포유동물세포에서 녹용약침이 세포독성 및 염색체 이상에 미치는 영향에 관한 연구

김나영,정재훈,정혜광,김시욱,윤성명,신용진,이정섭 조선대학교 부설생명과학 연구소 1999 생명과학 연구 Vol.7 No.-

생쥐나 인간암 세포주에서 녹용 약침액이 세포군 형성능, 세포독성, 그리고 염색체 이상에 미치는 영향을 분석하였다. 1-10 ㎍/㎖ 농도 범위의 녹용약침은 생쥐의 섬유아세포인 NIH3T3세포, 인간의 자궁암세포인 HeLa 및 직장암 세포인 SW480세포에서 세포군 형성에 평균 4.75% 감소효과를 보였으나 세포독성은 유발하지 않았다. 이들 세포에 10 ㎍/㎖의 녹용약침과 0.5 ㎍/㎖의 mitomycin-C(MMC)를 함께 처리한 경우, 대조군에 비해 평균 25.66%의 약침의 세포군이 형성되었다. 5 ㎍/㎖과 10 ㎍/㎖의 녹용약침은 염색체 이상을 전혀 야기 시키지 않았으나 0.5 ㎍/㎖의 MMC는 세포당 4.1개의 염색체 이상을 유발하였다. 10 ㎍/㎖의 녹용약침은 0.5 ㎍/㎖의 MMC에 의해 유발된 염색체 이상을 약간 감소시켰다. 이와 같은 결과는 녹용약침이 DNA 상해요인에 의한 세포사를 지연시키고 세포 생존율을 증가시킬 수 있음을 의미한다. The Nog-yong aqua-acupuncture solution (N) prepared from deer antler was tested in mouse (NIH3T3) and human (HeLa and SW480) cell lines to examine the effects on colony forming ability, cytotoxicity, and chromosome aberration. The colony forming ability of the cell lines was not affected by 1 to 10 ㎍/㎖ range of N solution. However, it seemed that the 10 ㎍/㎖ of N solution increased the colony forming ability to an average 25.66% in the cells treated with 0.5 ㎍/㎖ of MMC. In addition, the N exerted slightly the protective effect against the chromosome aberration induced by a DNA damaging agent, mitomycin-C. These results suggest that N solution can retard the cell death and enhance the cell survival from DNA damage.

MOLECULAR CLONING AND CHARACTERIZATION OF METHANOL DEHYDROGENASE GENE FROM METHYLOBACILLUS SP. SK1

Kang, Jin Kwon,Jeong, Jae Hoon,Kim, Na Young,Kim, Si Wouk,Yoon, Seong Myeong,Jeong, Hye Gwang,Lee, Jung Sup 조선대학교 부설생명과학 연구소 1999 생명과학 연구 Vol.7 No.-

This study was performed for identification and characterization of methanol dehydrogenase (mdh^(+)) gene from Methylobacillus sp. SK1. To use in immunoscreening of mdh^(+) gene, polyclonal anti-MDH antibodies were prepared by subcutaneous injection of a white rabbit with Methylobacillus MDH protein. The MDH antibody recognized specifically 60 kDa MDH protein from cell extract, as determined by immunoblot analysis. To clone the gene encoding the MDH protein, a genomic expression library of Methylobacillus sp. SK1 was constructed in λgt11 vector. From this library, an mdh^(+) gene was isolated by immunological screening method using anti-MDH antibody as a probe. From 10^(7) plaques screened, 9 putative clones were finally isolated. To examine whether these clones contain homologous inserts, cross-hybridization analysis was performed using 3.2 kb C-1 insert DNA as a probe. The DNA inserts of all clones, except clones C6 and C8, hybridized with the probe, indicating that the clones contained the same kinds of DNA inserts. In order to identify the transcript of mdh^(+) gene, Northern hybridization analysis was performed using the 3.2 kb insert DNA of clone C1 as a probe. The RNA transcript sizes of the cloned gene were 3.2 and 1.5 kb.

Factors influencing cell division in protoplasts culture of cucumber(Cucumis sativus L.)

Seo, seung-hee,Park, Hyeon-Young 조선대학교 부설생명과학 연구소 1998 생명과학 연구 Vol.6 No.-

Methods were developed for an efficient protoplast culture of cucumber in this experiment. Protoplasts from mesophyll tissue were digested within 5h using 1.2% cellulase and 0.6% macerozyme R 10. Calcium chloride (20 mM) and casein hydrolysate (200 mg/L) were influenced to be important factors for the successful protoplast culture. A plating density of more than 1 x 10^(5) protoplast/ml was required for sustaining of division. First division occurred 4 days after culture, and then second-third division occurred within 5~6 days. Microcalli formation usually appeared on 14~20 days after culture. Microcalli were transferred onto solid media for futher growth and plant regeneration. Minicalli developed bud primordia within 2 weeks after transferring onto shoot induction medium.

태안화력발전소 주변 해역의 동물성 플랑크톤 군집의 특성

윤성명,정석훈,백경환,김시욱,정혜광,이정섭 조선대학교 부설생명과학 연구소 1999 생명과학 연구 Vol.7 No.-

온배수 유출의 영향을 받고 있는 태안화력발전소 주변 해역의 동물플랑크톤 군집의 특성을 파악하기 위한 조사가 1998년에 수행되었다. 현지조사는 발전소 주변 해역의 8개 정점에서 계절별로 진행되었다. 요각류는 동물성플랑크톤 군집에서 출현종수나 생물량 모두에서 가장 우점적인 무리인 것으로 나타났다. 겨울철에는 발전소의 온배수가 동물성플랑효톤 군집의 생물량 증가에 긍정적인 기여를 하고 있는 것으로 나타났다. 겨울철을 제외한 다른 계절에는 내만성 지역의 정점들에서 상대적으로 많은 생물량을 보였다. 출현종수와 다양도지수에서는 계절에 관계없이 조사정점들 사이에 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. 이와 같은 결과는 해수온도가 낮은 겨울철을 제외하면 온배수 유출보다는 내만성과 관련된 다른 환경 요인들이 조사 해역 동물성플랑크톤의 분포와 생물량에 더 큰 영향을 미치고 있음을 의미한다. Ecological study on the zooplankton community in the adjacent sea to the Taean Thermoelectric Power Plant was performed over eight study stations through four seasons in 1998. Copepods was the dominant group within the zooplankton community both in the number of species and the biomass. Heating overflow of the power plant effected positively on the increase of zooplankton biomass in winter. Relatively large biomass appeared at the study stations near the bay. Zooplankton communities at eight different study stations showed no remarkable differences each other both in the number of species and/or the diversity index through the year. These results suggest that the zooplankton communities in the study area are more strongly affected by the environmental factors related to the characteristics of the bay such as the tidal current and the geographical features rather than by the heating overflow of the power plant.

시차분해 형광분광법을 이용한 Eu^(3+)와 2-나프토산 유도체 복합체에 관한 연구

이정희,유정아 조선대학교 부설생명과학 연구소 1999 생명과학 연구 Vol.7 No.-

정류상태 스펙트럼과 시차분해 형광스펙트럼을 측정하여 Eu^(3+)와 2-나프토산 유도체 복합체의 에너지 전이에 대하여 연구하였다. 다양한 들뜸 파장에서 관찰한 시차분해 형광스펙트럼은 들뜬 2-naphthoate (2-NA)나 2-naphthyacetate (2-NAAc)의 단일 항은 계간 전이에 의하여 에너지를 삼중항으로 전달하고 전달된 에너지는 삼중항의 진동 이완(일반적으로 수용액에서 ~10^(12)s^(-1))보다 빠른 속도로 Eu^(3+)의 ^(5)D_(3)준위에 전달된다. 에너지를 받은 Eu^(3+)의 ^(5)D_(3)는 ^(5)D_(3) → ^(5)D_(1), ^(5)D_(0)로 비복사 전이를 한 후 ^(5)D_(1) → ^(7)F_(2)와 ^(5)D_(0) → ^(7)F_(1)로 전이하며 형광을 방출한다. 동시에 ^(5)D_(1)의 에너지 일부는 ^(5)D_(1) → ^(5)D_(0)로 비복사 전이를 한 후 ^(5)D_(0) → ^(7)F_(1)로 전이하며 형광을 방출한다. Nanosecond time-resolved emission measurements have been conducted on Eu^(3+) with 2-naphthoate (2-NA) and 2-naphthyacetate (2-NAAc). The excitation was carried out in the ligand-centered or the metal-centered band in uv-visible region and time resolved emission spectra of Eu^(3+) in the spectral region 570 nm-660 nm were obtained. The obtained results imply that the excited singlet state of 2-NA and 2-NAAc populates triplet state via inter system crossing, and followed by energy migration to^(5)D_(3) level of Eu^(3+) with a rate 10^(12)s^(-1). The ^(5)D_(3) level deexcited to the luminescent ^(5)D_(1) and ^(5)D_(0) states.

일차 간세포배양을 이용한 녹용약침의 간세포독성에 대한 연구

최철용,김형근,김지영,조미화,이정섭,윤성명,신용진,정혜광 조선대학교 부설생명과학 연구소 1999 생명과학 연구 Vol.7 No.-

흰쥐를 이용한 간세포의 일차 배양법은 배양 간세포가 간 특이적인 기능을 그대로 유지하고 있기 때문에 간 독성을 연구하는 데 많이 이용되는 방법이다. 녹용약침이 간세포에 미치는 영향을 조사하기 위하여 녹용약침을 일차 간세포 배양액에 처리 후 세포배양액 내의 LDH 활성을 측정한 결과 간세포에 독성을 나타내지 않았다. 그리고 생체막 수송에 대한 녹용약침의 영향을 강심배당체 ouabain을 이용하여 측정한 결과 ouabain의 생체막 수송에 영향이 없었다. 배양한 간세포의 핵산과 아미노산 합성능력에 대한 녹용약침의 영향은 10 ㎍/㎖ 녹용약침을 처리하였을 경우 정상군보다 DNA 합성이 약 11% 정도 감소하였으며, 단백질의 합성은 정상군과 비교하였을 때 14%의 단백질 합성이 저해되었으나, 유의성은 관찰되지 않았다. 본 실험결과 녹용 약침제제는 간세포 기능과 간세포 독성에는 영향이 없음을 알 수 있었다. Primary culture of adult rat hepatocytes has been considered as a ideal model for toxicological studies because cultured hepatocytes maintained many liver-specific functions. In this research, we investigated the effects of antler aqua-aqupuncture (0.5-10 ㎍/㎖) on cytotoxicities in primary culture of adult rat hepatocytes using LDH release, membrane transport of ouabain, and macromolecular synthesis, such as DNA and protein. In all parameters used in the present studies, antler aqua-aqupuncture did not significantly affected in these normal functional characteristics.

Recombinant phage antibody system에서 ScFvB9 및 그 변이주의 유도 및 발현

양은주,장해춘 조선대학교 부설생명과학 연구소 1998 생명과학 연구 Vol.6 No.-

The recombinant phage antibody system(RPAS) is designed to clone antibody genes and express and detect functional antibodies. Recombinant single-chain fragment(ScFv) of the murine monoclonal antibody B9(MabB9) were generated by using a polymerase chain reaction (PCR) from the Fab fragment of MabB9. The recombinant ScFv fragment(variable heavy-linker-variable light) was cloned into the pCANTAB 5E phagemid vector and transformed into E. coli TG1 and E. coli HB2151, respectively. Each phage displayed ScFv and soluble andtibody protein were expressed and detected as functional antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) and Western blotting analysis.

EXPRESSION OF FLAVONOID 3'AND 3'5'HYDROXYLASE GENES IN POTATOES (SOLANUM TUBEROSUM CV. JOPUNG)

Park, Yoonkyung,Cheong, Hyeonsook 조선대학교 부설생명과학 연구소 1999 생명과학 연구 Vol.7 No.-

The 3' (F3'OH) and 3'5' hydroxylase (F3'5'OH) genes play a major role in the synthesis of flavonoids. The F3'OH and F3'5'OH genes were introduced into potato genome by Agrobacterium-mediated transformation. Presence of the petunia F3'OH and F3'5'OH genes in these transgenic plants were confirmed by Southern analyses and 2 kb bands were detected in all of the putative transgenic potato plants. To investigate whether mRNA are expressed in transgenic potato plants F3'OH and F3'5'OH genes, Northern blot analyses were carried out using total RNA obtained from the transgenic plants. The hybridized bands were consistent with the expected size of F3'5'OH mRNA. These results suggested the expression of the F3'OH and F3'5'OH genes from the transgenic potatoes.

조간대 저서무척추동물 군집에 미치는 태안화력발전소 온배수의 영향

윤성명,정석훈,백경환,김시욱,정혜광,이정섭 조선대학교 부설생명과학 연구소 1999 생명과학 연구 Vol.7 No.-

태안화력발전소의 온배수 유출이 주변 해역 조간대의 저서무척추동물 군집에 미치는 영향을 파악하기 위한 조사가 1998년에 수행되었다. 현지조사는 발전소 주변 조간대의 배수구 정점과 대조정점인 취수구 정점의 2곳에서 계절별로 진행되었다. 출현종수 및 출현종 구성과 생물량 분포, 다양도지수의 측면에서 분석한 결과 배수구 정점의 조간대 저서무척추 동물 군집은 대조정점의 군집과 뚜렷한 차이를 나타내지 않았다. 생물량의 면에서는 배수구 정점의 군집 생물량이 대체적으로 대조정점 군집의 생물량보다 많은 결과를 보였는데, 이러한 것은 특히 겨울철 조사에서 뚜렷하였다. 본 연구의 결과는 조사지역 발전소의 온배수가 조간대 저서무척추동물 군집에 미치는 부정적 영향은 거의 없으며, 오히려 해수온도를 높여 군집의 생물량 증가에 기여하고 있음을 시사하고 있다. The effects of heating overflow produced from the Taean Thermoelectric Power Plant on the intertidal invertebrate community in the adjacent sea to were studied in 1998. The invertebrate community of the station near the waterway showed no remarkable differences compared with that of control station in the respect of the number of species, species composition, biomass distribution, and diversity index. Heating overflow of the power plant had a tendency to effect positively on the increase of intertidal invertebrate biomass, especially in winter season. These results suggest that the heating overflow of the power plant nearly does not effect negatively on the intertidal invertebrate community in the study area. On the contrary, it may effect positively on the invertebrate community in increasing the biomass by promoting the growth of organisms.

Transformation of Arabidipsis thaliana using root explants

Park, Yoonkyung,Cheong, Hyeonsook 조선대학교 부설생명과학 연구소 1998 생명과학 연구 Vol.6 No.-

The IL-2 gene is under the control of 35S CaMV promoter which makes its following gene to be expressed in whole plant. We constructed pSSK-1 carrying interleukin-2 gene to examine the IL-2 productivity and effects in Arabidopsis thaliana, and transferred into A. tumefaciens for the sake of the transformation of Arabidopsis ecotype C_(24). We used a simple and highly reproducible tissue-culture procedure to transform Arabidopsis with Agrobacterium tumefaciens as the gene delivery system and the roots of axenically grown plants as the explant source. Root segments were placed onto solidfied CIM (0.5 mg/L 2,4-D, 0.05 mg/L kinetin) medium in a petridish for 2 days, and transferred to solidfied SIM (5 mg/L 2IP, 0.15 mg/L IAA, 50mg/L kanamycin, 750 mg/L vancomycin) medium. Shoots were intermittently appeared from the green calli over the next several weeks.