and daughter cell with fewer old mitochondria maintains stemness. In this study, I investigated whether aged mitochondria are asymmetrically segregated during mitosis of embryonic mouse NSCs and whether this phenomenon is associated with NSC aging, using the tetracycline-inducible mitochondria-targeted GFP (mito-GFP). It was found that old mitochondria were not asymmetrically segregated during mitosis of embryonic NSCs under the self-renewal and differentiation conditions. In addition, expression of the reduction-oxidation sensitive GFP (roGFP), which detects the mitochondrial redox state, did not show any evidence for the functional asymmetry of mitochondria during mitosis. Moreover, Vimentin, which is known to be asymmetrically segregated with damaged proteins, was not asymmetrically segregated during mitosis of embryonic NSCs. Collectively, this study suggests that embryonic mouse NSCs may not asymmetrically segregate aging factors, although excluded is a possibility that embryonic mouse NSCs are not old enough to have aged or nonfunctional components. 성체 신경 발생 (adult neurogenesis)은 뇌 기능, 뇌의 항상성 및 뇌 수리에 중요한 역할을 한다. 성체 신경줄기세포 (adult neural stem cell)는 평생 동안 자기 갱신 (self-renewal)과 분화 (differentiation)를 통해 신경 세포를 생산하지만, 설치류 뇌에서 성체 신경줄기세포 (adult neural stem cell)가 노화로 인해 줄기 세포 특성 (stemness)을 잃고 신경줄기세포의 풀 (pool)과 신경 발생에 대한 능력이 감소된다는 것이 최근에 보고되었다. 그러나 어떻게 노화로 인해 성체 신경줄기세포가 줄기 세포 특성을 잃어버리는지는 알려져 있지않다. 흥미롭게도, 불후의 인간 유방 상피 줄기 유사 세포 주 (immortalized human mammary epithelial stem-like cell line)에서, 오래된 미토콘드리아는 유사 분열 동안 2 개의 딸 세포들 사이에서 비대칭 적으로 분배되고, 오래된 미토콘드리아를 적게 가지는 딸 세포는 줄기 세포 특성을 유지한다. 이 연구에서, 나는 테트라사이클린 – 유도성 (tetracycline-inducible) 미토콘드리아 표적화된 GFP (mito-GFP)를 사용하여 노화된 미토콘드리아가 배아 마우스 신경줄기세포 (mouse embryonic neural stem cell)의 유사 분열 동안에 비대칭적으로 분리되는지 여부와 이 현상이 신경줄기세포의 노화와 관련이 있는지를 조사하였다. 오래된 미토콘드리아는 자가 재생 (self-renewal) 및 분화 (differentiation) 조건 하에서 배아 신경줄기세포의 유사 분열 동안에 비대칭적으로 분리되지 않는다는 것을 밝혔다. 또한 미토콘드리아의 산화 환원 상태를 검출하는 환원-산화 민감성 GFP (roGFP)의 발현은 유사 분열 동안 미토콘드리아의 기능적 비대칭에 대한 어떠한 증거도 나타내지 않았다. 또한 손상된 단백질과 함께 비대칭적으로 분리된다고 알려진 비멘틴 (vimentin)은 배아 신경줄기세포의 유사 분열 과정에서 비대칭으로 분리되지 않았다. 종합적으로, 이 연구는 배아 신경줄기세포가 노화 인자를 비대칭적으로 분리하지 않을 수 있음을 시사한다. 그러나 배아 신경줄기세포가 노화 되거나 기능적이지 않은 성분을 가질 만큼 충분히 노화 되지 않았을 가능성이 있다.

Brefeldin A-inhibited Guanine Exchange Factor 2 regulates dendrite development by controlling Golgi polarization via RhoA/mDia1 signaling cascade in hippocampal neurons

홍은혜 忠南大學校 大學院 2018 국내박사

Proper dendrite development is essential for the establishment of neural circuitry, and Rho GTPases play key roles in regulating dendrite development in neuronal cells. To find novel Rho GTPase regulatory proteins involved in dendrite development, we screened proteins binding to active Rho GTPases from mouse brain lysates. As a result, Brefeldin A-inhibited guanine exchange factor 2, BIG2, was identified as a candidate. BIG2 was highly expressed during early developmental stage and knockdown of the Arfgef2 gene, which encodes BIG2, significantly reduced total dendrite length and the number of dendritic branches. Expression of the constitutively active ADP-ribosylation factor 1, ARF1Q71L, rescued the defective dendrite morphogenesis of Arfgef2-knockdowned neurons, indicating that BIG2 controls dendrite development by activating ARF1. It was also found that BIG2 co-localizes with the Golgi apparatus and is required for Golgi deployment into a major dendrite in cultured hippocampal neurons. Simultaneous overexpression of BIG2 and ARF1 activated RhoA, and treatment of a RhoA activator, LPA, in neurons lacking BIG2 increased the number of cells with dendritic Golgi, suggesting that BIG2 and ARF1 activate RhoA to promote dendritic Golgi polarization. And, mDia1 was identified as a downstream effector of BIG2/ARF1/RhoA axis, mediating Golgi polarization and dendritic morphogenesis. Furthermore, in utero electroporation of Arfgef2 shRNA into mouse embryonic brain proved the in vivo role of BIG2 for Golgi deployment into the apical dendrite. Taken together, this study suggests that BIG2/ARF1/RhoA/mDia1 signaling axis regulates dendritic Golgi polarization and dendrite development in hippocampal neurons. 신경세포의 구조는 세포 외부의 환경 및 신호들에 의해 역동적으로 변화하며, 이는 신경세포의 기능적 변화로 이어진다. 신경세포의 비정상적인 구조 변화는 인식 장애, 학습장애, 다운 증후군, 자폐증, 정신분열증과 같은 뇌질환의 원인이 된다. Rho GTPase는 세포의 구조를 조절하는 중요한 조절자로 알려져 있으며, 세포 외부의 다양한 신호를 받아들이고 합쳐 액틴을 조절하는 네트워크를 형성하고 있다. 하지만 세포 내 위치와 외부 환경에 따라 세밀하게 조절되어야 하는 Rho GTPase의 조절자에 대한 연구는 충분히 이루어져 있지 않다. 따라서 신경세포의 구조변화를 유발하는 Rho GTPase의 새로운 표적단백질을 발굴하고자 하였고, 본 연구를 통해 BIG2를 새롭게 발굴하였다. BIG2는 뇌 발달 초기에 발현되며, 이를 억제 시켰을 때는 신경세포 수상돌기의 가지와 길이가 줄어든다는 것을 알 수 있었다. BIG2 발현 억제로 인해 수상돌기에 생긴 문제는 활성화된 ARF1의 발현을 유도했을 때 정상적인 형태로 회복되었다. 또한, BIG2는 골지체에 위치하고 있으며, 수상돌기로 뻗는 골지체의 형성을 유도하였다. BIG2와 ARF1은 함께 RhoA의 활성을 촉진시키며, RhoA의 활성화를 유도하는 LPA를 처리하면 BIG2의 발현 억제로 인해 골지체에 생겼던 형태학적 결함이 회복된다는 것을 알 수 있었다. RhoA의 하위단계 조절인자인 mDia1은 BIG2/ARF1/RhoA 과 함께 신경세포의 수상돌기 형태와 골지체의 극성 생장에 관여한다는 것을 알 수 있었다. 더 나아가, 전기 충격을 이용한 마우스의 자궁 내 유전자 삽입 기술로 BIG2의 발현을 마우스 배아의 뇌에서 억제시키면 골지체의 극성 생장이 저해된다는 것을 알 수 있었다. 본 연구를 통해 BIG2/ARF1/RhoA/mDia1 신호전달 체계는 수상돌기와 수상돌기 골지체의 형성을 조절한다는 것을 밝혔다.

Isolation of Whitening Effective Metabolites from Pachyrhizus erosus Seeds Based on Tyrosinase Inhibition and Antipigmentation Activity

손윤곤 경상국립대학교 대학원 2025 국내석사

얌빈은 멕시코감자, 히카마라고도 불리는 콩과의 덩굴성 식물로 주로 뿌리(괴근)부위를 식용으로 사용하는 아열대식물이다. 얌빈은 예로부터 당뇨, 비만, 고혈압 등 성인병 예방에 효능이 있다고 알려져 있지만 뿌리에는 수분, 단백질, 지질이 80% 이상을 차지하고 있어 식의약소재로 개발에 한계가 있다. 따라서 본 연구에서는 새로운 식의약후보소재로서 얌빈 씨앗에 분포하는 활성대사체를 분리 및 분석하고 이들의 타이로시네이즈 및 색소침착억제 기반 미백 활성을 확인하였다. 얌빈씨앗 추출물로부터 종자 유지를 제거하고 확보한 목표 분획층을 silica-gel, octadecyl silica-gel, sephadex LH-20 등의 크로마토그래피 레진을 이용하여 총 9종의 물질을 순수 분리하였으며, NMR, UV, HRESIMS 등 분광학적 자료를 활용한 화학구조 규명을 통해 12α-hydroxyerosone (1), 12α-hydroxypachyrrhizone (2), 12α-hydroxydolineone (3), rotenolone (4), dehydroneotenone (5), dolineone (6), pachyrrhizin (7), rotenone (8), 그리고 neotenone (9) 임을 확인하였다(Figure 1). 또한, HPLC 및 LC-Q-TOF/MS 분석을 기반으로 얌빈 추출물에 분포하는 유용대사체의 상대적 분포를 확인하였다. 분리한 9종의 유용대사체 (1-9) 중 타이로시네이즈에 대해 저해 활성을나타낸 물질들은 모두 농도의존적으로 효소 저해 활성을 나타내는 가역적 저해제였다. 이 중 화합물 2 (IC50 = 16.1 μM), 5 (IC50 = 15.0 μM), 및 9 (IC50 = 11.1 μM)가 양성대조구인 코직산 (IC50 = 16.2 μM)과 비슷하거나 더 우수한 저해활성을 나타냈다. 특히, 로테노이드계 물질에 속하는 화합물 2는 다른 로테노이드계 물질과 비교해 9번 탄소에 메톡시기가 치환되어 있는 구조적 특징을 가졌다. 한편, 로테노이드계가 아닌 물질 중에서는 화합물 5와 9가 이소플라보노이드 골격의 구조적 특징을 가지고 있음을 확인하였다. Enzyme kinetic을 통해 로테노이드 골격의 화합물 2는 monophenolase 및 diphenolase에 대해 경쟁적 저해제이고, 이소플라보노이드 골격의 화합물 5와 9는 비경쟁적 저해제임을 확인하였다. 타이로시네이즈 저해제 중 활성이 가장 우수한 화합물 9에 대한 추가 효소저해 활성 평가에서 농도가 증가함에 따라 DOPA의 형성이 지연 (Lag time)됨을 확인하였으며 steady-state rate은 감소함을 규명하였다. 또한, HPLC 분석 기반의 N-acetyl-L-tyrosine을 기질로 하는 타이로시네이즈 저해활성 검증 실험을 통해 생성물 (DOPA) 형성이 현저하게 저해됨을 재확인하였다. 색소침착억제 기반 미백활성 연구는 가장 우수한 타이로시네이즈 저해제인 화합물 9의 melanoma cell에서 α-MSH 처리에 의해 생성된 멜라닌 색소 저해정도를 통해 확인하였다. Melanoma cell에 대해 화합물 9는 31.25 μM 이하 농도에서 세포 생존율이 90% 이상이었으며 무처리구에 비해 화합물 9를 20 μM 이상의 농도로 처리했을 때 멜라닌 생성량이 유의미하게 감소함을 확인하였다. 따라서 얌빈 씨앗에서 주요 9개 물질을 순수분리하고 구조분석을 성공적으로 완료하였다. 타이로시네이즈 및 멜라닌 생성 억제 기반 연구를 통해 분리한 물질 중 화합물 9 (neotenone)가 가장 우수한 미백 활성을 나타냈다. 본 연구를 통해 신규 식의약 후보소재로서 얌빈 씨앗의 잠재력 및 활용가능성을 확인하였다.