Ascofuranone에 의한 plasminogen activator inhibitor-1 발현저해 효과

장영채(Young-Chae Chang) 한국생명과학회 2009 생명과학회지 Vol.19 No.10

이 연구는 신장섬유아 세포를 이용하여 LPS에 의해 유도된 신장섬유화 표적유전자인 plasminogen activator inhibitor (PAI-1) 발현과 Ascofuranone (AF)에 의한 신장섬유화 저해효과를 연구하였다. 이 연구를 통해 LPS가 PAI-1의 발현을 농도 및 시간 의존적으로 증가시켜 LPS가 신장섬유화 유도물질임을 확인 할 수 있었다. 또한 LPS로 유도된 PAI-1 mRNA 및 단백질 발현 레벨이 AF에 의해 저해되었으며, 신장섬유화의 또 다른 대표유전자인 fibronectin의 단백질 발현도 AF에 의해 억제되어 AF가 신장섬유화를 저해하는 사실을 확인할 수 있었다. 그리고 AF에 대한 PAI-1 프로모터 활성을 조사하기 위하여 p800-PAI-1-luc을 신장섬유아 세포에 형질전환 시킨 결과, AF가 PAI-1의 전사 활성 조절을 통해 발현을 억제한다는 것을 확인하였다. ERK-1/2의 상위에 존재하는 MEK inhibitor를 처리하여 PAI-1의 발현을 확인한 결과에서도 AF를 처리한 경우와 동일하게 PAI-1 발현이 저해되어 LPS로 유도된 PAI-1의 발현이 ERK-1/2에 의해 조절됨을 알 수 있었다. 또한 LPS로 유도된 ERK-1/2의 인산화가 AF 농도의존적으로 저해된 결과는, AF가 ERK-1/2의 활성저해를 통하여 PAI-1 발현을 조절한다는 사실을 확인 할 수 있었다. 따라서 이러한 연구결과 AF가 신장섬유화를 저해하는 유력한 후보물질로서의 가능성을 제시하였다. Renal fibrosis is a final common manifestation of every type of chronic kidney disease. Plasminogen activator inhibitor (PAI)-1 is induced by lipopolysaccharide (LPS) and is known to play an essential role in the progress of renal fibrosis. In this paper, we found that an isoprenoid antibiotic, ascofuranone (AF), suppresses expression of profibrotic factors, PAI-1 and promoter activity of PAI-1 induced by LPS in rat kidney fibroblast cells. We therefore investigated signaling pathway mediated inhibitory effects of LPS-induced PAI-1 by AF in rNRK-49F cells. PAI-1 expression is suppressed by treatment with kinase inhibitors for MEK-1/2, as it isin inhibition of PAI-1 expression by AF, and AF inhibits phosphorylation of ERK-1/2. This study suggest that AF suppresses expression of PAI-1 through the inhibition of an ERK-1/2-dependent signal transduction pathway. The data indicates the possibility that AF can be used to prevent the development and progression of renal fibrosis.

LPS로 자극된 macrophage RAW264.7 세포에서 ascochlorin에 대한 단백질체 분석

장영채(Young-Chae Chang) 한국생명과학회 2008 생명과학회지 Vol.18 No.6

아스코크로린(Ascochlorin, ASC)은 Ascochyta viciae로부터 추출된 프레닐페놀 물질로, 혈청 콜레스테롤과 트리글리세라이드 수치를 감소시키고 종양 성장을 억제한다는 연구 결과가 보고되어 있다. 본 논문에서는 아스코크로린이 생리학적 혹은 병리학적인 작용과 염증반응에서 약리학적으로 유도되는 반응을 어떻게 조절하며, 이러한 메커니즘에 대해 이해하기 위해 mouse macrophage Raw264.7 세포에 아스코크로린을 처리하여 이에 대한 프로테옴의 특이적인 발현에 대해 분석하였다. 따라서 본 연구는 LPS를 처리한 mouse macrophage Raw264.7 세포에 아스코크로린을 처리하여 염증과정에 관련된 단백질의 발현 양상을 확인하기 위해 프로테오믹스를 시행하였다. Mouse macrophage RAW264.7 세포에 아스코크로린을 처리한 조건과 무처리한 조건으로 나누어 two-dimensional electrophoresis (2-D SDS-PAGE), matrix-assisted laser de-sorption/ionization mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) 와 bioinformatics 방법으로 아스코크로린을 처리한 mouse macrophage Raw264.6 세포의 프로테옴을 분석하였다. 그 결과 mouse macrophage Raw264.7 세포에 아스코크로린 처리 시 Calreticulin이 4배 감소, β-actin도 4배 감소 그리고 vimentin이 1.5배 감소함을 확인 할 수 있었다. 그러나 rabaptin 아스코크로린 처리에 의해 3배 증가함을 확인 할 수 있었다. 이러한 단백질 발현은 RT-PCR을 수행하여 결과에 대해 재확인 하였으며, 프로테오믹스와 동일한 결과를 얻을 수 있었다. 따라서 본 연구를 통해 LPS 처리에 의해 활성화된 mouse macrophage RAW264.7 세포에 ASC를 처리한 후 이차원 전기영동법을 이용하여, 단백질의 발현 변화 및 양상을 규명하고 단백질 지도를 확립 하였으며, RAW264.7 세포를 이용한 면역세포 모델에서 ASC의 항염증 작용을 중심으로 생리활성 조절기능을 확인 할 수 있었다. 향후 분자 기능 조절 연구와 전 임상 연구를 통해 ASC의 생리활성 조절 기능을 규명한다면 ASC는 항염증 및 항암활성을 갖는 약물로 개발될 것으로 기대된다. Ascochlorin (ASC) is prenyl-phenol compound that was isolated from the fungus Ascochyta viciae. ASC reduces serum cholesterol and triglyceride levels, and suppresses hypertension, tumor development, ameliorates type I and II diabetes. Here, to better understand the mechanisms by which ASC regulates physiological or pathological events and induces responses in the pharmacological treatment of inflammation, we performed differential analysis of the proteome of the mouse macrophage RAW264.7 cells in response to ASC. In this study, we used a proteomic analysis of LPS-induced RAW264.7 cells treated by ASC, to identify proteins potentially involved in inflammatory processes. The RAW264.7 cell proteomes with and without treatment with ASC were compared using two-dimensional electrophoresis (2-D SDS-PAGE), matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) and bioinformatics. The largest differences in expression were observed for the calreticulin (4-fold decrease), β-actin (4-fold decrease) and vimentin (1.5-fold decrease). In addition, rabaptin was increased 3-fold in RAW264.7 cells treated with ASC. The expression of some selected proteins was confirmed by RT-PCR analysis.

Sp1 Decoy Oligodeoxynucleotides에 의한 사구체 혈관간세포 증식억제 효과

채영미(Young-Mi Chae),김성영(Sung-Young Kim),박관규(Kwan-Kyu Park),장영채(Young-Chae Chang) 한국생물공학회 2004 KSBB Journal Vol.19 No.5

프레닐 페놀계 항생제인 4-O-methyl-ascochlorin에 의한 호중구 세포사멸의 유도

손동훈,이선영,이민정,박주인,홍영습,이용환,장영채,곽종영,Son Dong-Aoon,Lee Sun-Young,Lee Min-Jung,Park Joo-In,Hong Young-Seob,Lee Yong-Hwan,Chang Young-Chae,Kwak Jong-Young 한국생명과학회 2006 생명과학회지 Vol.16 No.1

호중구의 세포사멸은 자연적으로 일어나지만 여러 외부자극에 의한 신호의 전달에 의하여 증가하거나 지연된다. 본 연구에서는 항암, 항생제로 개발된 프레닐 페놀계인 ascochlorin의 유도체 중에서 백혈구 암의 세포사멸을 유도하는 4-O-methyl-ascochlorin (MAC)이 호중구의 자연 세포사멸 및 지연되는 세포사멸에 어떠한 영향을 미치는가와 그 작용기작을 연구하였다. 호중구의 세포사멸은 사람 말초 혈액으로부터 분리하여 세포 배양 시간에 따라 형태 변화, annexin-V/propidium iodide의 염색, 및 DNA 전기영동 등으로 조사하였다. MAC는 농도 및 시간 의존 형으로 호중구의 세포사멸을 증가시켰다. 그러나 granulocyte macrophage-colony stimulating factor나 lipopolysaccharide 등에 의한 세포사멸의 지연은 MAC에 의하여 부분적으로 억제되었다. MAC에 의한 세포사멸의 유도는 pancaspase, caspase-8 및 caspase-3 억제제인 zVAD-fmk. zIETD-fmk, 및 zDEVD-fmk에 의하여 억제되었으며 procaspase-8과 procaspase-3의 단백질 양도 MAC로 처리한 호중구에서 현저히 감소하였다. 미토콘드리아 막 투과성은 MAC에 의하여 현저히 감소하였으나 zVAD-fmk에 의하여 완전히 봉쇄되지 못하였다. 이들 결과 들은 MAC에 의한 호중구 세포사멸의 증가는 caspase-8 및 caspase-3의 활성을 통하여 일어나지만 미토콘드리아의 막성분에는 영향이 없다는 것을 제시하고 있다. Neutrophils are short-lived leukocytes that play a vital role in immune responses to bacteria, yeast, and fungi. This study was performed to investigate the effect of 4-O-methyl-ascochlorin (MAC), an anti-tumor, antibiotic, and anti-fungal prenyl-phenol compound on the spontaneous apoptosis of human neutrophils. MAC time- and dose-dependently accelerated the spontaneous apoptosis of human neutrophils. The effect of MAC on neutrophil apoptosis was blocked by pre-treatment of the neutrophils with specific inhibitors of pancaspase (zVAD-fmk), caspase-8 (zIETD-fmk), or caspase-3 (zDEVD-fmk). The cleavage of procaspase-8 and procaspase-3 was increased by MAC. Mitochondrial permeability, which was measured by the retention of $DiOC_6(3)$, was dose-de-pendently increased by MAC but the change of mitochondrial permeability was not blocked by pretreatment of neutrophils with zIETD-fmk. These results suggest that MAC induces neutrophil apoptosis by caspase-8-dependent but mitochondria-independent manner.

Suppression of TNF-α-induced Inflammation by Extract from Different Parts of Moringa in HaCaT Cells

Hyo-Jin Lee(이효진),Young-Chae Chang(장영채) 한국생명과학회 2012 생명과학회지 Vol.22 No.9

모링가(Moringa oleifera Lam.)는 항알러지 약물로써 식용 가능한 식물이다. 본 연구에서 부위별 모링가의 피부보호제로서의 가능성을 확인하기 위하여, TNF-α로 염증을 유도한 각질형성세포에서 모링가의 씨, 뿌리, 잎과 열매 메탄올 추출물의 항염증 효과를 비교 실험하였다. 피부세포의 콜라겐 분해 관련인자인 MMP-2, MMP-9의 효소 활성을 측정한 결과 모든 부위별 모링가 추출물이 MMP-9의 효소 활성을 감소시켰다. 특히 모링가 뿌리 추출물은 낮은 농도에도 MMP-9을 효과적으로 감소시켰으며 MMP-2의 효소활성 억제에도 효과가 관찰되었다. 또한 피부 염증관련 인자로 알려진 iNOS와 COX-2의 단백질 발현을 측정한 결과, COX-2의 단백질 발현은 모링가 잎을 제외한 뿌리, 씨앗, 열매 추출물에 의해 억제되었다. 그 중 모링가 뿌리 추출물은 낮은 농도에서도 COX-2 단백질의 발현을 억제시켰다. 그러나 iNOS는 부위별 모링가 추출물에 의한 단백질 발현의 변화가 없는 것으로 나타났다. 뿐만 아니라 피부 염증을 일으키는 cytokine으로 알려진 IL-6의 mRNA발현을 확인한 결과 TNF-α에 의해 증가된 IL-6 발현을 모링가 뿌리 추출물이 효과적으로 억제 시키는 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과로 미루어 보아 부위별 모링가 추출물 중 뿌리 추출물에서 가장 피부노화 억제와 항 염증 효과가 높을 것으로 사료되며,식물 유래의 피부 보호제 제품 개발에 있어 유용한 원료로 사용될 수 있을 것으로 생각된다. The moringa (Moringa oleifera Lam.) plant is used both as food and an anti-allergic agent. In this study, we investigated skin protection effects of methanol extracts from the root, seed, fruit, and leaves of moringa in HaCaT keratinocyte cells. To investigate the pharmacological potential of various moringa extracts on TNF-α-induced collagen degradation in HaCaT cells, we measured the activity of matrix metallopeptidase-9,2 (MMP-9,2) by zymography analysis. Our results showed that all the moringa extracts inhibit the TNF-α-induced enzyme activity of MMP-9. In particular, moringa root extracts significantly suppressed MMP-9 and MMP-2 in a dose-dependent manner. Next, to investigate the anti-inflammation effect of the moringa extracts, we examined cyclooxygenase-2 (COX-2), inducible nitric oxide synthase (iNOS), and interleukin-6 (IL-6) expression of the extracts. The results showed that both the root extracts and the seed extracts decreased the TNF-α-induced expression of COX-2. In addition, the root and leaf extracts reduced the expression of IL-6. However, none of the moringa extracts affected the expression of iNOS. The results suggest that moringa root extracts down-regulate MMP-9, COX-2, and IL-6 and that the root extracts offer superior skin protection effects compared with other extracts of moringa in HaCaT cells.

Anti-Fibrotic Effects by Moringa Root Extract in Rat Kidney Fibroblast

Su-Hyun Park(박수현),Young-Chae Chang(장영채) 한국생명과학회 2012 생명과학회지 Vol.22 No.10

신장섬유화는 내 외부적인 요인들에 의해 발생하며, 그 요인들에 의해 염증이 생기고 지속적인 손상이 일어날 경우 신기능의 상실이 유발된다. 또한 신장섬유화는 세포 외 기질의 과다축적, TGF-β나, TNF-α, IL-1과 같은 사이토카인에 의해 발생하며, TGF-β는 신장 섬유화의 과정과 Type ? collagen과 fibronectin, PAI-1을 포함한 섬유화 관련 인자들의 발현 유도에 중요한 역할을 한다. 본 연구에서는 TGF-β를 처리한 신장섬유화 유도 모델에서 Moringa oleifera Lam 추출물에 대한 섬유화 관련 인자들의 영향을 확인하였다. 실험 결과 TGF-β로 유도된 신장 섬유화 세포에서 모링가 추출물이 fibronectin, Type ? collagen과 PAI-1의 단백질 및 mRNA 발현을 저해하였으며, 모링가 추출물 중 모링가 뿌리추출물이 가장 영향이 있는 것으로 확인 되었다. 모링가 뿌리추출물이 어떠한 기전을 통하여 섬유화 관련 인자들의 발현을 조절하는지 알아보기 위한 TGF-β로 유도된 TβR?? 및 그 하위 기전의 인산화 정도를 확인한 실험에서 모링가 뿌리추출물이 TGF-β로 유도된 TβR??과 그 하위기전의 Smad4, ERK의 인산화를 저해하였다. 그러나 TGF-β에 의해 유도된 JNK와 p38, PI3K/AKT의 인산화에는 영향이 없었다. 따라서 모링가 뿌리추출물이 TGF-β로 유도된 신장 섬유아세포에서 TβR??와 그 하위 기전인 Smad4, ERK를 통해서 Type ? collagen 과 fibronectin, PAI-1의 발현을 조절하여 섬유화를 저해 한다는 것을 예상할 수 있다. 결론적으로 모링가 뿌리추출물이 섬유화 치료 및 완화에 좋은 물질이 될 수 있을 것으로 생각된다. Fibrosis in kidney by internal and external factors causes progressive loss of renal function. Renal fibrosis is the inevitable consequence of an excessive accumulation of the extracellular matrix. TGF-β plays an important role in the process of renal fibrosis and stimulates the synthesis of profibrotic factors, including collagens, fibronectin, and plasminogen activator inhibitor (PAI-1). We examined the effect of Moringa oleifera Lam (moringa) extracts in a rat kidney fibrosis model. We found that moringa root extract suppresses protein expression/mRNA levels of Type ? collagen, fibronectin, and PAI-1 induced by TGF-β in renal fibroblasts. Moringa root extract selectively inhibited phosphorylation of TGF-β-induced TβR?? and the downstream signaling pathway (e.g., Smad4), and phospho-ERK, but not JNK, p38, or PI3K/AKT. These results suggest that moringa root extract can act against TGF-β -induced renal fibrosis in rat kidney fibroblast cells by a mechanism related to its antifibrotic activity, which regulates expression of fibronectin, Type ? collagen, and PAI-1 through TβR???Smad2/3?Smad4 and ERK. Therefore, moringa root extract is an effective substance for fibrosis therapy and provides a new therapeutic strategy for diseases associated with elevated profibrotic factor synthesis.

유방암 세포주에서 PMA로 유도된 암세포 침투에 대한 모링가 뿌리 추출물의 억제효과

조현지(Hyun-Ji Cho),장영채(Young-Chae Chang) 한국생명과학회 2014 생명과학회지 Vol.24 No.1

여성에게 특히 높은 발병률을 보이는 유방암은 다양한 인자에 의해 암세포 침투와 전이가 발생한다. 그중에서 MMP-9은 유방암에서 높은 발현율을 나타내며, 유방암 세포의 침투와 전이에 주요하게 작용한다. MMP-9은 다양한 성장인자와 사이토카인, PMA 등에 의해 발현이 유도되며 세포 내 자연적으로 발생된 내생적 억제인자인 TIMP-1과 -2에 의해 그 활성 및 발현이 조절된다. MMP-9의 활성 및 발현을 저해하기 위해 사용한 물질은 모링가 추출물로 모링가의 모든 부위가 다양한 질환을 치료하는 것으로 알려져 있다. 이 연구에서는 대표적으로 모링가씨, 뿌리, 잎, 열매 추출물질을 이용하여 MMP-9의 활성억제 유무를 연구하였으며, MCF-7 세포에서 모링가 뿌리추출물이 MMP-9을 가장 효과적으로 억제하였다. 또한 MDA-MB-231을 이용한 비교실험에서도 세포특이성 없이 MMP-9의 활성 및 발현이 모링가 뿌리 추출물에 의해 억제되었고 단백질과 mRNA 발현에서도 동일한 결과가 도출되었다. 뿐만 아니라 암세포 침투실험에서도 모링가 뿌리 추출물에 의해 암세포 침투가 50% 이상 감소 되었으나, TIMP-1과 -2 mRNA 발현은 모링가 뿌리 추출물에 의해 저해되지 않았으므로 모링가 뿌리 추출물이 MMP-9 활성 및 발현 저해를 통해 암세포 침투를 저해시키는 것으로 예상된다. 그리고 MMP-9 활성 및 발현 조절기전을 확인하기 위해 MAP kinase의 인산화를 확인한 실험에서 모링가 뿌리 추출물이 ERK와 JNK의 인산화를 억제시킴을 확인하였다. 결론적으로 이 실험을 통해 모링가 추출물 중 뿌리 추출물이 MMP-9 활성 및 발현저해에 가장 효과적이며, ERK와 JNK의 인산화 조절을 통해 MMP-9의 활성 및 발현을 직접적으로 조절함을 확인할 수 있었다. The moringa (Moringa oleifera Lam.) plant is used as food and as an anti-allergic agent. In this study, we studied the inhibitory effect of moringa root extract on the expression of PMA-induced matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), which is the main factor implicated in the invasion and metastasis of cancer cells in MCF-7 cells. At first, various moringa extracts were examined in the MCF-7 cells. Both moringa root extract and leaf extracts inhibited PMA-induced MMP-9 activity, but the root extract suppressed PMA-induced MMP-9 activity to a greater extent than the leaf extract. The moringa root extract also inhibited PMA-induced MMP-9 protein expression and cell invasion. According to RT-PCR, the treatment of the MCF-7 cells with moringa root extract decreased levels of PMA-induced MMP-9 mRNA expression, but not the expression of TIMP-1 and -2, indicating that moringa root extract prevents the transcription of MMP-9 in response to PMA. In addition, moringa root extract specifically suppressed the phosphorylation of ERK/JNK, but not p38. We suggest that moringa root extract abolishes MMP-9 activity/expression through ERK/JNK. In conclusion, moringa root extract suppressed PMA-induced MMP-9 activity/expression by inhibiting the phosphorylation of ERK/JNK in MCF-7 cells. These results indicate that moringa root extract may be a potential antimetastatic and anti-invasive agent. Future clinical research is needed on the anticancer properties of moringa root extract.

Transcriptional Activation and Repression of Cell Cycle Regulatory Molecules by Trichostatin A

백종수,이희경,조영수,김성영,박관규,장영채,Baek Jong-Soo,Lee Hee-Kyung,Cho Young-Su,Kim Sung-Young,Park Kwan-Kyu,Chang Young-Chae Korean Society of Life Science 2005 생명과학회지 Vol.15 No.6

Dihydrofolate reductase (dhfr) promoter에는 전사 인자 Spl과 E2F가 결합하는 cis-acting 배열을 가지고 있다. dhfr 유전자의 전사는 세포 주기 Gl/S기 동안 최대의 발현을 나타낸다. 또한 Spl 전사 인자는 dhfr 유전자 발현의 활성화 및 불활성화를 조절하는 다양한 역할에 대한 연구가보고 되고 있으며, 최근 Spl-Rb과 E2F4-pl30 복합체가 CHOC400 세포에서 dhfr 유전자 발현에 안정한 형태를 형성하여 dhfr 발현을 억제한다는 연구 결과가 보고되었다. 본 연구에서는 Rb-양성 골육종 세포인 U2OS 및 Rb음성인 자궁경부암 C33A 세포에서 histon deacetylase (HDAC)에 대한 특이적인 저해제인 trichostatn A (TSA)를 처리한 후 세포주기 조절에 중심적 인자들인 dhfr cyclin E 및 cyclin A의 전사활성에 대한 HDACl의 기능을 조사하였다. U2OS 및 C33A 세포에서 TSA를 처리한 후, dhfr, cyclin E, cyclin A에 대한 mRNA 및 단백질 발현을 조사한 결과 U2OS 세포 특이적으로 dhfr cyclin E의 mRNA 발현과 단백질 발현이 크게 증가하였지만, cyclin A의 발현은 감소하였다. U2OS 세포에서 dhfr promoter construct에 대한 전사활성을 검사한 결과, TSA 처리는 dhfr promoter 영역으로부터 E2F 결합부위를 제거시킨 DHFR-Spl-luc를 통하여 dhfr promoter활성이 약 14배 증가되었다, 그러나 dhfr promoter 영역으로부터 Spl 결합부위를 제거시킨 DHFR-E2F-luc 영역을 포함하고 있는 promoter 활성은 TSA 처리에 의해 크게 증가되지 않았다. 본 연구에서 이러한 결과는 HDACI이 Spl을 통하여 dhfr promoter활성을 제어한다는 사실을 입증하였다. 한편 TSA는 U2OS 세포에서 HDAC의 활성을 통해서 세포주기 관련 인자들 가운데서 Gl 후기부터 활성화되는 대표적인 인자들인 dhfr과 cyclin E의 발현을 증가시키지만 G2 기에서 활성화되는 대표적인 인자인 cyclin A의 발현을 억제하는 상반된 기능을 가지고 있다는 사실을 확인하였다. The dihydrofolate reductase (dhfr) promoter contains cis-acting element for the transcription factors Spl and E2F. Transcription of dhfr gene shows maximal activity during the Gl/S phase of cell cycle. The member of the Spl transcriptional factor family can act as both negative and positive regulators of gene expression. There was a report that Spl-Rb and E2F4-pl30 complexes cooperate to establish stable repression of dhfr gene expression in CHOC400 cells. Here, we examined the role of HDAC in dhfr, cyclin E, and cyclin A gene regulation using the histone deacetylation inhibitor, trichostatin A (TSA) in U2OS and C33A cells, a Rb-positive human osteosarcoma cell line, and a Rb-negative cervical carcinoma cell line, respectively. When the dhfr promoter constructs were applied in U2OS cells, TSA markedly stimulated over 14-fold of dhfr promoter activity through dhfr-Spl sites by the deletion of an E2F element. In contrast, the deletion of dhfr-Spl binding sites completely abolished promoter stimulation by TSA. The dhfr promoter activity including dhfr-Spl sites increased only 2-fold in C33A cells. Promoter activity containing only dhfr-E2F site did not have much effect by the treatment of TSA in both U2OS and C33A cells. On the other hand, treatment with TSA induced significantly mRNA expression of dhfr and cyclin E, whereas levels of cyclin A decreased in U2OS cells, but had no effect in C33A cells. These results indicate that TSA have contradictory effect, activation of dhfr and cyclin E genes on Gl phase, and down-regulation of cyclin A on G2 phase through transcriptional regulation in U2OS cells.

Disulfiram에 의한 type IV collagenase 저해효과

신두일,박재복,박관규,조창호,오훈규,최창혁,조현지,장영채,Sin, Doo-Il,Park, Jae-Bok,Park, Kwan-Kyu,Cho, Chang-Ho,Oh, Hoon-Kyu,Choi, Chang-Hyuk,Cho, Hyun-Ji,Chang, Young-Chae 한국생명과학회 2006 생명과학회지 Vol.16 No.6

기질의 침윤과 전이를 특징으로 하는 악성종양 세포는 세포외 기질이나 기저막에 의존적으로 작용한다. 세포외 기질을 분해하는 효소인 matrix metalloproteinase (MMP) 계들의 발현 및 활성증가는 대부분의 악성종양세포에서 전이와 침윤을 촉진시킨다. MMP family 가운데 특히 type IV collagenase 활성을 지닌 MMP-2와 MMP-9은 세포외기질의 중요한 구성분인 collagen, fibronectin을 분해하는 특성을 가지며 암 전이를 용이하게 하는 주요한 효소로 잘 알려져 있다. 본 연구에서는 항암후보물질인 disulfiram이 골 육종 (U20S), 신장암 (Caki-1) 및 자궁암 (Caski) 세포에서 MMP-2와 MMP-9의 효소활성 및 발현억제에 대해 조사하였다. MTT assay를 이용하여 disulfiram에 대한 암세포 viability 실험에서는 disulfiram이 암세포의 viability를 저해하였다. 또한 zymography, western blot 및 RT-PCR 등을 이용한 type IV collagenase의 활성 및 발현 실험에서 disulfiram은 type IV collagenase의 활성을 비롯하여 단백질 및 mRNA 발현을 억제시키는 것을 확인하였다. 따라서 disulfiram이 MMP-2와 MMP-9의 활성 및 발현 억제 기전을 통하여 골 육종, 신장암 및 자궁경부암 세포의 작용을 억제한다는 연구 결과는 disulfiram이 각종 악성종양의 침윤과 전이를 억제 또는 방지하기 위한 치료물질로서 임상에서 활용할 수 있는 가능성을 보여준다. The cancer cells, characterized by local invasion and distant metastasis, are very dependant on extracellular matrix. The expression of matrix metalloproteinases (MMPs) has been implicated in the invasion and metastasis of cancer cells. Among the human MMPs, matirx metalloproteinase-2 (MMP-2) and matrix metalloproteinse-9 (MMP-9) are key enzymes that degrade type IV collagen of the matrix. Here, we studied the effect of disulfiram, an anti-tumor compound, on the suppression of the tumor invasion and the activity of MMP-2, MMP-9 in human osteosarcoma cells (U2OS). Disulfiram had the type IV collagenase inhibitory activity, the effect of inhibition of gene and protein expression, and these inhibitions were responsible for blocking invasion through cell mediated and non-cell mediated pathways. In conclusion, disulfiram inhibited expression of MMP-2 and MMP-9, and regulated the invasion of U2OS, Caki-1 and Caski. These observations raise the possibility of clinical therapeutic applications for disulfiram used as a potential inhibitor of cancer invasion.

어린이 교통사고 저감을 위한 정책 제언

장석용 ( Jang Seok-yong ),이두희 ( Lee Doo-hee ),장영채 ( Chang Young-chae ) 한국도로교통공단 2014 교통안전연구 Vol.33 No.-

우리나라의 어린이 교통사고 사망자는 정부의 강력한 예방 정책 마련 및 시행을 통해 2005년 250여명에서 2012년 83명으로 7년 만에 70%를 줄였다. 하지만 2011년 이후 가시적인 저감효과가 나타나지 않고 답보상태에 머무르고 있다. 이러한 상황에서 어린이 교통사고 통계와 국내외 정책분석 등을 통해 추가적인 어린이 교통사고 저감을 위한 정책적 제언을 다음과 같이 제시할 수 있었다. 첫째, 『어린이ㆍ노인ㆍ장애인 보호구역 지정 및 설치에 관한 규정』에 의해 스쿨존으로 지정될 수 있는 장소들에 대해서는 조속한 예산 마련을 통해 교통안전 시설물 설치와 함께 법률적 보호. 둘째, 정규 교과 교육으로 어린이 교통안전교육 진행. 셋째, 교통안전 담당 교사제 법제화와 함께 사범대 및 교육대학에 교통안전 과목 신설로 교통안전 관련 전문성 제고. 넷째, 어린이 교통안전 교육을 운전면허 응시자교육 제도와 연계하여 초·중·고교에서 이수하는 교통안전교육으로 운전면허 응시전 교육을 대체. 다섯째, 워킹 스쿨버스 드라이버(어린이 교통안전 지도사) 법제화 및 전국적 시행. 여섯째, 교통안전 체험교육을 진행하는 교통공원 확충을 통한 체험형 교육의 확대 Children traffic fatalities of korea had been reduced by 70%, from 250 people in 2005 to 82 people in 2012 within seven years due to strong prevention policies and Implement by the government. But since 2011, the reduction effect has not been visible. In this situation, policy proposals for the additional reduction of children traffic accidents through the analysis of statistics, domestic and foreign policies are presented as follows. first, In『Children/Elderly/disabled protective installing regulations』, It might be specified by the school zones are to prepare the budget for the installation of traffic safety facilities and legal protection. second, the Regular curriculum including children traffic safety Education Program. third, New traffic safety course at the college of education to improve traffic safety expertise. fourth, Replacement of driver's license applicants education system to traffic safety education training to elementary, middle and high school completed a traffic safety education training connected to drivers' licence system. fifth, Legislation of Walking School Bus Driver (Kids Transportation Safety Instructor) and implement on the national scale. sixth, Expansion of Traffic safety education experience by the expansion of hands-on training.