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          Flow Cytometric Characterization of Lymphocyte Subpopulations in Mice Infected with Clonorchis sinensis

          Yong-Suk Ryang(양용석), In-Soon Shin(신인순), Yung-Kyum Ahn(안영겸) 대한의생명과학회 1996 Biomedical Science Letters Vol.2 No.1

          최근 세포 표면의 다양한 항원들이 발견되고 T세포 아형에 대한 정량적 측정이 가능하게 됨에 따라 세포성 면역기전의 규명과 이해에 획기적인 진전을 보이고 있다. T세포 아형의 phenotype은 실험동물의 모델(model)이나 종(species)에 따라서 다양하며 차이가 나는 것으로 알려져 있다. 우리나라의 경우 아직도 80만명 이상의 국민이 간흡충에 감염되어 있을 것으로 추정되는 문제는 기생충이며 감염상태가 만성적일 때에는 간경화나 간암으로 까지 진행되는 흡충으로서 이에 대한 대책이 요구되고 있다. 그동안 간흡충의 면역에 대한 연구는 체액성 면역에 대한 연구는 많은 규명과 진전이 있어왔으나 세포성 면역에 대한 기전이나 특성에 대한 연구는 미미한 상태이다. 저자들은 이와같은 사정을 감안하여 마우스를 실험 모델로 할 때에 요구되는 참고 자료와 기본 정보를 구하고자 하였다. 즉, 간흡충에 대한 세포 면역학적인 일부의 특성을 알아 보았으며, 특히 비장 림프구 아형에 대한 phenotype의 특성을 알아 본 결과 다음과 같은 성적을 얻었다. 간흡충의 조항원을 면역증강제와 함께 복강 투여한 후 기간 별로 비장 림프구의 아형 특성을 flow cytometry로 측정한 결과, CD2, CD5 그리고 CD8는 투여 초기에는 감소하다가 투여 7주 후에 다시 증가하는 현상을 보였으며, CD4의 경우 투여 초기에는 약간 증가하다가 투여 7주 후에 다시 증가하는 성적을 보였다. A Recent discovery of surface antigens in cells has led to the success of quantitative measurement of T-cell subpopulations, and this has especially opened the way for an epoch-making development in the understanding and classification of cellular immune mechanisms. It is known that phenotypes of T-cell subpopulations exist in many forms according to the variation of species or animal experimental models. In Korea, Clonorchis sinensis still gives rise to public concern as it infects more than eighty million people and threatens the public by causing cirrhosis of the liver, or liver cancer when liver infection becomes prolonged and chronic. Up until now there has been much progress in research and improvement in the classification system of Clonorchis sinensis in the area of humoral immunity, but as for research in the area of cellular immune mechanisms, there is almost none. Knowing all these circumstances, the authors delved for the characterization of lymphocyte subpopulations with mice as Clonorchis sinensis in the area of cellular immunity, and obtained the following results. That is, we injected Clonorchis sinensis antigens mixed in Freund's ajuvant solution intraperitoneally in mice and measured the T-cell subpopulation characterization of spleen lymphocytes with flow cytometry. The results of these measurements showed that CD2, CD5 and CD8 decreased early following injections but then increased again seven weeks after the injections. CD4, however, showed a slight increase shortly after the injection but then a fair increase seven weeks after the injection.

        • KCI등재

          암 환자의 혈장 Transforming Growth Factor-$\beta$1 농도

          전지현,이시은,이수진,박찬후,장정순,하우송,박순태,박병규 대한의생명과학회 1999 Journal of biomedical laboratory sciences Vol.5 No.2

          한국인의 대표적인 성인 고형 종양인 위암, 간암, 유방암과 소아 백혈병 및 2종의 소아 고형 종양 환자로부터 혈장 transforming growth factor-$\beta$1 (TGF-$\beta$1) 농도를 sandwich ELISA 분석법을 이용해 측정함으로써 TGF-$\beta$1을 이 질환들에 대한 새로운 종양표지자 (tumor marker)로 사용할 수 있는지 검토하였다. 토한 연령 및 성별에 따른 혈장 TGF-$\beta$1 농도의 정상치를 조사하였다. 신생아에서 70대까지 혈장 TGF-$\beta$1 농도의 차이는 없었고 남녀간의 차이도 없었다. 위암 환자의 혈장 TGF-$\beta$1 농도는 16.0$\pm$6.8 ng/ml (평균$\pm$표준편차)로 정상 대조군의 TGF-$\beta$1 농도 (8.3$\pm$5.0 ng/ml) 보다 유의하게 높았으나 간암, 유방암 환자의 혈장 TGF-$\beta$1 농도는 대조군과 차이가 없었다. 그리고 위암 환자 16명 ,간암 환자 8명, 유방암 환자 7명 중 각각 7명 (43.7%), 1명 (12.5%), 1명 (14.3%)에서만 혈장 TGF-$\beta$1 농도가 증가되었다. 5명의 소아 백혈병 환자에서는 관해 (remission)여부와 상관없이 혈장TGF-$\beta$1농도가 모두 정상 범위에 있었으나 2명의 소아 고형암 환자에서는 종양 절제 전에는 혈장 TGF-$\beta$1농도가 높았다가 절제 후 정상으로 떨어졌다. 결론적으로 1)정상인의 혈장 TGF-$\beta$1 농도는 연령 및 성별에 따른 차이가 없다는 것을 알 수 있었고, 2)성인 고형암인 위암, 간암, 유방암에서는 낮은 민감도로 인해 TGF-$\beta$1을 진단을 위한 선별 검사로 이용하기에는 부적절한 것으로 판단되었으며, 3)정상 대조군보다 혈장 TGF-$\beta$1 농도가 높았던 위 암 환자와 종양 절제 전후로 혈장 TGF-$\beta$1 농도가 민감하게 변했던 소아 고형암 환자에 대 해서는 향후 표본 수를 늘려 부가적인 연구를 해야 할 것으로 사료된다. To evaluate the usefulness of transforming growth factor-$\beta$1 (TGF-$\beta$1) as a new tumor marker, we determined the plasma TGF-$\beta$1 levels using sandwich ELISA assay in cancer patients. Patients with three most common adult cancers in Korea (stomach, liver and breast cancer) and children's cancers (leukemia and two kinds of solid tumor) were enrolled for the study. Furthermore, 39 individuals were subjected to age and sex-stratified plasma TGF-$\beta$1 analysis. No statistical difference was demonstrated with respect to age or sex. The mean plasma TGF-$\beta$1 level (16.0 ng/ ml) of stomach cancer patients was significantly higher than that (8.3 ng/ml) of controls. However, there was no difference among the mean plasma TGF-$\beta$1 levels of liver, breast cancer patients and controls. Seven of 16 patients (43.7%) with stomach cancer, one of 8 (12.5%) with liver cancer, and one of 7 (14.3%) with breast cancer showed higher TGF-$\beta$1 levels compared to controls. Plasma TGF-$\beta$1 concentrations of five leukemic children remained in the normal range regardless of the remission state. In contrast, initial high TGF-$\beta$1 levels from two children with solid tumors returned to normal range on surgical resection of tumors. From the above results, we could conclude that plasma TGF-$\beta$1 levels of apparently healthy individuals seem to be rather constant irrespective of difference in age or sex, and the plasma TGF-$\beta$1 has the limited value as a screening test for the diagnosis of aforementioned adult cancers because of its low sensitivity. Finally, additional studies need to be pursed for the large number of stomach cancer and pediatric solid tumor patients in order to reach a secure conclusion on the usefulness of plasma TGF-$\beta$1 as a tumor marker in these patients.

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          핵 내에서 분리한 Mitogen-Activated Protein (MAP) Kinase의 Transcription Factor에 대한 인산화

          김윤석(Yoon-Suk Kim), 김소영(So-Young Kim), 김태우(Tae-Ue Kim) 대한의생명과학회 1996 Biomedical Science Letters Vol.2 No.2

          모든 진핵세포에 존재하며 세포의 성장 및 분화에 주로 관계되는 신호전달물질의 하나인 Mitogen-activated protein(MAP) kinase의 mitogen에 의한 핵내 활성화와 기질 인산화에 대해 알아보기 위해 본 실험을 수행하였다. P388 세포를 10% fetal bovine serum이 첨가된 DMEM 배지에 배양한 후, 혈청이 들어있지 않은 배지에서 24시간 더 배양하고 serum 및 PMA를 농도별로 처리하여 세포성장을 위한 최적농도를 확인한 결과 serum은 5-20% 농도에서 세포성장을 촉진시켰고 PMA는 실험한 모든 농도에서 세포성장을 거의 촉진시키지 못하는 경향을 확인하였다. 이어 P388 세포를 serum 및 PMA로 10 분간 활성화하여 파쇄한 후 세포질분획과 핵분획으로 분리하여 각 분획을 10% gel상에서 전기영동 하여 nitrocellulose paper에 옮긴 후 anti-ERK1 antibody를 이용해 확인해본 결과 serum, PMA로 처리된 세포 모두에서 MAP kinase의 핵내 이동이 관찰되었으며 특히 세포질 내에 주로 존재하는 42, 44 Kd의 MAP kinase isoform중 42 Kd의 isoform이 주로 핵내로 이동되는 것이 관찰 되었다. MAP kinase의 기질인산화실험을 위해 serum으로 활성화시킨 세포를 파쇄하여 SP-sephadex C-50, Phenyl superose, Mono Q column의 순서로 chromatography를 시행하여 MAP kinase를 부분분리 하였다. 이와 같이 얻은 MAP kinase를 가지고 면역 T 세포에 존재하는 tyrosine kinase인 p56<SUP>lck</SUP>대의 N-terminal peptide로 구성된 GST-fusion protein에 대한 인산화를 확인하였다. 또한 세포에서 분리한 MAP kinase를 가지고 transcription factor의 하나인 c-Jun protein에 대한 인산화실험을 실시한 결과 MAP kinase에 의해 인산화 됨이 확인되었다. 이상의 결과를 통해 P388 세포는 (1)세포 성장시 외부 신호를 G-protein-coupled receptor/protein kinase C/MAP kinase의 경로보다는 주로 tyrosine kinase receptor protein/Ras/MAP kinase의 경로를 이용하여 핵으로 전달하는 것으로 추측되며 (2) mitogen의 처리로 활성화된 MAP kinase중 주로 42 Kd isoform 핵내로 이동하고, 분리한 MAP kinase가 GST-fusion protein과 transcription factor인 c-Jun을 모두 인산화 시키는 결과로 보아 MAP kinase의 isoform에 따라 표적 compartment가 다르고 결과적으로 표적 기질에 차이가 있을지 모른다고 간접적으로 추론 할 수 있다. The mitogen-activated protein(MAP) kinase signal transduction pathway represents an important mechanism by which mitogen, such as serum and PMA, regulate cell proliferation and differentiation. Target substrates of the MAP kinase are located within several compartments containing plasma membranes and nucleus. We now report that serum addition induces proliferation of the P388 murine leukemia cell, but PMA does not, while both serum and PMA treatment cause translocation of the MAP kinase, mainly p42<SUP>mapk</SUP> isoform, from cytosol into the nucleus, which was monitored by immunoblot analysis using polyclonal anti-ERK1 antibodies. We investigated whether the MAP kinase was capable of phosphorylating c-Jun protein and GST-fusion proteins, the P56<SUP>lck</SUP>N-terminal peptides (1-77 or 1-123 domain) of the T cell tyrosine kinase, using the partially purified MAP kinase by SP-sephadex C-50, phenyl superose and Mono Q column chromatography. We found that the partially purified MAP kinase was able to phosphorylate c-Jun protein and the GST-fusion protein expressed using E.coli DH5α which is transformed with pGEX-3Xb plasmid vector carrying of p56<SUP>lck</SUP> N-terminal peptide-encoding DNA. These results imply that tyrosine kinase receptor/Ras/Raf/MAP kinase pathway is a major mechanism for mitogen-induced cell proliferation in P388 murine leukemia cell and that the various MAP kinase isoforms may have their own target substrates located in distinct subcellular compartments.

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          Characterization of Trichosporonoides madida and Evaluation of Virulence in Laboratory Animals

          Jong-Bae Kim(김종배), Young-Mi Kim(김영미), Sang-Wook Park(박상욱) 대한의생명과학회 1997 Biomedical Science Letters Vol.3 No.2

          Trichosporonoides madida와 같이 자연계에서 새로 분리된 균종을 산업 분야에서 이용하기 위하여 이들 균종의 제반 성상을 명확히 확인하여야 함은 물론 분리균주의 병원성에 관한 연구가 필수적이다. 본 실험에서는 자연계에서 분리된 T. madida 분리균주의 제반 성상을 확인하고 실험동물에 대한 병원성 여부를 체계적으로 조사하여 산업미생물로서의 이용 가능성에 대한 안전성을 검증하였다. 본 실험에 사용한 T. madida N-5-3 분리균주의 생화학적, 형태적인 특성은 전형적인 T. madida 균주의 미생물학적인 특징과 모두 일치하였다. T. madida N-5-3 균주의 실험용 mouse에서의 복강내 투여 치사량 (LD??)은 실험에 사용한 1×10¹에서부터 1×10? 투여 시까지 사망하는 동물이 관찰되지 않아 1×10? 이상인 것으로 확인되었다. 또 1×10?의 시험균주를 실험용 mouse의 복강에 접종한 후 각 시기별로 심장, 폐, 간, 비장 및 신장에서의 시험균주의 증식여뷰를 조사한 결과 간과 비장에서만 접종후 2일까지 1×104.3에서 1×102.87의 시험균주가 분리되었으나 접종 4일째부터는 시험기간 완료일까지 접종 균주가 전혀 관찰되지 않아 실험동물 체내에서 신속히 제거되는 것으로 나타났다. 한편 시험균주 접종에 따른 mouse 내부장기의 조직학적인 변화를 조사한 결과 특징적인 병리학적 소견을 관찰할 수 없었다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 T. madida N-5-3 분리균주는 산업분야에서 이용시 공중보건학적 관점에서 비병원성 균주이며 안전한 균쥬인 것으로 판단된다. One of the most important prerequisites of the industrial microorganism is that it should not be virulent to humans or economically important animals or plants. In this investigation, the microbiological characterization of T. madida N-5-3 strain was performed. And then, the virulence of the test strain in mouse model was examined systematically. The microbiological characteristics of the test strain were found to be fully consistent with those of typical T. madida. The i.p. lethal dose(LD)?? of the test strain was greater than 1×10?, because there was no dead animal with the challenge doses upto the level of 1×10?. When 1×10? yeast cells were challenged to the laboratory mice, T. madida N-5-3 strain was completely cleared from the liver and spleen in 4 days after challenge. And no pathological changes in the histological examination of the internal organs from challenged mice was observed. Above results can provide the predictability of the safety of T. madida N-5-3 strain for the industrial use in the view point of the public health aspect.

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          Production of Polyclonal Antibody against α-Fetoprotein and Polyclonal Antibody-Based Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for a-Fetoprotein

          Michung Yoon(윤미정) 대한의생명과학회 1997 Biomedical Science Letters Vol.3 No.2

          인간 α-fetoprotein (AFP)은 간암, 위암, 생식기종양 및 신경관이상인 환자를 검사하고 진단하는데 유용한 지표로 알려져 있다. 본 연구에서는 사람의 AFP를 분리정제하여 폴리클로날 항체를 생산하고 인간 혈장과 양수내의 AFP를 측정하기 위한 경쟁적 효소면역분석법을 개발하고자 하였다. 친화크로마토그래피법과 SDS-polyacrylamide 전기영동법을 이용하여 양수로부터 AFP를 분리하였다. 정제된 AFP를 토끼에 주사하여 폴리클로날 항체를 생산하였으며, 이중면역확산법과 Western blot 분석법을 사용하여 본 연구실에서 제조된 항체의 항원 특이성이 대단히 높음을 확인하였다. AFP와 항혈청을 이용하여 표준곡선을 얻었으며, 민감도는 5ng/ml이었고, 작용범위는 5~1,000ng/ml이었다. 분석내 CV는 4.5%이었고, 분석간 CV는 8.5%이었다. 따라서 이러한 결과로 보아 본 연구에서 개발된 경쟁적 효소면역분석법이 AFP를 측정하기에 적절하며, 간암 등의 기초연구에도 많은 기여를 할 것으로 생각된다. α-Fetoprotein (AFP) has been a useful marker in screening and/or monitoring patients with hepatocellular carcinoma, gonadal germ cell tumor, gastric carcinoma and neural tube defects. In the present study, it was attempted to produce anti-human AFP polyclonal antibodies and to develop a competitive enzyme-linked immunosorbent assay (EUSA) for the measurement of AFP in human plasma and amniotic fluid. AFP was isolated from amniotic fluid using an isolation procedure consisting of affinity chromatography and preparative polyacrylamide gel electrophoresis. The antibody directed against AFP was raised in rabbits. Double immunodiffusion and Western blotting methods showed that the antiserum was highly specific, reacting with only AFP-containing samples. Standard curve was obtained by using purified AFP and specific antiserum. The assay sensitivity was 5ng/ml and the working range was 5~1,000ng/ml. The within-assay and between-assay coefficient of variance (CV) was 4.5% and 8.5%, respectively. These results indicate that the assay is valuable for the measurement of AFP and found to be simple, reproducible, and accurate.

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          안결막에 감염된 동양안충 (Thelazia callipaeda)의 형태학적 소견

          양용강(Yong-Kang Yang), 조윤경(Yoon-Kyung Cho), 안영겸(Yung-Kyum Ahn), 류장근(Jang-Keun Ryu), 이지숙(Ji-Suk Lee) 대한의생명과학회 1997 Biomedical Science Letters Vol.3 No.1

          저자들은 1996년 7월에 강원도 춘천지역에서 농사업을 하는 60세 남자의 좌측 안결막에서 총 10마리의 유백색 선충을 적출하였다. 적출된 충체를 형태학적으로 관찰한 결과 Thelazia callipaeda Railliet et Henry, 1910으로 동정하였으며, 그 성적은 다음과 같다. 관찰된 유백색의 충체는 암놈 7마리, 숫놈 3마리였으며 충체의 크기는 암놈 11.91~12.77 × 0.25~0.26 ㎜, 숫놈 8.83~9.32 × 0.24-0.25 ㎜ 였다. 암놈과 숫놈의 구강 깊이는 각각 0.023~0.026, 0.022~0.023 ㎜이고, 충체 전단에서 식도-장 접합부까지의 길이는 각각 0.58~0.60, 0.56~0.58 ㎜이었다. 표피소극의 배열은 전단부위에서 ㎜당 260~290열이고 중앙부위에서 ㎜당 203~207열 정도의 갯수가 관찰되었다. 그리고 암놈의 자궁내에는 coil상의 성숙된 유충이 관찰되었고 숫놈의 배설강구 전방의 유두수는 8쌍이었다. 이상과 같이 암수 충체에 대한 형태특징을 분석한 결과 Thelazia callipaeda로 동정되었다. The authors presented the human Thelaziasis case in Korea, with the review of the literatures. The patient was 60-year-old farmer who had lived in Chunchoun since birth. He complained lacrimation and foreign body sensation of the left eye. Total 10 worms, appeared to be slender milky-white nematodes, were extracted from the left upper conjuctival sac by authors. Micrograph morphological features are as follows: Three male worms are 8.83~9.32 ㎜ in length, 0.24~0.25 ㎜ in width, 259~263 cuticular striations per mm, and showing cloaca with spicules. seven female worms are 11.91~12.77 ㎜ in length, 0.25~0.26 ㎜ in width, 259~289 cuticular striations per mm, and vulva opening locating anterior to esophago-intestinal junction. From the above findings, these nematodes were confirmed as Thelazia callipaeda Railliet and Henry, 1910.

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          암 환자의 혈장 Transforming Growth Factor-β1 농도

          전지현(Ji-Hyun Jeon), 이시은(Si-Eun Lee), 이수진(Sue-Jin Lee), 박찬후(Chan-Hoo Park), 장정순(Joung Soon Jang), 하우송(Woo Song Ha), 박순태(Soon Tae Park), 박병규(Byung-Kiu Park) 대한의생명과학회 1999 Biomedical Science Letters Vol.5 No.2

          한국인의 대표적인 성인 고형 종양인 위암, 간암, 유방암과 소아 백혈병 및 2종의 소아 고형 종양 환자로부터 혈장 transforming growth factor-β1 (TGF-β1) 농도를 sandwich ELISA 분석법을 이용해 측정함으로써 TGF-β1을 이 질환들에 대한 새로운 종양표지자 (tumor marker)로 사용할 수 있는지 검토하였다. 또한 연령 및 성별에 따른 혈장 TGF-β1 농도의 정상치를 조사하였다. 신생아에서 70대까지 혈장 TGF-β1 농도의 차이는 없었고 남녀간의 차이도 없었다. 위암 환자의 혈장 TGF-β1 농도는 16.0±6.8 ng/㎖ (평균±표준편차)로 정상 대조군의 TGF-β1 농도 (8.3±5.0 ng/㎖) 보다 유의하게 높았으나 간암, 유방암 환자의 혈장 TGF-β1 농도는 대조군과 차이가 없었다. 그리고 위암 환자 16명, 간암 환자 8명, 유방암 환자 7명 중 각각 7명 (43.7%), 1명 (12.5%), 1명 (14.3%)에서만 혈장 TGF-β1 농도가 증가되었다. 5명의 소아 백혈병 환자에서는 관해 (remission) 여부와 상관없이 혈장 TGF-β1 농도가 모두 정상 범위에 있었으나 2명의 소아 고형암 환자에서는 종양 절제 전에는 혈장 TGF-β1 농도가 높았다가 절제 후 정상으로 떨어졌다. 결론적으로 1) 정상인의 혈장 TGF-β1 농도는 연령 및 성별에 따른 차이가 없다는 것을 알 수 있었고, 2) 성인 고형암인 위암, 간암, 유방암에서는 낮은 민감도로 인해 TGF-β1을 진단을 위한 선별 검사로 이용하기에는 부적절한 것으로 판단되었으며, 3) 정상 대조군보다 혈장 TGF-β1 농도가 높았던 위암 환자와 종양 절제 전후로 혈장 TGF-β1 농도가 민감하게 변했던 소아 고형암 환자에 대해서는 향후 표본 수를 늘려 부가적인 연구를 해야 할 것으로 사료된다. To evaluate the usefulness of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) as a new tumor marker, we determined the plasma TGF-β1 levels using sandwich ELISA assay in cancer patients. Patients with three most common adult cancers in Korea (stomach, liver and breast cancer) and children's cancers (leukemia and two kinds of solid tumor) were enrolled for the study. Furthermore, 39 individuals were subjected to age and sex-stratified plasma TGF-β1 analysis. No statistical difference was demonstrated with respect to age or sex. The mean plasma TGF-β1 level (16.0 ng/㎖) of stomach cancer patients was significantly higher than that (8.3 ng/㎖) of controls. However, there was no difference among the mean plasma TGF-β1 levels of liver, breast cancer patients and controls. Seven of 16 patients (43.7%) with stomach cancer, one of 8 (12.5%) with liver cancer, and one of 7 (14.3%) with breast cancer showed higher TGF-β1 levels compared to controls. Plasma TGF-β1 concentrations of five leukemic children remained in the normal range regardless of the remission state. In contrast, initial high TGF-β1 levels from two children with solid tumors returned to normal range on surgical resection of tumors. From the above results, we could conclude that plasma TGF-β1 levels of apparently healthy individuals seem to be rather constant irrespective of difference in age or sex, and the plasma TGF-β1 has the limited value as a screening test for the diagnosis of aforementioned adult cancers because of its low sensitivity. Finally, additional studies need to be pursed for the large number of stomach cancer and pediatric solid tumor patients in order to reach a secure conclusion on the usefulness of plasma TGF-β1 as a tumor marker in these patients.

        • KCI등재

          수태중인 생쥐에 있어서 림프구아형 및 자연살해세포 활성도의 변화

          신주옥(Chuog Shin), 고기석(Ki-Seok Koh), 최임순(Rim-Soon Choe) 대한의생명과학회 1996 Biomedical Science Letters Vol.2 No.2

          수태기간중 태아가 모체에 의해 면역학적으로 거부반응을 일으키지 않고 동종이식 상태로 유지되는 기작을 밝히는 연구의 일환으로 C3H/HeJ계의 암컷 생쥐와 DBA/2계의 수컷 생쥐를 교배하여 모체에서 발생되는 체계적인 면역기능 및 국소적 면역기능현상에 대하여 연구하고자 수태기간별로 비장 및 자궁으로 들어가는 림프절에서 T세포 및 B세포의 아형을 측정하였고 자연살해세포의 활성도를 측정하였다. 또한 수태혈청 및 수태성 호르몬이 자연살해세포의 활성도에 미치는 영향을 알아보았다. 각 수태기간별로 비장세포에 있어서 T세포와 B세포의 아형을 관찰한 결과, Thy-1.2?세포는 수태기간중 중기 이후에 감소하기 시작하여 수태 4기에는 대조군에 비하여 유의하게 감소하였으며 수태말기에는 회복하였다. L3T4?세포도 Thy-1.2? 세포와 비교하여 비슷한 경향으로 감소 또는 증가하였다. Ly2?세포는 수태중기 이후부터 대조군에 비하여 유의하게 증가하였으며, B세포는 수태중기 이후부터 수태말기까지 계속 증가하였다. 비장에 있어서 자연살해세포의 세포독성은 수태 5일에서 수태 8일사이에 가장 증가하였으며 그 이후는 대조군 수준으로 감소하였다. 정상혈청 및 수태혈청의 자연살해세포의 세포독성에 대한 영향을 수태시기별로 조사한 결과, 정상혈청과 수태혈청 모두 자연살해세포의 세포독성을 유의하게 억제하였으며, Progesterone은 시험관내 실험과 생채내 실험 모두 약리적인 농도이상에서 농도에 의존적으로 자연잘해세포의 세포독성을 증가시켰으며, HCG는 5 unit/㎖에서 5000 unit/㎖까지 처리농도에 비례하여 자연살해세포의 세포독성을 억제하였다. 자궁으로 들어가는 림프절에서 T세포의 아형은 Thy-1.2?세포는 수태 2기부터 증가하여 대조군보다 유의하게 증가하였으며, L3T4?세포의 유의한 변화없이 Ly2?세포가 수태 2기 이후부터 대조군에 비하여 유의하게 증가하였고 분만 직전에는 조금 감소하였다. 자궁으로 들어가는 림프절에서의 자연살해세포의 세포독성은 착상직후 대조군에 비하여 유의하게 증가하였으며, 수태중기와 수태후기에도 대조군에 비하여 세포독성이 증가하였으며, 같은 시기의 비장세포의 자연살해세포의 세포독성보다 높게 나타났다. The conceptus which are resulted by mating between two genetically non-identical partners can be considered to be an allograft to the mother science which is not rejected by the mother's immunological attack. The present studies have been, therefore, attempted in order to elucidate the mechanism by which protection of the feto-placental allograft, between the C3H/HeJ female mouse and DBA/2 male mouse occurred. For this purpose, firstly systemic immunity was investigated by measuring T and B lymphocytes subsets. Natural killer cell activity in maternal splenic tissue and by observing the effects of pregnancy serums, progesterone and hCG on immune systems. Secondly, local immunity also investigated by measuring T lymphocytes subsets, natural killer cell activity in lymph nodes draining the uterus. The subsets of Thy-1.2? cells and L3T4? cells decreased slightly while the subsets of Ly2? cell increased significantly compared with those of the control group beyond the mid-gestational stage. The subsets of B cell gradually increased from the mid-gestational stage untill delivery. The natural killer cell activity in the maternal splenic tissue significantly increased during the period of 5th to 8th day of gestation. The natural killer cell activity was significantly suppressed by the pregnancy serums and non-pregnant serums compared with those of serum-free group. The treatment of hCG significantly suppressed natual killer cell activity in the dose dependent manner (1 unit/㎖-1000 unit/㎖) while progesterone increased the natural killer cell activity at phamarcological dose only. In the lymph nodes draining the uterus, the subsets of Thy-1.2? cells significantly increased during the period of implantation and L3T4? cell subsets slightly increased during the mid-gestational stage. The subsets of Ly2? cell increased significantly during the mid-gestational stage, but decreasing slightly before delivery. The natural killer cell activity was significantly elevated after the implantation period in the lymph nodes draining the uterus. The natural killer cell activity of the lymph nodes draining the uterus was higher than those of splenic tissue during the same periods of gestation. It is therefore, concluded that during the pregnancy, the phenomena which the feto-placental allograft has not been rejected and rather protected from the maternal immunological attack might be due to local immune suppression in feto-maternal interface tissues rather than systemic immune suppression. And the subsets of Thy-1.2? cells and L3T4? cells mainly contribute to accepting allograft in early stage of pregnancy, while the subsets of Ly2? cell and the subsets of B cell increased significantly compared with those of the control group beyond the mid-gestational stage, so their role in systemic immunity and local immunity gradually increased from the mid-gestational stage untill delivery.

        • KCI등재

          쥐 뇌에서 발현되는 S-100 Beta 유전자의 Polymorphism에 대한 분자생물학적 증거

          신송우(Song-Woo Shin), 권오식(Oh-Sik Kwon), 유민(Min Yoo) 대한의생명과학회 1998 Biomedical Science Letters Vol.4 No.2

          쥐 뇌에서 발현되는 S-100 beta 유전자의 다형현상을 조사하였다. Polymerase chain reaction을 위한 주형으로는 뇌에서 분리한 mRNA를 직접 역전사한 cDNA, 또는 rat brain cDNA library에서 분리한 phage DNA를 사용하였다. 증폭된 DNA 절편들은 크기가 기존에 보고되었던 것과 일치하였으나 DNA sequencing을 통한 세부적인 분석 결과 coding region 내에 염기변화 (CAT가 CAC로 변함)가 있음이 확인되었다. 그러나 이들은 모두 histidine을 결정하는 유전암호이기에 단백질의 1차구조에는 아무런 영향을 미치지 않는 다형현상으로 결론지어졌다. 본 연구는 S-100 beta 단백질에 그동안 알려지지 않았던 다형현상이 존재함을 시사하는 것으로서 S-100 beta 효소 유전자의 전체적인 구조를 이해하기 위한 학문적 자료가 될 것으로 기대된다. We examined mRNAs, isolated from the rat brain, to ascertain if there is any polymorphism for S-100 beta protein gene. As templates for polymerase chain reaction (PCR) the reverse-transcribed cDNA from the rat brain or phage DNAs isolated from the rat brain cDNA libraries were used. Although PCR products turned out to be exactly same as the expected size based on the previously reported mRNA sequence a single base substitution (CAT to CAC) was identified at nucleotide level. This change was considered as polymorphism since it did not cause any change of the primary structure for S-100 beta protein. This result should facilitate the understanding of the overall structure of the gene for S-100 beta protein.

        • KCI등재

          인체기생 열두조충류의 형태비교 및 진단적 소견

          류장근(Jang-Keun Ryu), 양용상(Yong-Sang Yang), 강성구(Sung-Gu Kang), 백승한(Seung-Whan Baek), 임신영(Shin-Young Rim) 대한의생명과학회 1998 Biomedical Science Letters Vol.4 No.1

          최근 우리 나라는 열두조충과 (Diphyllobothridae)에 속하는 조충류의 인체 감염예가 빈번하게 보고되고 있다. 이는 본 조충류의 감염매체인 어류를 날 것으로 생식할 기회가 많으며, 또한 본 조충류의 제1중간숙주인 물벼룩이 음료수를 통한 인체 감염이 완인일 것으로 추정되고 있다. 조충류의 진단은 충체에 있어 두절과 편절의 형태학적 특정을 감별하여 種의 분류와 진단을 하는 것이 기본적 순서가 될 것이나, 1차적으로 가능한 진단은 환자의 증상 참작과 분변으로부터 충란을 발견 감별하게 된다. 특히 광절열두조충류의 충란에 의한 種鍵別은 환자로부터 편절이나 충체의 확실한 감별을 위한 사전 정보를 가늠하는 뜻에서도 중요성이 있다. 이에 저자들은 환자의 치료와 함께 수집된 Diphyllobothrium latum, D. latum parvum 그리고 Spirometra erinacei의 편절과 충란을 재료로 형태 및 진단적 결과를 분석한 바 그 성적은 다음과 같다. 1. 환자의 분변에서 수집된 충란 50개씩을 각각 선택하여 형태와 크기에 대한 계측을 실시하였다. D. latum의 충란은 난개가 있고 난원형 또는 타원형의 모양으로 관찰되었으며 D. latum parvum은 D. latum에 비하여 더 난원형이면서 작게 관찰되었다. S. erinacei의 충란은 폭이 비대칭적이며 걸쭉한 모양으로 관찰되었다. 2. D. latum, D. latum parvum 그리고 S. erinacei의 충란의 크기에서 충란의 평균 길이와 폭은 각각 61.4×41.7 ㎛, 55.9×41.4 ㎛ 그리고 66.7×36.4 ㎛이었다. 3. 각 조충의 편절을 고정한 다음, 첫째 포매하고 microtome으로 절편을 만들어 hematoxylin-eosin 염색을 실시하였고, 둘째 고정과 함께 sernicon's aceto-carmine 염색표본을 작성하여 현미경 관찰을 한 결과 D. latum과 D. latum parvum은 생식선이 편절의 중앙선상에 위치하고 개구된 자궁구가 관찰되었다. 그리고 편절의 양측에 난황이 follicle로 관찰되었으며 전형적인 rosette모양을 형성하고 있었다. 그러나 D. parvum은 D. latum에 비하여 아주 작은 크기로 관찰되었다. S. erinacei의 편절은 자궁이 나선형으로 5~7회 이상으로 말려서 관찰되었고 음경낭안에서 저정낭이 이어져 연결되고 있었다. 이로써 본 연구에서는 편절의 형태특징과 함께 충란 크기에 대한 계측과 분석을 하고자 하였으며, 광학현미경에 의한 계측치로 세 종류의 조충 감별에 유의한 참고치를 제기하는 바이다. Recently there have been frequent reports on human infection caused by the Diphyllobothridae in Korea. The adequate opportunities for Koreans to eat raw fish, the primary infection medium of cestodes and the human infection through drinking water by cyclops, the first intermediate host are believed to be main reasons for the infection. The first task of this study was to classify and diagnose the species by differentiating morphological characteristic between scolex and proglottids of cestodes. However, the initially available diagnosis was done with the patient's symptoms and the eggs obtained from his stool. It is important to differentiate the species by the eggs of Diphyllobothrium latum especially in that it can help get advance information for a more reliable analysis in the near future. The morphological and diagnostic results from proglottids and eggs of Diphyllobothrium latum, Diphyllobothrium latum parvum and Spirometra erinacei are as follows; In each kind of cestodes from the patient's stool, the shape and size of 50 eggs were measured. Eggs of Diphyllobothrium latum had an operculum and were ovoidal or ellipsoid to elliptical in shape. Eggs of Diphyllobothrium latum parvum were more ovoidal in shape and smaller in size than Diphyllobothrium latum. And eggs of Spirometra erinacei were asymmetrical in width and long and slender in shape. The average lengths and widths of Diphyllobothrium latum, Diphyllobothrium latum parvum and Spirometra erinacei were 61.4 × 41.7 ㎛, 55.9 × 41.4 ㎛ and 66.7 × 36.4 ㎛, respectively. After the segments of each cestode were fixed, embedding and hematoxylin-eosin dyeing on a microtome-made specimen were done. The micrographs of the semicon's aceto-carmine dyed specimen showed that Diphyllobothrium latum and Diphyllobothrium latum parvum had a centrally-located genital gland and an opened uterine pore. The yolks were observed on both sides of proglottids and had a typical rosette pattern. Yet, Diphyllobothrium latum parvum was shown smaller than Diphyllobothrium latum in the micrograph. Proglottids of Spirometra erinacei displayed that the uterus was rolled spirally more than five to seven times, and connected successively to the seminal vesicle in the cirrus sac. Shown above, this study was performed to measure the size of eggs and analyze the morphological characteristics of proglottids and provided the measurements of three types of cestodes obtained by a light microscope.

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