일부 한약재의 동종항원에 대한 세포증식 및 살세포반응 억제효과

정영란(Young-Ran Jeong),하미혜(Mee-Hye Ha),김성호(Sung-Ho Kim),조성기(Sung-Kee Jo),변명우(Myung-Woo Byun),조현욱(Hyun-Wook Cho),서권일(Kwon-Il Seo),이성태(Sung-Tae Yee) 한국식품영양과학회 2000 한국식품영양과학회지 Vol.29 No.6

본 실험에서는 동양에서 예로부터 민간요법이나 한방에서 주로 많이 쓰여지고 있는 8가지 종류의 한약재에 대해서 면역억제제로써 사용 가능성을 실험하였다. 그 결과 당귀, 산사, 어성초, 오가피, 황기의 추출물은 동종항원에 반응하는 순수분리 T세포의 증식을 농도 의존적으로 억제시켰다. 또한 이들 T세포의 증식에 있어서 필수적인 IL-2를 포함한 cytokine 즉, IL-2, IL-4, IL-10, IFN-γ의 생산량은 대조군에 비해 실험군에서 유의한 차이가 없었고 특히 T세포 증식에 필수적인 IL-2의 생산량의 변화가 거의 없었다. 이는 한약재에 의한 T세포의 증식억제 효과가 T세포증식에 필수적인 IL-2의 생산량을 억제하기 때문에 일어나는 결과가 아님을 알 수 있었다. 그리고 T세포의 살세포작용 억제를 직접적으로 측정하기 위하여 세포내 LDH의 양을 조사한 결과 모든 대조군에서 50%이상의 살세포작용 억제가 일어났고, 그중 특히 오가피와 황기에서는 100% 살세포작용 억제가 일어났다. 따라서 본 실험에 사용된 당귀, 산사, 어성초, 오가피, 황기 등의 5가지 약재가 부작용 없는 면역억제로써 사용 가능성이 높은 것으로 생각된다. In this experiment, we showed the immunosuppressive effects of herbal plant extracts on the alloantigen reactive proliferation and cytotoxicity. The extracts of Angelica gigas, Crataegus pinnatifida, Houttuynia cordata, Acanthopanax sessiliflorum and Astragalus membranaceus markedly suppressed on the pro- liferation of primary T cells stimulated with allogeneic spleen cells in a dose-dependent manner. The production of IL-2, IFN-γ, IL-4 and IL-10 in the alloreactive primary T cells showed no significant difference in the presence or absence of herbal plants extracts. Also the result of mixed lymphocyte reaction (MLR)-induced cytotoxic T lymphocyte (CTL) showed what is above a certain point 50% inhibition. Specially, the extracts of Acanthopanax sessiliflorum and Astragalus membranaceus com- pletely suppressed the killing activity of CTL. Theses results suggest that the extracts of 5 herbal plants can be used as immunosuppressive agents.

일부 한약재의 생쥐 대식세포 일산화질소와 TNF - α생산 유도

이성태(Sung-Tae Yee),정영란(Young-Ran Jeong),하미혜(Mee-Hye Ha),김성호(Sung-Ho Kim),변명우(Myung-Woo Byun),조성기(Sung-Kee Jo) 한국식품영양과학회 2000 한국식품영양과학회지 Vol.29 No.2

본 실험에서는 일산화질소(nitric oxide)와 TNF-α생산에 미치는 8가지 종류의 한약재를 조사하였다. 생쥐 대식세포주(RAW264.7)에 한약재 추출물인 당귀, 어성초, 오가피, 황기 등 4가지 종류의 한약재를 IFN-γ와 처리했을 때 NO와 TNF-α생산은 IFN-γ와 추출물 농도에 의존적으로 유도되었지만, 이들 한약재만을 단독으로 처리했을 때는 NO와 TNF-α생산을 유도하지 못하였다. 이런 결과는 세포주가 아닌 복강 대식세포에서도 동일하게 NO와 TNF-α생성에 대한 상승효과가 나타났다. 최적 농도는 추출물이 100 μg/mL일 때, IFN-γ의 농도가 100 U/mL일 때였다. 그리고 NO 합성효소인 iNOS의 mRNA 발현양도 증가시켰다. 이때 IFN-γ와 추출물로 유도된 NO는 NOS 억제제인 N^GMMA에 의해 억제되었다. 이러한 추출물의 NO 생산 유도는 TNF-α 생산을 증가시킨 결과로 인한 간접적인 효과로 생각된다. 이상의 결과로 당귀, 어성초, 오가피, 황기 추출물을 IFN-γ와 동시에 처리하였을 때 생쥐 대식세포주와 복강 대식세포의 iNOS, NO,TNF-α합성를 유도하는 것으로 나타났다. In this experiment, we show the effects of herbal plant extracts on the production of nitric oxide (NO) and TNF-α. The extracts of Angelica gigas, Astragalus membranaceus, Acanthopanax sessiliflorus and Houttuynia cordata had no effect on NO synthesis by itself in mouse macrophage cell line (RAW264.7). However, the stimulation with these extracts in the presence of murine interferon-γ (mIFN-γ) resulted in increased NO synthesis. When these extracts were used in combination with mIFN-γ, there were a marked cooperative induction of NO and TNF-α synthesis in a dose-dependent manner. The same results were obtained in the mouse peritoneal macrophages used. The optimal concentration of these extracts on NO synthesis was shown at 100 μg/mL with 100 U/mL of mIFN-γ. NO synthesis was inhibited by N^G -monomethyl-L-arginine. When cell lines were treated with extracts, the expression of inducible NO synthetase (iNOS) was markedly increased in RT-PCR analysis. In addition, synergy between mIFN- γ and extracts was dependent on extracts-induced tumor necrosis factor-α (TNF-α). Theses results suggest that water extracts of herbal plants can induce iNOS, NO and TNF-α synthesis of mouse macrophage cell line (RAW264.7) and peritoneal macrophages in combination with mIFN-γ.

보중익기탕(補中益氣湯)의 T세포 증식 유도 효과

채수연(Su-Yeon Chae),신성해(Sung-Hae Shin),하미혜(Mee-Hye Ha),조성기(Sung-Kee Jo),김성호(Sung-Ho Kim),변명우(Myung-Woo Byun),이성태(Sung-Tae Yee) 한국식품영양과학회 2004 한국식품영양과학회지 Vol.33 No.7

먼저 OVA항원에 대해 특이적으로 증식반응을 나타내는 T세포주를 수립하였고, 수립된 세포주는 세포 표면 단백질이 CD4^+ CD8-이며 IL-2와 IFN-γ를 분비하는 Type I에 속하는 보조 T세포(Th1)인 것을 확인하였다. 보중익기탕의 total분획은 OVA항원에 대해 특이적으로 반응하는 Th1세포의 증식반응을 증가시키는 효과를 나타내지 않았으며 고농도에서 오히려 증식반응을 억제하였다. 그러나, 보중익기탕의 polysaccharide 분획은 전반적인 농도에서 T세포의 증식반응을 유의하게 증가시키는 효과가 있는 것으로 나타났다. 보중익기탕의 polysaccharide 분획을 첨가하였을 때 T세포의 IL-2 분비량은 대조군보다 약간 적었지만, IFN-γ 분비량은 대조군보다 증가하였다. 그리고, 분비된 IL-2와 결합하는 T세포의 IL-2 수용체 발현양도 증가하는 것으로 나타났다. 또한, 항원제시세포의 MHC class II의 발현양도 증가시켰다. 이상의 결과로 보중익기탕의 polysaccharide 분획은 T세포의 IL-2 수용체 발현양을 증가시키고, 항원제시세포의 MHC classs II의 발현양을 증가시켜서 T세포의 증식반응을 증가시키는 것으로 생각된다. 그리고 보중익기탕이 생체 면역반응에 미치는 보다 정확한 효과를 평가하기 위해서는 직접 살아있는 실험동물에 투여하는 in vivo 실험이 필요하다. Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang extracts is a traditional oriental medicine in a mixture type exhibiting strong anti-bacterial, analgesic, and chemopreventive activities. In this study, we have evaluated effects of the total and polysaccharide fraction of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang extracts on the T cell proliferation, cytokine production, and induction of IL-2 receptor and MHC class Ⅱ. For this experiment, we established CD4^+ CD8^- T cell line producing IL-2 and IFN-γ when stimulated with ovalbumin antigen in the presence of antigen presenting cells. The significant effect of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang on antigen-induced T cell proliferation in the presence of antigen presenting cells was observed. The proliferation and IFN-γ production of T cells was increased in a dose dependent manner, and expression of IL-2 receptor on T cells and MHC class II molecule on antigen presenting cells was also induced in the presence of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang polysaccharide fraction. It was demonstrated that polysaccharide fraction of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang stimulates the antigen-induced T cell proliferation and the production of IFN-γ possibly through the increase of IL-2 receptor and MHC class Ⅱ expression. Therefore Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang can be regarded as a natural and useful immunomodulator having a relatively nonotoxic property. Further studies are needed to better characterize the nature of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang extract.

보중익기탕(補中益氣湯)의 B세포 분화 유도 효과

신성해(Sung-Hae Shin),채수연(Su-Yeon Chae),하미혜(Mee-Hye Ha),조성기(Sung-Kee Jo),김성호(Sung-Ho Kim),변명우(Myung-Woo Byun),이성태(Sung-Tae Yee) 한국식품영양과학회 2004 한국식품영양과학회지 Vol.33 No.2

최근에 방사선 조사에 대해 방호효과를 가지는 것으로 알려진 보중익기탕의 골수세포 분화 유도 효과에 대해 관찰하였다. 시험관에서 골수세포를 배양했을 때, 배양시간(5일, 10일)에 따라 대조군의 세포 수는 현저히 감소하였고, 보중익기탕의 total 분획을 첨가하였을 때도 비슷한 결과를 얻었다. 그러나 polysaccaride 분획을 첨가하였을 때는 감소하는 세포수가 일정한 수준에서 유지되며 더 이상 감소하지 않았다. 그리고 이들 세포가 어떤 종류의 세포인지를 유세포분석기로 분석한 결과, Pre-B세포의 특징적인 세포 표면 단백질인 CD19와 CD40을 동시에 발현한 세포인 것이 확인되었다. 또한, 이들 세포는 분화과정이 끝난 B세포가 분비하는 IgM 뿐만 아니라 IgG1, G2a, G3를 분비하였다. 이상의 결과 보중익기탕의 polysaccaride 분획에 골수세포가 B세포로 분화 증식하는 것을 유도하는 성분이 포함되어 있어 방사선 조사로 상해를 입은 조혈계에 대한 방호 효과를 나타내는 것으로 생각된다. This study was designed to evaluate the effect of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang extracts, a prescription of traditional oriental medicine, on development of the B cells. In the bone marrow cell cultures, progenitors viability, expressions of particular cell-surface proteins and production of immunoglobulins were investigated in the presence of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang extracts. The administration of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang polysaccharide fraction increased the viable cell numbers of the precursor B cells, and elevated expression levels of CD19/CD40 specific for pre-B cells after 10 days culture were demonstrated by flow cytometry analysis. The production of immunoglobulin M in the presence of polysaccharide fraction increased progressively in the culture supernatant, and preferentially induced class switching to IgG1, IgG2a and IgG3. These results indicated that Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang strongly correlated with the development of precursor B cells in the bone marrow cell culture. Therefore the polysaccharide fraction of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang might be a useful radioprotector, especially since it is a relatively non-toxic natural product. Further studies are needed to better characterize the protective nature of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang extract.

당귀 추출물이 생쥐 유래 대식세포의 일산화질소 생산에 미치는 영향

조성기,하미혜,정영란,이성태,변명우 경산대학교 생명자원개발연구소 1999 생명자원과 산업 Vol.3 No.-

1. 당귀 물추출물 단독으로는 NO생성을 유도하지 못하였다. 2. 당귀 물추출물은 LPS 단독 또는 LPS와 IFN-γ에 의해 유도되는 NO생성을 증가시키지는 못하였다. 3. IFN-γ와 당귀 물추출물을 같이 처리하였을 경우 농도 의존적으로 NO생성을 유도하였다. 4. IFN-γ와 당귀 물추출물로 유도된 NO생성은 NOS 억제제인 ??에 의해 억제되었다. 5. 복강 대식 세포에서도 동일하게 IFN-γ와 당귀 물추출물의 NO생성에 대한 상승효과가 나타났다. In this study, the objective was to determene the effect of Angelica gigantis Radix-water extract on the production of nitric oxide(NO). Angelica gigantis Radix-water extract had no effect on NO synthesis by itself. However the stimulation of mouse macrophage cell line(RAW264.7) with Angelica gigantis Radix-water extract after the treatment of murine interferon-γ(mIFN-γ) resulted in increased NO synthesis. When Angelica gigantis Radix-water extract was used in combination with mIFN-γ, there was a marked co-operative induction of NO synthesis in a dose-dependent manner. The same results were obtained in the mouse peritoneal macrophages used. The optimal concentration of Angelica gigantis Radix-water extract on NO synthesis was shown 100㎍/mL with 100U/mL of mIFN-γ. NO synthesis was inhibited by ??-monomethyl-L-arginine. Angelica gigantis Radix-water extract was endotoxin free. Theses results suggest that Angelica gigantis Radix-water extract can induces NO synthesis of mouse macrophage cell line (RAW264.7) and peritoneal macrophages in combination with mIFN-γ

발생기 랫트의 췌장 내분비세포 소기관의 미세구조적 관찰

배기원,양영철,하미혜 인제대학교 1990 仁濟醫學 Vol.11 No.1

발생기 랫트 췌장의 내분비세포 중 B세포의 Golgi apparatus는 태생 18일(분비과립생성 시기)을 전후하여 그 미세구조가 변화하였는데, "rigid lamellae"는 태생 16일과 18일에 뚜렷하게 발달되어 있었으며 태생 16일에는 RER과 Golgi stacks의 tracts cisternae가 매우 근접하여 존재하였으나, 그 이후에는 그러한 관계가 나타나는 빈도가 매우 감소하였다. The Golgi apparatus of pancreatic B cell of rat embryo was studied during development from day 14 through day 20 of gestation. The morphological patters varied characteristically, first early, and second late in the production of secretory granules. 1.Day 16 of gestation was characterized by the pronounced system of the transmost "rigid lamellae" which were detached from the trans face of the Golgi stacks ; by contrast, in the terminal period of gestation, the "rigid lamellae" were sparse. 2.Day 16 of gestation was characterzied by the tight association of the rough endoplasmic reticulum and the trans face of Golgi stacks ; the close spatial relationship of two compartments was lessened after day 18 of gestation. Our results showed that the morphological patterns of the Golgi stacks of the developing pancreatic B cells varied in the course of embryonic cell differentiation. The variable morphological patterns of the Golgi stacks might be related to differences of the main functional tasks of the Golgi apparatus in different developmental stages.

Cytarabine이 마우스 간장의 Alkaline Phosphatase와 Adenosine Triphosphatase 활성 세포의 조직화학적 분포에 미치는 영향에 관한 연구

배기원,양영철,하미혜 인제대학교 1988 仁濟醫學 Vol.9 No.3

미정맥으로 투여된 Cytarabine은 마우스 간장의 효소 분포 양식에 영향을 미쳐 투여 4시간군부터 alkaline phosphatase의 활성이 문맥관 주변부와 중간대 간세포에서 감소되기 시작되어 투여 8시간군에서는 현저히 저하되었고 adenosine triphosphatase 활성은 이때부터 중심정맥 주변부와 중간대 간세포에서 증가되었으며, alkaline phosphatase의 활성 감소는 투여 24시간군까지 지속되었으나 adenosine triphosphatase의 활성 증가는 24시간군에서 정강으로 회복되었다. This experiment was carried out to investigate the effect of cytarabine on the distribution pattern of the hepatic alkaline phosphatase and adenosine triphosphatase in mouse. The experimental animals were administered with single dose of cytarabine, 1.6 mg/kg, by the intravenous injection. The following results were obtained. 1.In the normal hepatic lobule of mouse, the alkaline phosphatase activity was concentrated particularly in the portal canal and the midzonal area. And the adenosine triphosphatase appeared to the mild activity in the overall area. 2.The activity of alkaline phosphatase began to be slightly decreased from the 4 hours and appeared to be markedly decreased at the 8 hours in the portal canal and midzonal area. And the activity of adenosine triphosphatase began to be markedly increased from the 8 hours and recovered to the normal state at the 24 hours in the central area and midzonal area.

Adriamycin이 랫트 신장조직의 Alkaline Phosphatase, Adenosine Triphosphtase와 Acid Phosphatase 활성에 미치는 영향에 관한 조직화학적 연구

배기원,양영철,하미혜 인제대학교 1987 仁濟醫學 Vol.8 No.2

Anthracycline계 항암항생제인 adriamycin투여에 따른 랫트 신장 독성을 투여 시간 경과에 따라, alkaline phosphatase, adenosine triphosphatase와 acid phosphatase의 활성 변화로 관찰하였다. This experiment was carried out to investigate the effect of adriamycin on renal alkaline phosphatase, adenosin triphosphatase and acid phosphatase in rat. The experimental animals were administered with single dose of adriamycin, Img/kg, by the intravenous injection. The following result were obtained 1.The alkaline phosphatase activity appeared to be moderately decreased in the proximal convoluted tubules at the 8 hours. This decrease maintained by the second day and recovered to the normal state at the fourth day. 2.The adenosine triphosphatase activity appeared to be moderately increased in the proximal convoluted tubules at the 12 hours This increase maintained by the eighth day. 3.The acid phosphatase activity is moderately increased in the proximal convoluted tubules at the 4 hours. This in crease maintained by the 18 hours and recovered to the normal state at the first day.

항암제 Adriamycin 사용에 따른 골수기능저하에 대한 Steroid 효과에 관한 실험적 연구

이순용,양영철,하미혜 인제대학교 1991 仁濟醫學 Vol.12 No.3

항암제 adriamycin을 가토에 투여하여 유발된 골수기능저하에 대하여 prednisolone을 병용함으로써 골수기능저하가 어느 정도 신속히 회복되는가에 대한 실험적 연구를 시도하였다. 그 결과 절대과립구 수, 적혈구 수 및 혈색소치에서 통계학적으로 유의한 회복의 효과를 볼 수 있었다. We have studied hematologic effect of corticosteroid on anticancer drug-induced bone marrow suppression. Bone marrow suppression was induced by IV injection of adriamycin 1mg/kg single dose to the rabbit(AD), to which prednisolone 0.4mg/kg was administered dally from the 1st day(AD=PD) or from the 7th day(AD+PD) of adriamycin administration to 22nd day. The results of hematologic changes were as followings: 1.There was statistically no significant difference of hematologic response on WBC, AGC, ALC, RBC and HGB between the two groups of AD and AD+PD. On the contrary, of hematologic response of platelet count, there was statistically significant difference between the two groups, showing tendency of decrease more in AD + PD than in AD. 2.There was statistically significant increase of AGC, RBC and HGB in AD = PD comparing to those in AD. On the contrary, there was statistically significant decrease of platelet count in both AD+PD and AD=PD more than in AD, but statistically less decrease in AD=PD than in AD+PD. 3.Considering the above results, we concluded that there was a tendency of heimatologic recovery from adriamycin-induced bone marrow suppression more in AD = PD, in which prednisolone was administered earlier, form the beginning, and longer than in AD+PD.