Toluene Tolerance in Solvent Tolerant Pseudomonas sp. Strains By Antioxidant Defense Systems

Woo Hong Joo(주우홍),Hye Jung Choi(최혜정),Da Som Kim(김다솜),Yong-Kweon Cho(조용권),Dong Wan Kim(김동완) 한국생명과학회 2019 생명과학회지 Vol.29 No.12

유기용매 내성세균들이 항산화 방어시스템에 의하여 독성 유기용매로부터 자신을 보호하는지를 밝히기 위해 두 균주의 유기용매 내성 세균에서 항산화 효소 활성과 총 항산화능(T-AOC)을 조사하였다. 톨루엔 농도 100 mg/l에서 유기용매 내성세균 BCNU 106의 슈퍼옥사이드 디스무타아제(SOD) 레벨은 상대적으로 증가하였으며, 유기용매 내성세균 BCNU 171의 경우에는 톨루엔 농도 200 mg/l에서 상대적으로 증가하였다. 톨루엔 농도 200와 300 mg/l에서 유기용매 내성세균 BCNU 106에서 카타라제(CAT) 레벨이 3배 이상 증가함이 확인되었고, BCNU 171에서는 CAT 레벨이 2배 이상 증가함이 확인되었다. 또한 유기용매 내성세균에서 글루타치온 S- 전이효소(GST) 레벨이 높은 것으로 조사되었다. 총 항산화능도 유기용매에 대하여 내성을 보이지 않는 일반 세균인 KACC 10266보다 유기용매 내성세균들에서 높은 것으로 조사되었다. 한편 톨루엔 농도 200 mg/l 존재 하에서 BCNU 171 균주의 SOD 레벨은 1시간 후 정점에 도달하였다. BCNU 106에서 1시간과 14시간 후 CAT 레벨이 정점에 도달하였고, BCNU 171균주에서는 3시간 후 정점에 도달하였다. T-AOC 레벨의 정점은 BCNU 106에서는 톨루엔에 노출 9시간 후에 나타났으며, BCNU 171에서는 1시간과 9시간 후 두 번 T-AOC 레벨의 정점이 나타났다. 모든 유기용매 내성 세균은 왕성한 항산화 방어 반응을 보였으며, 이러한 항산화 방어 시스템을 통하여 유기용매 내성세균이 유기용매를 비롯한 가혹한 환경하에서 생존할 수 있는 것으로 판단된다. To elucidate whether or not solvent-tolerant bacteria use anti-oxidative defense systems to defend themselves against toxic solvents, oxidative enzyme activity and total anti-oxidative capacity (T-AOC) were investigated in two tolerant strains of Pseudomonas sp. under toluene stress. The superoxide dismutase (SOD) activities of solvent tolerant BCNU 106 exhibited relatively increased levels at a toluene concentration of 100 mg/l, where those of solvent tolerant BCNU 171 increased at 200 mg/l. A greater than three-fold increase in catalase (CAT) levels was observed at concentrations of 200 and 300 mg/l in BCNU 106, and a two-fold increase was monitored at the same concentrations in BCNU 171. High glutathione S-transferase (GST) levels were also observed in the solvent tolerant bacteria. Higher levels of T-AOC was expressed in the solvent tolerant strains than in the ordinary non-tolerant KACC 10266. The highest plateau of SOD in BCNU 171 was observed at 1 hr of toluene exposure. CAT levels plateaued at 1 hr and 14 hr in BCNU 106 and reached the highest plateau at 3 hr in BCNU 171. The highest peak of T-AOC occurred at 9 hr in BCNU 106, and two high peaks occurred in BCNU 171, at 1 hr and at 9 hr of toluene exposure. The solvent-tolerant bacteria showed active antioxidant responses and could survive under harsh environments, including the presence of solvents, through means of antioxidant defense systems.

유기용매 내성 리파아제와 그 이용가능성

주우홍(Woo Hong Joo) 한국생명과학회 2017 생명과학회지 Vol.27 No.11

본 총설에서는 유기용매 내성 리파아제와 그들의 산업, 생물공학 및 환경에서의 잠재적인 영향에 대하여 서술하고자 한다. 유기용매 내성 리파아제는 유기용매 내성 세균에서 처음 보고되었으나, 많은 유기용매 내성 리파아제들이 유기용매 내성 세균 뿐만 아니라 잘 알려진 Bacillus, Pseudomonas, Streptomyce 그리고 Aspergillus sp. 균주같은 유기용매 비내성 세균 그리고 균류 균주들에서도 보고되고 있다. 이들 리파아제들은 유기용매에서 쉽게 불활성화되지 않기 때문에 유기용매에 의한 효소 불활성화를 방지하기 위하여 별도로 그들을 고정화할 필요가 없다. 그러므로 다수의 생물공정 및 생물변환 공정에서 이용될 수 있는 잠재적인 유용성을 가지고 있다. 이들 유기용매 내성 리파아제들을 사용하면, 유기용매계 또는 비수계에서 다수의 불용성 기질들의 용해도가 증가하며, 수계에서는 불가능한 다양한 화학반응들이 일어나고, 가수분해 대신에 합성반응이 일어나며, 물에 의한 부반응이 억제되며, 화학, 위치 그리고 엔안티오(대칭) 선택성(chemo, regio and enantioselective) 변환반응의 가능성이 증가한다. 나아가 고정화하지 않아도 효소의 회수와 재이용이 가능하며, 유기용매계와 비수계에서는 리파아제의 안정성이 더 좋아지는 경향도 있다. 그러므로 유기용매 내성 리파아제는 유기용매계와 비수계를 이용한 생물변환공정에 생물촉매로써 그들을 이용가능하다는 점에서 많은 주목을 받고 있다. This review described solvent-tolerant lipases and their potential industrial, biotechnological and environmental impacts. Although organic solvent-tolerant lipase was first reported in organic solvent-tolerant bacterium, many organic solvent-tolerant lipases are in not only solvent-tolerant bacteria but also solvent-intolerant bacterial and fungal strains, such as the well-known Bacillus, Pseudomonas, Streptomyces and Aspergillus strains. As these lipases are not easily inactivated in organic solvents, there is no need to immobilize them in order to prevent an enzyme inactivation by solvents. Therefore, the solvent-tolerant lipases have the potential to be used in many biotechnological and biotransformation processes. With the solvent-tolerant lipases, a large number insoluble substrates become soluble, various chemical reactions that are initially impossible in water systems become practical, synthesis reactions (instead of hydrolysis) are possible, side reactions caused by water are suppressed, and the possibility of chemoselective, regioselective and enantioselective transformations in solvent and non-aqueous systems is increased. Furthermore, the recovery and reuse of enzymes is possible without immobilization, and the stabilities of the lipases improve in solvent and non-aqueous systems. Therefore, lipases with organic-solvent tolerances have attracted much attention in regards to applying them as biocatalysts to biotransformation processes using solvent and non-aqueous systems.

유기용매 내성 세균과 이용가능성

주우홍(Woo Hong Joo) 한국생명과학회 2015 생명과학회지 Vol.25 No.12

유기용매 내성 세균의 첫 분리 보고 이후 다수의 유기용매 내성 세균들이 토양 폐수 심지어 심해 등 모든 환경에서 분리 보고되고 있다. 대부분의 유기용매 내성 세균은 그람음성세균으로 이는 그람음성 세균이 그람양성 세균 보다 유전적으로 더 내성을 보이기 때문이다. 유기용매 내성 기전은 유기용매 내성 그람음성 세균을 주로 사용하여 집중적으로 구명되어왔다. 유기용매 내성 그람양성 세균의 유기용매 내성 기전은 비교적 최근 연구에서 발견되고 있다. 유기용매는 용매에 따라 다른 독성을 보이며 유기용매 내성세균의 유기용매 내성 수준은 종과 균주에 의존적으로 매우 변화가 심하다. 그러므로 유기용매 내성세균은 다양한 변인과 다유전자에 의한 적응 전략에 의하여 용매독성과 싸우며 용매 스트레스에 적응할 수 있다. 그들은 세포형태 및 세포 행동에서의 변화, 세포표층의 수식, 세포막 적응, 용매 배출 펌프, 샤페론 그리고 항산화 반응 등의 기전을 통하여 유기용매의 과량의 농도에서도 생존할 수 있다. 본 총설에서는 대표적인 유기용매 내성 세균, 유기용매 내성 세균에서의 유기용매에의 적응 및 내성 전략들 나아가 그들의 산업적 및 환경공학적인 잠재적인 영향에 대하여 개관하고자 한다. Many organic solvent-tolerant bacteria have been isolated from all environments such as soil, wastewater, even deep sea after first isolation report of organic solvent-tolerant bacterium. Most organic solvent- tolerant isolates have been determined to be Gram-negative bacteria, because Gram-negative bacteria have inherent tolerance property toward hostile organic solvents more than Gram-positive bacteria. The mechanisms of organic solvent tolerance have been elucidated extensively using mainly organic solvent-tolerant Gram-negative bacteria. The solvent-tolerance mechanisms in Gram-positive bacteria can be found in comparatively recent research. Organic solvents exhibited different toxicity depending on the solvent, and the tolerance levels of organic solvent-tolerant bacteria toward organic solvents were also highly changeable among species and strains. Therefore, organic solvent-tolerant bacteria could coped with solvent toxicity and adapted to solvent stress through the multifactorial and multigenic adaptative strategies. They could be survived even in the hyper concentrations of organic solvents by mechanisms which include: changes in cell morphology and cell behaviour, cell surface modifications, cell membrane adaptations, solvent excretion pumps, chaperones and anti-oxidative response. The aim of this work is to review the representative solvent tolerant bacteria and the adaptative and tolerance strategies toward organic solvents in organic solvent-tolerant bacteria, and their potential industrial and environmental impact.

유기용매 내성 세균 Pseudomonas sp. BCNU106 균주에서 차별적으로 상향 발현되는 유전자군의 톨루엔 내성과의 연관성

주우홍(Woo Hong Joo),배윤위(Yun-Ui Bae),김다솜(Da Som Kim),김동완(Dong Wan Kim) 한국생명과학회 2020 생명과학회지 Vol.30 No.1

유기용매 내성 세균인 Pseudomonas sp. BCNU 106을 10%(v/v) 톨루엔에 노출시킨 후 8시간 동안 random arbitrarily primed polymerase chain reaction (RAP-PCR)기법을 이용하여 메신져 RNA 발현 레벨을 조사하였다. 총 100개의 상향발현된 발현 산물 중에서 50개의 상보적인 단편들이 반복적으로 재현성있게 발현되는 것으로 확인되어, 이들을 클로닝을 하였으며 나아가 유전자 염기서열을 결정하였다. Blast analysis 결과, 톨루엔은 LysR family transcriptional regulator 그리고 RNA polymerase factor sigma-32같은 전사와 관련된 유전자들의 발현 레벨을 적응적으로 증가시키는 것으로 확인되었다. 그리고 톨루엔 스트레스 존재 하에서 inorganic ion 수송과 대사와 관련된 catalase와 Mn<SUP>2+</SUP>/Fe<SUP>2+</SUP> transporter 유전자의 발현이 증가되었으며, 신호전달과 대사와 기능적으로 관련된 type IV pilus assembly PilZ와 multi-sensor signal transduction histidine kinase 유전자들의 발현 증가도 확인되었다. 한편 톨루엔 노출 후 탄수화물 수송과 대사와 관련된 beta-hexosaminidase 유전자발현 레벨이 증가하였다. 나아가 DNA polymerase III subunit epsilon, DNA-3-methyladenine glycosylase II와 DEAD/DEAH box helicase domain-containing 유전자들과 같은 DNA 복제, 재조합 그리고 수복에 관련성이 있는 유전자들의 발현 레벨 그리고 심지어는 ABC transporter 유전자와 같은 방어 메커니즘에 관련성이 있는 유전자들의 발현 레벨이 적응적으로 증가되는 것으로 밝혀졌다. 특히 10% 톨루엔 존재하에서 ABC transportor, Mn<SUP>2+</SUP>/Fe<SUP>2+</SUP> transporter 및 β-hexosaminidase 유전자에 해당하는 RNA들이 괄목하게 유도되는 것이 확인되었다. 그러므로 유기용매 내성 세균 Pseudomonas sp. BCNU 106이 유기용매에 대하여 내성을 나타내는데 있어서 방어 메커니즘, 세포내 이온 항상성 그리고 바이오 필름 형성이 필수적인 것으로 확인되었다. Using a random arbitrarily primed polymerase chain reaction, messenger RNA expression levels were assessed after exposure to 10% (v/v) toluene for 8 hr in solvent-tolerant Pseudomonas sp. BCNU 106. Among the 100 up-expressed products, 50 complementary DNA fragments were confirmed to express repeatedly; these were cloned and then sequenced. Blast analysis revealed that toluene stimulated an adaptive increase in the gene expression level in association with transcriptions such as LysR family of transcriptional regulators and RNA polymerase factor sigma-32. The expression of catalase and Mn2+/Fe2+ transporter genes functionally associated with inorganic ion transport and metabolism increased, and the increased expression of type IV pilus assembly PilZ and multi-sensor signal transduction histidine kinase genes, functionally categorized into signal transduction and mechanisms, was also demonstrated under toluene stress. The gene expression level of beta-hexosaminidase in association with carbohydrate transport and metabolism increased, and those of DNA polymerase III subunit epsilon, DNA-3-methyladenine glycosylase II, DEAD/DEAH box helicase domain-containing protein, and ABC transporter also increased after exposure to toluene in DNA replication, recombination, and repair, and even in defense mechanism. In particular, the RNAs corresponding to the ABC transporter, Mn2+/Fe2+ transporter, and the β-hexosaminidase gene were confirmed to be markedly induced in the presence of 10% toluene. Thus, defense mechanism, cellular ion homeostasis, and biofilm formation were shown as essential for toluene tolerance in Pseudomonas sp. BCNU 106.

Methanoplanus limicola S-Layer 당단백질 2차원 결정의 구조적 특성

정강원,곽대오,주우홍,Cheong, Gang-Won,Kwack, Dae-Oh,Joo, Woo-Hong 한국현미경학회 1994 Applied microscopy Vol.24 No.1

A thin section of the methanogenic archaebacterium, Methanoplanus limicola, shows that the surface glycoprotein array (S-layer) is separated from plasma membrane by a distinct inter-space, approximately 4.0-6.0nm wide. We report our structural study of the S-layer by electron crystallographic techniques. Image analysis and thin sections of the S-layer treated with and without triton disclosed that retention of the single layer crystal requires the presence of detergent to avoid hydrophobic bonding.

18S 리보좀 RNA 부분 염기서열 분석에 의한 효모성 균류의 분자계통학적 연구

정수진,신용국,주우홍,이재동 ( Soo Jin Jung,Yong Kook Shin,Woo Hong Joo,Jae Dong Lee ) 한국균학회 1995 韓國菌學會誌 Vol.23 No.4

장염비브리오 항균활성을 위한 탱자와 매실의 추출조건 최적화

이영근,최영환,주우홍,Lee, Young-Guen,Choi, Young-Whan,Joo, Woo-Hong 한국생명과학회 2006 생명과학회지 Vol.16 No.4

비브리오식중독의 피해를 저감시키는 기능성 식품소재를 개발하기 위하여, 예비실험에서 V. parahaemolyticus균에 항균활성이 우수한 것으로 밝혀진 탱자와 매실의 최적 추출조건을 조사하였다. 먼저, 열수로 추출한 실험에서 탱자의 최적 조건은 $80{\sim}100^{\circ}C$에서 30분간, 매실의 경우 $100^{\circ}C$에서 30분간 가열 추출한 시험액의 저지환이 각각 14.8 및 16.6 mm로써, 최대의 항균활성을 나타내었다. 또한 NaOH, $K_2CO_3$ 및 $NaHCO_3$의 알칼리 식품첨가물을 첨가하여 추출한 실험에서, NaOH를 첨가한 경우 탱자의 항균활성은 증진되지 않았으나 매실의 항균활성은 다소 증진되었으며, NaOH 이외 알칼리들은 공시 식물체들의 항균활성을 감소시켰다. NaOH의 첨가농도를 단계적으로 달리하고 80, 100 및 $120^{\circ}C$에서 추출한 결과, 탱자의 경우 앞서의 열수추출 결과와 별다른 차이가 없었으나, 매실은 NaOH를 0.05N 농도로 첨가하고 $120^{\circ}C$ 에서 추출한 조건에서 저지환 직경 19.9 mm의 최대 항균활성을 나타내었다. 탱자와 매실을 주정으로 진탕추출하고 주정을 제거하여 주정추출물을 얻었다. 이 추출물에 NaOH를 단계적으로 첨가하고 $100^{\circ}C$에서 30분간 물로 재추출한 결과, 주정추출물의 항균활성은 전반적으로 물추출한 결과보다 낮고 NaOH의 첨가량이 많을수록 활성의 감소를 나내었다. 따라서 본 실험에서, 탱자의 최적추출조건은 $80{\sim}100^{\circ}C$의 열수로 30분간, 매실은 NaOH를 0.05N 농도로 첨가한 $120^{\circ}C$의 열수로 30분간 추출하는 것이 가장 효율적이라는 결론을 얻었다. The present investigation was carried out particularly to optimize the extraction process of Poncirus trifoliata and Prunus mume to develop a functional foodstuff having antibacterial activity against Vibrio parahaemolyticus. The extracts were prepared from the fruits under various conditions, and then optimum extraction conditions were decided in case maximal antibacterial activity was obtained. In extraction process by using hot water, the best antibacterial activity of Poncirus trifoliata was achieved at $80{\sim}100^{\circ}C$ for 30 min, while that of Prunus mume was achieved at $100^{\circ}C$ for 30 min, as showing 14.8 and 16.6 mm of inhibition diameter, respectively. The extraction process with addition of NaOH increased the activity of Prunus mume, but addition of $K_2CO_3$ and $NaHCO_3$ drastically decreased the activity. In the processes at high temperature up to $120^{\circ}C$ by using pressure extractor and with various concentrations of NaOH, the maximum activity was observed in the extract of Prunus mume at $120^{\circ}C$ for 30 min with 0.05 N NaOH. The fermented ethanol extract of the fruits showed less activity than those of the extracts with water and NaOH solution.

Simian virus 40의 T항원 도입으로 수립한 지방유래줄기세포주의 효율적인 무혈청 배양법 및 무혈청 배지조성

김규빈(Gyu Bin Kim),주우홍(Woo Hong Joo),김동완(Dong Wan Kim) 한국생명과학회 2014 생명과학회지 Vol.24 No.12

지방유래줄기세포(adipose-derived stem cell; ADSC)는 조직재생을 위한 탁월한 수단으로 인정되고 있으나 세포증식속도가 느려 ADSC의 배양용 배지에는 대게 fetal bovine serum (FBS)이 첨가된다. FBS는 세포에 다양한 영양분을 공급하지만 세포의 기능에 영향을 미칠 수 있는 미 동정 물질도 많이 함유하고 있다. FBS에 의한 예상 밖의 영향과 동물유래물질의 오염을 방지하기 위해 ADSC의 무혈청 배양법에 관한 연구가 광범위하게 이루어지고 있다. 본 연구에서는 ADSC세포에 SV40의 T항원 유전자를 도입하여 증식속도를 향상시킨 ADSC-T세포주의 효율적인 무혈청 배양법을 확립하기 위해 ADSC-T의 세포증식에 미치는 아미노산복합체, 비타민 복합체 및 여러가지 영양분 혼합물(B27)의 영향을 검토하였다. 그 결과, ADSC-T세포를 DMEM/F12 무혈청 배지에 현탁하여 plate에 주입하였을 때는 증식하지 않았으며 아미노산, 비타민 및 B27 영양소복합체는 증식촉진효과를 나타내지 않았다. 그러나 ADSC-T세포를 유혈청 DMEM배지로 24시간 배양 후 DMEM/F12 무혈청 배지로 교체하여 배양했을 때는 세포가 증식하였으며 이때, 비타민 복합체와 B27 영양소복합체는 증식촉진효과를 나타내었다. 또한 Stem pro 배지를 이용하면 ADSC-T의 무혈청 부유배양이 가능한 것으로 나타났다. ADSC-T세포는 분자량 70kDa 부근의 단백질을 다량으로 분비하였으며, 성장인자 중에서 insulin-like growth factor (IGF)와 fibroblast growth factor basic (FGF basic)는 유혈청 배양보다 무혈청 배양에서 더 많이 분비되었다. Adipose-derived stem cells (ADSCs) are considered promising tools for tissue regeneration. However, ADSCs have very poor proliferation capacity. Therefore, fetal bovine serum (FBS) is generally added to the culture media of ADSCs. As FBS contains many uncharacterized components that may affect cellular functions, methods for serum-free cultures of ADSCs have been widely investigated. In this study, to develop an efficient method for a serum-free culture of ADSC-T, we used an ADSC line established by introducing the simian virus 40 (SV40) T gene into primary ADSCs. We then investigated the effect of amino acids, vitamins, and other components on the growth of ADSC-T. When the ADSC-T cells were plated with DMEM/F12 serum-free medium, the cells did not proliferate, and the mixture of amino acids, vitamins, and B27 supplement did not increase the growth of the cells. However, when the ADSC-T cells were provided with serum-free DMEM/F12 after they had been cultured with serum-supplemented DMEM for 24 h, the cells proliferated, and the vitamins and B27 supplement increased the cell growth. Stem-Pro serum-free medium also appeared to be useful as a suspension culture for the ADSC-T cells. The ADSC-T cells secreted large amounts of proteins of around 70 kDa. Insulin-like growth factor (IGF) and fibroblast growth factor basic (FGF basic) were secreted by ADSC-T in larger amounts in the serum-free culture than in the serum-supplemented culture.

Bacillus atrophaeus DYL-130이 생산하는 biosurfactant의 분리 및 특성

김선희,이상철,박인혜,유주순,주우홍,황철원,최용락,Kim Sun-Hee,Lee Sang-Cheol,Park In-Hye,Yoo Ju-Soon,Joo Woo-Hong,Hwang Cher-Won,Choi Young-Lark Korean Society of Life Science 2005 생명과학회지 Vol.15 No.5

원유 분해능이 강력한 균주를 얻고자 덕유산의 토양으로부터 crude oil을 탄소원으로 이용하는 수십 종을 분리하였다. 분리된 균주 중 원유분해능 및 biosurfactant 생성능이 우수한 균주를 선별하여, 형태학적 특성을 관찰하고 165 rDNA sequence와 』gyrA gene sequence를 통하여 Bacillus atrophaeus DYL-130으로 동정하였다. 동정된 균주 배양액의 표면장력은 최저 28 mN/m까지 감소되었다. 또한 Bacillus atrophaeus DYL-130이 생산하는 biosur-factant가 column chromatography에 의하여 분리 되었으며, 분리된 biosurfactant의 toluene 유화능 및 crude biosurfactant의 유화활성과 안정성이 시험 되었다. Crude biosurfactant의 유화활성은 kerosene에서 최대였으며, soybean oil에서도 높은 편이였으나 유화안정성의 경우 soybean oil을 기질로 하였을 경우가 kerosene을 기질로 하였을 때 보다 우수하였다. 또한 crude biosurfactant의 유화안정성을 합성계면활성제와 비교 한 결과 DYL-130이 생산하는 biosurfactant의 유화안정성이 합성계면활성제와 유사하거나 뛰어남을 확인하였다. Column chroma-tography에 의하여 분리된 biosurfactant는 drop-collapsing method에 의하여 surface-activity가 확인 되었으며 또한 toluene에 대한 유화력이 매우 뛰어난 것을 확인 하였다. 따라서 DYL-130에서 추출한 biosurfactant는 합성계면활성제를 대체할 수 있는 환경친화적인 생물 계면활성제로 사용될 수 있는 가능성을 보여주고 있다. 산업적으로 이 물질을 이용하기 위해서 Bacillus atrephaeus DYL-130이 생산하는 biosurfactant에 대한 구조분석과 물리 화학적 특성, 생분해도 및 환경독성 등의 조사를 수행하여야 할 것으로 생각된다. The objective of this study was investigate the characteristic of biosurfactant produced from the iso-lated strain. The strain was isolated from soli samples of Duck-Yu Mountain and it was identified as Bacillus atrophaeus DYL-130 by 16S rDNA and gyrA gene nucleotide sequence analysis. The surface ten-sion of culture filtrate of Bacillus atrophaeus DYL-130 decreased to 28 mN/m and its biosurfactant con-centration was determined by diluting the culture filtrate until the critical micelle concentration (CMC). The emulsifying activity and stability of crude biosurfactant was measured by using water-immiscible hydrocarbons and oils as substrate. The biosurfactant was purified by affinity chromatography and the surface activity of purified biosurfactant was measured by drop-collapsing method and it could be effectively emulsify toluene.

미생물의 DNA 염기조성과 분류학적 의의

신용국,이정숙,김홍중,주우홍,이재동,박용하,Shin, Yong-Kook,Lee, Jung-Sook,Kim, Hong-Joong,Joo, Woo-Hong,Lee, Jae-Dong,Park, Yong-Ha 한국생명과학회 1996 생명과학회지 Vol.6 No.1