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      • Molecular characterization of virulence and antimicrobial resistance properties of Vibrio harveyi isolated from marine food fishes cultured in Korea

        LIYANA ARACHCHILAGE DINITHI SANDUNIKA DE SILVA 충북대학교 2022 국내석사

        RANK : 236063

        국문요약 Vibrio harveyi은 동물 및 사람에게 있어서 감염을 일으키는 병원성 세균으로 널리 알려져 있다. 이 연구의 목표는 국내에서 양식, 판매하고 있는 양식 해산어류로부터 분리된 Vibrio harveyi의 병원성 인자 및 항생제 내성 인자의 특성과 유형을 분자생물학적 기법을 통하여 분석하여, 감염 어류의 섭취로 인한 인수 공통 전염의 가능성을 제시하는 것이다. 이 연구에서는 Vibrio harveyi로 동정되는 49개의 분리주를 국내에서 양식하는 여러 종류의 해산어류로부터 분리되었다. 생화학적 검사 결과, DNase 생성(81.63%), 용혈(α= 75.51%, β=82 12.25%), gelatinase 활성 (71.43%), protease 생산 (71.43%), phospholipase 생산(65.31%), 그리고 lipase 생성 (34.69%)이 분리주에서 확인되었다. 병원성 유전자는 PCR을 통해 VPI (57.14%), tlh (44.90%), tdh (36.73%) , toxR (22.45%) VAC (12.24%) 그리고 ctxAB (8.16%)이 확인되었다. 또한 대부분의 분리주들은 ampicillin 내성을(77.55%) 가지는 것으로 확인되었고, oxacillin (69.39%), nalidixic acid (53.06%), amoxicillin (46.94%), oxytetracycline (46.94%), colistin sulphate (34.69%), fosfomycin (34.69%) chloramphenicol (32.65%), streptomycin (32.65%), cephalothin (28.57%), oxytetracycline (26.53%), ceftriaxone (20.41%) erythromycin (14.29%), 그리고 cefoxitin (12.24%) 내성이 확인되었다. 이들 중 37개(76%)의 분리주는 다중 항생제 내성(MAR) 지수가 ≥ 0.2으로 나타났다. PCR을 통해 각 81.63%, 67.35%, 61.22%, 46.94%, 44.90%, 44.90%, 36.73%, 18.37%, 10.20%, 10.20%, 8.16%, 그리고 6.12%의 분리주에서 tetB, qnrA, intI1(Class 1 integron integrase), aac(6’)-Ib, blaSHV, blaCTX-M, strA-strB, tetA aphAI-IAB, qnrC, qnrS, 그리고 blaTEM 유전자가 각각 존재함을 확인하였다. 이 연구의 결과를 통해 국내에서 양식, 판매되고 있는 해산어류로부터 분리된 Vibrio harveyi의 병원성과 다중약제에 대한 내성을 확인하였으며, 이들 Vibrio harveyi이 감염된 해산 어류를 섭취함으로써 사람에게 감염하여 위해를 일으킬 수 있다고 사료된다. Abstract Vibrio harveyi is a significant cause of infection in both marine animals and humans. It has been reported frequently in seafood-borne infections worldwide. This study was conducted to determine the potential health impact of the V. harveyi isolated from marine food fish cultured in Korea concerning their virulence and antimicrobial resistance. A total of 49 V. harveyi samples were isolated by biochemical tests and PCR method. Phenotypic detection of virulence factors resulted DNase activity (81.63%), hemolysis (α=75.51% and β=12.25), gelatinase activity (71.43%), protease production (71.43%), phospholipase activity (65.31%) and lipase production (34.69%). Virulence genes, including VPI, tlh, tdh, toxR, VAC and ctxAB were detected in 57.14%, 44.90%, 36.73%, 22.45%, 12.24% and 8.16% of the isolates, respectively. Resistance to ampicillin (77.55%), oxacillin (69.39%), nalidixic acid (53.06%), amoxicillin (46.94%), oxytetracycline (46.94%), colistin sulphate (34.69%), fosfomycin (34.69%) chloramphenicol (32.65%), streptomycin (32.65%), cephalothin (28.57%), oxytetracycline (26.53%), ceftriaxone (20.41%) erythromycin (14.29%) and cefoxitin (12.24%) was detected in disc diffusion assay. Most of the isolates were classified as multidrug-resistant as they scored multiple antimicrobial resistance (MAR) index ≥ 0.2. Furthermore antimicrobial resistance genes tetB, qnrA, intI1 (Class1 integron integrase), aac(6’)-Ib, blaSHV, blaCTX-M, strA-strB, tetA, aphAI-IAB, qnrC, qnrS and blaTEM were found in 81.63%, 67.35%, 61.22%, 46.94%, 44.90%, 44.90%, 36.73%, 18.37%, 10.20%, 10.20%, 8.16% and 6.12% of the isolates, respectively. In conclusion, the development of antimicrobial resistance among V. harveyi will ultimately reduce the efficacy of antimicrobials used for treating and can favor the development of more virulent V. harveyi strains. Keywords: Vibrio harveyi, virulence factors, antimicrobial resistance, seafood

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