외상후 스트레스 동물모델에서 공포기억에 미치는 원지의 효능 연구

조윤주 경희대학교 동서의학대학원 2015 국내박사

외상후 스트레스 동물모델에서 공포기억에 미치는 원지의 효능 연구 조윤주 경희대학교 동서의학대학원 동서의학과 한의학전공 지도교수: 류재환, 맹성호 외상후 스트레스 장애, Post-traumatic stress disorder(PTSD)는 극도의 스트레스성 경험 이후 지속적인 고통과 공포감을 느끼며, 정상적인 사회생활에 부정적인 영향을 끼치는 질환으로 현재 심각한 문제로 알려져 있다. 다른 스트레스성 질환과는 달리 PTSD는 원인규명이 명확하여, 공포가 형성되고 소거되는 과정에서 공포기억의 응고와 재응고를 억제, 공포기억의 소거를 촉진, 공포기억의 재설립 또는 재생억제를 통해 공포기억을 경감하거나 소거함으로써 치료효과를 기대할 수 있는 질환으로 다뤄진다. 현재까지 이에 대한 치료법으로 신경과학, 인지과학 분야에서 약물치료와 정신치료요법이 사용되어왔고 비교적 안전하게 병행 가능한 약물개발에 초점이 모아지고 있으나 효과적으로 적용 가능한 약물은 미비한 상황이여 동서의학분야의 다양한 연구가 이루어지고 있다. 원지는 동양의학에서 신경계를 안정시키는 약물로써, 현대의학에서는 신경보호효과, 학습능력 개선 효과, 항우울〮•항불안 효과제로 사용되어진다. 특히 PTSD동물모델에서 공포기억과 관련된 행동학적 변화들을 감소시킨 보고는 원지가 공포감정과 관련된 스트레스성 질환에 효과적인 약물로서의 가능성을 제시하였다. 본 연구에서는 원지가 공포기억의 형성을 감소시킨다는 선행연구의 결과에 따라 원지가 외상후 스트레스 동물모델에서 공포기억에 미치는 영향을 확인하고자 하였다. 이 연구를 위해 조건화 공포 패러다임 이용하였으며, 무조건적 자극(전기충격)과 조건적 자극(백색소음)의 조건적 자극에 따라 형성된 공포기억 형성기전에서 기억의 응고, 재응고, 소거, 재설립, 재생과정에 제어하는 원지의 효과를 단계별로 관찰하였다. 재응고 과정은, 맥락과 소리단서에 3분간 노출하여 생쥐의 공포반응을 측정하였다. 공포기억의 소거 효과는, 소리단서에 30회 반복노출 하거나 맥락에 30분간 노출한 후 생쥐의 공포반응을 측정하였다. 1회 전기충격으로 공포기억이 재생되어 발현이 되는 재설립 과정은, 30회의 조건적 자극으로 공포기억 소거 후 다른 맥락의 소리단서에 노출하여 측정하였다. 공포기억 형성기전의 과정별로 원지의 제어효과를 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 단1회 원지투여로 진행된 맥락과 소리단서의 반복적 노출에 의한 공포기억의 재응고, 소거에 대한 원지의 제어효과는 나타나지 않았다. 또한 원지는 맥락과 소리단서의 반복적 노출에 의한 공포기억 소거를 촉진하지는 않았지만, 공포기억 소거 후 공포기억이 재설립 되거나 새 맥락에서 재생되어 발현되는 정도를 감소시켰다. 위의 결과에 따르면, 원지는 공포기억이 재응고되는 과정을 감소시키거나, 공포기억 소거를 촉진 하는데 효과적이지 않았지만, 공포기억이 재설립 되고 재생되는 것을 감소시키는데 효과적 이였다. 이러한 결과는, 원지가 PTSD로 인한 기억의 흔적을 효과적으로 소거하여 공포기억이 재생되어 발현되는 것을 억제하며, 공포가 다시 재설립 되고 재생되는 과정에서 적용 가능한 치료약물로서의 가능성을 제시해 주었다. 본 연구는 외상후 스트레스 장애 환자에서 정확한 투여 시점을 찾기 위한 근거를 마련하였고, 기존의 다른 치료들과 병행하여 치료 효과를 기대할 수 있는 비교적 안전한 천연약재임에 의의가 있다.

악성종양에 사용되는 천연물약재의 항암효과에 대한 대체보완의학적 문헌고찰

오선민 경희대학교 동서의학대학원 2016 국내석사

본 연구에서는 본초에 관한 각종 문헌을 대상으로 선발된 418종의 천연약재를 1차적으로 항암활성 작용기전에 부합하는 암 종류로 분류하였으며, 2차적으로는 천연약재의 생리활성 물질 및 유효성분 등을 연구하였다. 총 418종류로 선발된 천연약재 중에서 111종류(26.55%)가 항암생리물질이 존재하는 것으로 조사되었으며, 폐암에 관련된 천연약재는 13종류(3.10%)로 가장많았고, 간암은 8종류(1.90%), 유방암은 7종류(1.67%), 자궁경부암, 백혈병, 전립선암, 위암은 5종류(1.20%)였으며, 대장암, 난소암, 고형암 등이 각각 4종류(0.95%)로 나타났다. 2014년 현재 우리나라 3대 사망원인은 암(악성신생물), 심장질환, 뇌혈관 질환으로 나타나고 있으며, 2004년 이후로 매년 사망원인 1위는 암으로 조사되고 있다. 그러나 암에 대한 현대의학은 꾸준하게 발전되고 있음에도 불구하고 서구 사회에서의 보완대체의학은 문화적, 교육적, 사회적 배경에 따라 다양한 형태로 발전되고 있으며, 이용 또한 급속하게 증가하고 있다. 또한 현대의학의 체계적 한계와 암 치료에서 발생하는 다양한 부작용에 대한 반발에서 우리나라에서도 보완대체의학의 존재감이 새롭게 조명되고 있으나 과학적 근거가 부족한 민간요법의 부작용 실태도 심각한 상황이다. 따라서 보완대체의학 차원에서 본 연구는 2차 암으로의 전이를 예방할 수 있는 식이요법과 기능성 식품으로서의 천연약재 활용에 과학적 기초자료를 제공하고자 한다.

편두통 조절물질 개발을 위한 multielectrode array 장치를 이용한 새로운 in vitro 검색계 연구

이철원 경희대학교 동서의학대학원 2016 국내박사

본 논문에서는 편두통현상을 조절하는 생리활성물질을 검색하는 새로운 검 색계를 개발하는데 그 목적이 있다. 편두통은 여러 가지 요인으로 인하여 이를 치료하는 약물을 발겨하는데 매우 어려운 점이 있다. 여러문헌을 참고하여 가장 빈번하게 일어나는 편두통을 실험적으로 가장 잘 나타나는 현상인 spreading depolarization (SD)을 골랐다. 그리 하여 SD 현상을 검색계의 목표현상으로 삼았다. SD 현상을 동물 모델어서 야기 시키기 위해서 뇌해마절편양생 법을 사용하였다. 또한, 뇌해마의 거의 전 부분의 전기 생리학적 변화를 기록할 수 있는 multielectrode array 장 치를 사용하였다. SD 현상은 1M의 KCl을 포함하는 인공적으로 만든 뇌척 수액 (artificial cerebrospinal fluid, aCSF)을 흘려보내어 얻어내었다. 한 편, 이러한 검색계가 작동하는지를 검사하기위해서 편두통을 감소시키는 대 표적인 약물인 praol을 처리하여 검색계를 시험해 보았다. 결과적으로, pranol의 처리에 따라 명확하게 검색계가 변화를 잡아내었을뿐 아니라 pranol처리의 최적의 농도도 분별할 수 있어서 매우 고부적이었다. 결론적으로, 이 새로운 in vitro 편두통 검색계가 향 후 편두통을 완화시키고 치료하는 새로운 생리활성물질을 찾아내는데 일조하는 데 사용 되기를 바란다. In this study, a novel efficient screening system to find bioactive materials against migraine, It was well known to have difficulties in finding a curing medicine for migraine. because the causes were various.With literature studies, most frequent event during migraine was spreading depolarization (SD). For this reason, SD was selected as a key feature to target. To make SD feature in animal experimental model, an organotypic hippocampal brain slice model was chosen. Moreover, a multielectrode array system was used for multichannel electrode to record not only a small most of all area of it. With KCl contained saline treatment, SD feature was generated and the recording was successfully. To verify the system, a typical attenuating medicine for migraine, pranol, was engaged to test the system. As the result, the system could clearly reveal the effect of pranol and furthermore it could represent a optimum treatment concentration of it. In conclusion, this novel in vitro expeimental system for screening bioactive materials against migraine might be useful for pharmaceutical application.

Honokiol Inhibits Hepatic Fibrosis through Suppression of Transforming Growth Factor β1-Induced Hepatocyte Epithelial?Mesenchymal Transition

Jai Wha Seo 경희대학교 동서의학대학원 2017 국내석사

Though Honokiol, a ligan biphenol derived from the Magnolia tree, was known to have anti-inflammatory, antioxidant, anticancer, antithrombotic, anti-viral, metabolic activity, and neurotrophic activity effects. However, the effect of Honokiol on transforming growth factor β1 (TGF-β1)-induced hepatic fibrosis and epithelial–mesenchymal transition (EMT) is still unknown. Thus, in the present study, mechanism of Honokiol on liver fibrosis and EMT were elucidated mainly in murine hepatocyte AML-12 cells. Honokiol significantly effectively suppressed TGF-β1-induced EMT and migration of AML-12 cells. Also, Honokiol effectively suppressed typical morphology change of EMT such as loss of cell adhesion and formation of fibroblast like mesenchymal cells in TGF-β1-treated AML-12 cells. Furthermore, Honokiol reversed the loss of epithelial cadherin (E-cadherin) and overexpression of Snail and transmembrane protease, serine 4 (TMPRSS4) induced by EMT in TGF-β1-treated AML-12 cells. On the other hand, Honokiol reduced TGF-β1-induced p38 mitogen-activated protein kinases (p38), extracellular signal–regulated kinases (ERK) and Akt phosphorylation and increased glycogen synthase kinase 3 beta (GSK3β) phosphorylation and blocked catenin beta-1 (β-catenin) in the TGF-β1/non-Smad pathway. Conversely, GSK3β inhbitor SB216763 reversed the effect of Honokiol on E-cadherin, Snail, TMPRSS4 and β-catenin in TGF-β1-treated AML-12 cells. Overall, these results suggest that Honokiol may suppress TGF-β1-induced EMT in hepatic fibrosis by inhibiting the TGF-β1/non-Smad/MAPKs/AKT/β-catenin signaling pathways. Key words Honokiol, TGF-β1. EMT, Smad, GSK3β

Apoptotic effect of Tanshinone I in colon cancer cells via ROS-mediate p38 MAPK signaling pathway

김동희 경희대학교 동서의학대학원 2018 국내석사

Tanshinone I (Tan I) is a phenolic compound from the root of Salvia miltiorrhiza. Although Tan I is known to exhibit anti-cancer activity, its anticancer mechanisms are not fully understood yet. Thus, in the present study, the underlying molecular mechanism of Tan I was examined in HCT116 and HT29 colorectal cancer cells (CRCs). Here Tan I suppressed viability in HCT116 and HT29 cells in a time- and dose-dependent manner. Also, Tan I increased the number of terminal deoxynucleotide transferase-mediated dUTP-nick-end labeling (TUNEL)-positive cells and sub G1 population in HCT116 and HT29 cells. Consistently, Tan I cleaved poly (adenosine diphosphate-ribose) polymerase (PARP) and caspase-8, caspase-3, attenuated the expression of Bid and activated tBid, caspase-8 substrate, and activated p38 MAPK in HCT116 and HT29 cells. Of note, Tan I generated reactive oxygen species (ROS) and conversely a ROS scavenger, N-acetyl-L-cysteine (NAC), blocked ROS production, PARP cleavage, caspase-3 activation and p38 MAPK phosphorylation induced by Tan I in HCT116 cells. Also, p38 MAPK inhibitor SB203580 blocked cytotoxicity, increased TUNEL-positive cells, PARP and caspase-3 cleavage induced by Tan I in HCT116 and HT29 cells. Overall, our findings suggest that Tan I induces apoptosis in CRCs via ROS-dependent activation of p38 MAPK and caspase-3 in HCT116 and HT29 cells as a potent anticancer agent. Tanshinone I 은 Salvia miltiorrhiza 의 뿌리에서 나온 페놀 화합물이다. Tan I 이 항암 활성을 나타내는 것으로 알려져 있지만, 그 기본 항암 기전은 아직까지는 불분명하다. 본 연구에서는 HCT116 및 HT29 대장 암 세포 (CRCs)에서 mitogen-activated protein kinase (MAPK) 신호 전달 경로의 조절을 통해 Tan I이 그 효과를 매개하는지 여부를 조사했다. 여기서 Tan I은 HCT116 및 HT29 세포의 생존력을 시간 및 농도 의존적으로 억제했다. 또한, Tan 1은 TUNEL 양성 세포의 수와 sub G1을 HCT116 및 HT29 세포에서 증가시켰다. 이와 동시에 Tan I은 HCT116과 HT29 세포에서 PARP 와 caspase-8, caspase-3를 활성화 하였으며, tBid (caspase-8 기질) 및 p38 MAPK의 발현을 활성화 시켰다. Tan 1은 ROS의 생성을 촉진 시켰다. N-acetyl-L-cysteine (NAC, 항산화 물질)은 Tan I에 의한 ROS 생산뿐만 아니라 PARP, caspase-3 및 p38 MAPK의 활성화를 차단할 수 있었다. p38 MAPK 억제제인 SB203580의 첨가는 세포 독성과 TUNEL 양성세포를 감소 (차단) 하였으며, HCT116 및 HT29 세포에서 Tan I 에 의해 유도 된 PARP 및 caspase-3 의 활성을 차단 하였다. 전반적으로, Tanshinone I 은 CRCs에서 강력한 항암제로 작용할 수 있으며 HCT116 및 HT29 세포에서 caspase-3의 활성화를 유도하며, ROS 매개 p38 MAPK의 활성화를 통해 세포사멸을 유도한다.

한국노인의 노화에 대한 태도 유형화 : 정신건강과의 관계를 중심으로

최은영 경희대학교 동서의학대학원 2018 국내석사

The purpose of this study is to identify the attitudes towards aging types of older Korean adults, to examine the predictors of each types, and to investigate the relationship between types and mental health. Latent profile analysis, multiple logistic regression, and hierarchical regression analysis were conducted on a total of 390 people aged 70-92. We identified five types of attitudes towards aging: (1) physical positive·social negative(19%), (2) social positive·physical negative(34%), (3) all negative(11%), (4) mid positive(31%), (5) all positive(5%). Education, residency, functional limitation, subjective health status, and economic levels were the significant predictors of the types. Compared to 'mid positive', 'physical positive·social negative' and 'all negative' types showed higher levels of depressive symptoms and lower levels of life satisfaction. However, older adults belonged to 'all positive' group had lower depressive symptoms scores and higher life satisfaction than people in 'mid positive'. Based on these results, we suggested some implications for promoting mental health in later life. 본 연구의 목적은 한국노인의 노화에 대한 태도의 유형을 파악하고, 각 유형에 대한 예측요인과 나아가 노화에 대한 태도유형이 정신건강과 어떠한 관련성이 있는지 실증적으로 분석하는 것이다. 이를 위해 경희대학교 고령친화특성화대학원에서 수집한 2017년 노쇠이해능력 실태조사(Frailty Literacy Survey) 자료를 활용하였으며, 최종분석대상자로는 만 70-92세 노인 390명이 선정되었다. 연구의 주목적을 달성하기 위해 노화에 대한 태도 하위 세 영역(사회심리적 상실, 신체적 변화, 내면적 성숙)을 중심으로 잠재프로파일분석(Latent Profile Analysis)를 실시하였다. 연구결과, 노화에 대한 태도유형은 신체긍정·사회부정형(19%), 사회긍정·신체부정형(34%), 전영역부정형(11%), 중간긍정형(31%), 전영역긍정형(5%)의 다섯 가지 유형으로 나타났다. 노화에 대한 태도 유형에 대한 예측요인을 분석한 결과, 교육수준, 거주지역, 기능제한여부, 주관적 건강, 경제수준, 경제활동여부 등이 유의한 것으로 나타났다. 이어서 노화에 대한 태도 유형과 정신건강(우울, 삶의 만족도)의 관계를 검증하기 위해 위계적 회귀분석을 실시하였다. 중간긍정형에 비해 신체긍정·사회부정형과 전영역부정형은 우울수준이 더 높고, 삶의 만족도는 더 낮은 것으로 나타났다. 반면 전영역긍정형은 중간긍정형보다 우울수준이 낮고, 삶의 만족도가 높은 것으로 분석되었다. 본 연구 결과를 토대로 노화에 대한 태도 유형에 관한 학문적·실천적 함의와 더불어 노년기 정신건강증진을 위한 정책적 제언을 제시하였다.

건강검진으로 내원한 수진자의 혈압과 설진에 대한 형태학적 비교 연구

박영화 경희대학교 동서의학대학원 2018 국내석사

목적 : 한의학에서 혀는 심장의 생리와 병리를 반영하는 곳이다. 따라서 혈압이 변화함에 따라 혀의 모양도 변화할 것으로 생각된다. 이 연구는 고혈압 환자의 설상을 분석하여 다른 심혈관계 질환의 설진에 도움이 되고자 하였다. 방법 : 연구대상자는 건강검진으로 내원한 70명의 수진자 가운데 고혈압으로 치료 중이거나, 혈압약 복용력이 없지만 이상 혈압을 보이는 사람을 대상으로 하였다. 설진기로 수진자의 혀를 촬영하고, 임상 정보를 증례기록지에 기재하였다. 수집된 혀의 사진을 바탕으로 세 명의 평가자들은 각각 설진을 시행하였고 두 명 이상이 동일하게 진단한 것을 최종 설진으로 확정하였다. 이 때, 설첨부(혀의 앞 1/3 지점)를 ‘心 영역’으로 지정하여 이 부분의 설진도 시행하였다. 설진 각 항목은 빈도 분석을 시행한 후, 혈압약 복용 여부, 고혈압의 동반 질환 여부, 혈압약 복용 시기, 혈압의 높이, 인구학적 및 임상 정보, 양방 진단 검사에 따른 교차 분석을 시행하였다. 결과 : 문헌상의 정상인 설진과 비교하였을 때, 고혈압으로 치료 중이거나 이상 혈압을 보이는 사람은 다빈도로 열문, 치흔, 황태, 후태가 있고 心 영역에서 백태, 윤태 경향이 보였다. 이 중 정상 혈압으로 조절되는 고혈압 환자는 설색이 담백색(60.0%), 설태가 조태(80.0%) 경향이고, 혈압이 조절되지 않는 고혈압 환자나 이상 혈압을 보이는 사람은 상대적으로 설색이 청자색(29.3%), 설하정맥이 이상 소견(56.9%)을 보였다. 혈압약 복용 군에서 황태(p=0.041), 후태(p=0.029) 비율이 높았다. 혈압약만 복용하는 환자와 당뇨약을 같이 복용하는 환자의 설태는 황색 경향이었다(p=0.047). 혈압약 복용 시기가 길어질수록 心 영역에서 백태의 비율이 높았다(p=0.027). 전체 군(p=0.025)과 혈압약 복용 군(p=0.007)에서 수축기 혈압이 높아질수록 윤태가 보였다. 또 인구학적 정보 및 임상 정보, 양방 진단 검사가 설진과 관련이 있음을 관찰하였다. 결론 : 고혈압 환자는 정상인과 다른 설상을 보이며, 특히 혈압은 설태와 관련이 있었다. 고혈압 환자에서 구강 미생물 군집의 변동에 의해 설태가 변화할 수 있다. 따라서 설태는 구강 미생물의 역할과 관련하여 고혈압의 지표가 될 수 있다. Objectives : In Oriental medicine, tongue reflects the physiology and pathology of the heart. So change of the blood pressure will change the tongue morphology. This study is intended to help tongue diagnosis of other cardiovascular diseases by analyzing tongue diagnosis of hypertensive patients. Methods : The subjects were 70 examinees of Health Promotion Center those who were using antihypertensive drugs or those who had no previous history of antihypertensive drugs use but had high blood pressure at that time. Tongue pictures of examinees were taken by Tongue Image Acquisition System, and Case Report Forms about their clinical informations were filled out. Each of 3 raters did a tongue diagnosis with tongue pictures and the final tongue diagnosis which two-thirds or more raters had agreed was determined. At this time, the anterior 1/3 point of the tongue was designated as the 'Heart Region' and tongue diagnosis was also examined. Based on the results, a frequency analysis of tongue diagnosis was conducted, and cross-tabulation analyses according to antihypertensive drugs use, comorbidities, period of antihypertensive drugs use, classification of blood pressure levels, demographic and clinical informations, and diagnostic tests were performed. Results : Compared with tongue diagnosis of normal persons in the literature, the hypertensive patients or those who had abnormal blood pressure were found to have cracks, teeth marks, yellow tongue coating, thick tongue coating in whole region and have white tongue coating and moist tongue coating in heart region. Normal blood pressure group showed pale tongue color(60.0%) and dry tongue coating(80%), and abnormal blood pressure group relatively showed blue-purple tongue color(29.3%) and abnormal sublingual vein(56.9%). Taking Antihypertensive Drugs(TAD) group showed high frequency of yellow tongue coating(p=0.041) and thick tongue coating(p=0.029). Only Hypertension group and Accompanied by Diabetes Mellitus group showed high frequency of yellow tongue coating(p=0.047). The longer the antihypertensive drugs was used, the higher the percentage of white tongue coating in the heart region was(p=0.027). The higher the systolic blood pressure was in the total examinees(p=0.025) and TAD group(p=0.007), the higher the percentage of moist tongue coating was. Other demographic and clinical informations, and diagnostic tests were also related to tongue diagnosis. Conclusions : Hypertensive patients showed different tongue patterns than normal persons, and blood pressure was especially related to tongue coating. In hypertensive patients, tongue coating may be altered by changes in oral microbial community. Thus, tongue coating may be an indicator of hypertension in relation to the role of oral microbiome. Key words Blood Pressure, Tongue Diagnosis, Tongue Coating, Oral Microbiome

Study of Method Standardization for Experiment of Blood Circulation Improvement

윤지원 경희대학교 동서의학대학원 2018 국내석사

본 연구의 목적은 혈행 개선 실험을 위한 연구방법 표준화를 제시하는 것이다. 첫째, 생체외 실험 결과를 방해하지 않는 혈소판 풍부 혈장의 최소 부피를 연구 하였다. 인간 혈소판 풍부 혈장의 생체외 응집실험을 위한 최적의 혈소판 농도는 2X10⁸ platelets/ml였다. 양성대조군으로 ASA(acetylsalicylic acid)를 사용할 때 10㎕/㎖의 농도에서 항혈전효과를 확인하였다. Hill equation으로 ASA 5㎕/㎖와 10㎕/㎖사이의 거대분자 리간드의 결합 농도를 계산해 본 결과 K 상수값은 8.93㎕/㎖였다. 둘째, 1% DMSO(Dimethyl Sulfoxide)는 ASA를 녹이는 용매로 적합했다. 한편, PEG400 (50 % (v / v) Polyethylene glycol 400 in water)은 자체의 항혈전 효과가 있으므로 용매로 사용하기에는 적절하지 않았고, 또한 ASA를 제대로 녹이지 못했다. 셋째, 혈전 색전증 생체내 검사는 생체 내에서 항혈전효과를 시험하는 방법이다. 그러나 마비의 정도를 정의하기가 어렵다. Rotarod 실험으로 마비의 정도를 구별할 수 있는지 실험을 진행하였고, 300초 이상의 지속성을 보인 경우를 최대 설정값으로 판단하였다. ASA는 100mg/kg의 농도에서 혈전색전증에 대한 최대의 보호 효과를 보였다. TXA2의 농도는 바이오마커로서 ASA 20㎍/㎖의 농도에서 억제되었다. 마지막으로, ASA로 유발시킨 위출혈은 다카기 등급 지수로 평가하였다. ASA 300mg /kg농도에서 통계적 유의차가 확인되었다. 결론적으로 순환 개선 시약 개발을 위해서는 생체내, 생체외 및 바이오마커 연구가 동시에 진행되어야 한다. 이 연구의 모든 결과는 데이터를 공유함으로써 실험실 간 중복실험을 줄이고,다른 연구자가 폭넓게 연구방법을 선택 할 수 있도록 한다. The aim of present study was to present method standardization for experiment of blood circulation improvement, such as antiplatelet aggregation test of ex-vivo experiment, thromboembolism and potential antigastroduodenal ulcer drug development gastric injury model of in-vivo experiment and biomarker study. First, minimum volume of platelet rich plasma volume that does not interfere ex-vivo experiment was studied. The optimal platelet concentration for ex-vivo aggregation experiment of human platelet-rich plasma was 2X108 platelets/ml. Also, the concentration of 10㎕/㎖ ASA(acetylsalicylic acid) was the best volume that meddlesresults in ex-vivo test. The constant K fitting value for the possible concentration to binding of macromolecule ligands between 5 and 10㎕/㎖, the value was 8.93㎕/㎖. Second, 1% DMSO was suitable for vehicle and solvent for ASA. Meanwhile PEG400 (50% (v/v) Polyethylene glycol 400 in water) was inappropriate because of anti-platelet effect. It could not dissolve ASA properly. Third, thromboembolism(TE) in-vivo test is a reasonable method to test the anti-platelet effect in vivo. However, the extent of paralysis was hard to define. Latency to fall in the Rotarod was tested as if it can distinguish the extent of paralysis. The fall down latency longer than 300sec was considered the maximum performance. ASA showed the best protective effect for TE at 100mg/kg. TXA2 levels was biomarker, levels were inhibited by 20㎍/㎖ ASA treatment. Finally, Gastric bleeding was evaluated by the Takagi rating index after ASA. 300mg/kg ASA treatment showed a significant increase of the ulcer index. In conclusion, in order to screen blood circulation improving reagents, in-vivo, ex-vivo, and biomarker study should be explored simultaneously. All results in this research can help other researchers to identify the suitable methods, thereby allowing a better or wider choice of the methods for pre-clinical level researches. By sharing these data will avoid potential repetition of the experiment among laboratories.

Synergistic antitumor effect of galbanic acid with TRAIL in resistant non-small cell lung cancer cells

김윤현 경희대학교 동서의학대학원 2016 국내박사

Galbanic acid (GBA) is a sesquiterpene coumarin to have apoptotic, anti-hypoxic, anti-proliferative, anti-angiogenic, anti-bacteria, anti-hepatitis and anti-thrombotic effects. Also, antitumor effect of GBA was reported in prostate, ovary, breast and lung cancers. Nevertheless, the underlying molecular mechanism of GBA is not fully understood in lung cancer so far. Thus, in the current study, synergistic antitumor mechanism of GBA and TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) was elucidated in resistant H460 (H460/R) non-small cell lung cancer cells (NSCLCs). GBA and TRAIL combination exerted cytotoxicity in a dose dependent manner compared to GBA or TRAIL alone in H460/R cells. Also, GBA and TRAIL combination significantly increased the number of terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) positive cells sub-G1 population in a dose dependent manner in H460/R cells. Consistently, GBA and TRAIL combination induced cleavages of poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), caspase-9 and caspase-8 and also attenuated the expression of B-cell lymphoma-extra large (Bcl-xL), B-cell lymphoma 2 (Bcl-2), X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP) in H460/R cells. Furthermore, combination treatment of GBA and TRAIL inhibited the expression of decoy receptor 1 (DcR1) and upregulated the expression of death receptor 5 (DR5) in H460/R cells. Of note, GBA and TRAIL combination effectively kept Rhodamine 123 in the cells compared to GBA or TRAIL alone by blocking multidrug efflux pump from the cells. Overall, our findings suggest that galbanic acid enhances TRAIL induced apoptosis via inhibition of survival genes including MDR1 and activation of caspases and DR5 in H460/R cells as a potent sensitizer of TRAIL. Key words: galbanic acid; TRAIL; resistance; H460R; TUNEL; apoptosis

Efficacy of Scientific Exercises Approach to Scoliosis(SEAS) as a treatment for Adolescent Idiopathic Scoliosis(AIS) and Idiopathic Scoliosis after Skeletal Maturity(ISSM)

Kim, Su Yoen 경희대학교 동서의학대학원 2018 국내석사

Several prior studies have suggested that supportive therapy (e.g., observation, brace, and surgery) is an effective treatment for scoliosis; however, current treatment for scoliosis is not appropriate because the prevalence of scoliosis keeps increasing. This study provides a realistic treatment method (e.g., scientific exercises approach to scoliosis (SEAS)) and proposes an appropriate time to lower the prevalence of scoliosis. Hypothesis As a treatment for idiopathic scoliosis, a scientific exercises approach to scoliosis (SEAS) is more effective in adolescent idiopathic scoliosis (AIS) than in idiopathic scoliosis after skeletal maturity (ISSM). Moreover, early detection and treatment of scoliosis is the key to successful management of the condition. Methods Three hundred and two patients with Cobb angle ≥ 10° were recruited and divided into two groups: a group of adolescent idiopathic scoliosis (AIS, age≤18, n=125) and a group of idiopathic scoliosis after skeletal maturity (ISSM, age>18, n=177). After the same treatment method (i.e., SEAS) was applied, the treatment outcome of the AIS group and the ISSM group was compared by measuring the change of Cobb angle. The patients with the scoliosis with Cobb angle ≥ 10° were included, but patients with other treatments (e.g., bracing, a history of spine-related surgery, or non-idiopathic scoliosis) were excluded. During the treatment, the patients visited a local clinic in Gangnam, Seoul, three times a week for 12 weeks to have SEAS treatment and simultaneously performed daily home exercise for 30 minutes according to a home exercises sheet. All patients were prescribed with 30- to 60-minute exercise and interviewed during the clinic visit to determine whether home exercise was being conducted. For evaluation of scoliosis, the change of Cobb angle was measured by DR X-ray before and after SEAS, and GPS was used to identify a change of external appearance. Results In the AIS group, a mean change of Cobb angle in thoracic and lumbar spine was 5.16° (SD 4.26) and 4.24° (SD 4.14), respectively. There were four cases with 100% improvement and 21 cases with diminished Cobb angle by more than 10 degrees. On the other hand, the mean height change of patients was increased by +1.8 cm (SD 1.90) during treatment, and no patient had 0% change, so this result suggests that SEAS is effective in treating scoliosis. In the ISSM group, a mean change of Cobb angle in thoracic and lumbar spine was 5.42° (SD 3.77) and 5.14° (SD3.27), respectively. There were six cases with 100% improvement and 17 cases with diminished Cobb angle by more than 10 degree. As a result, there was a statistically significant difference in Cobb angle between the two groups. Discussion This study showed that SEAS is an effective treatment for both AIS and ISSM. SEAS can be an indirect method not only to lower the entire prevalence of scoliosis, but also to prevent unnecessary surgery for severely advanced scoliosis. Moreover, the research suggested that initiating SEAS immediately or soon after early diagnosis of scoliosis is recommended.