중합효소연쇄반응을 이용한 한우에 감염된 Theileria sergenti의 신속한 검출

채준석,이주묵,권오덕,박진호,채건상,Chae, Joon-seok,Lee, Joo-mook,Kwon, Oh-deog,Park, Jin-ho,Chae, Keon-sang 대한수의학회 1996 大韓獸醫學會誌 Vol.36 No.1

To make the genomic DNA probe of Theileria sergenti, the merozoites were purified from erythrocytes of Korean cattle, The previous studies on the probe of T sergenti had resulted in two probes as KTS1 and KTS3 DNA fragment. Nucleotide sequence of both ends of the KTS1 and KST3 were determined in order to design primers for polymerase chain reaction. A pair of an uper primer(5'-CCTCTTGAAGTCATCCATGT-3'; nucleotide position 48) and a lower primer(5'-CACTGAGCTG GAAAGAGCTA-3'; nucleotide position 156) in pKTS1 were synthesized. The anticipated PCR product was 128bp in length. To examine the sensitivity of the PCR, KTS1 DNA and purified T sergenti DNA were serially diluted by tenfolds with distilled water. The primers were sensitive enough to detect 4ag of the authentic template DNA and 4fg of the purified T sergenti DNA by PCR. Furthermore, when the blood was serially diluted by two-folds with 0.9% saline, the pair could detect up to 0.00029%(about 164 parasites in $10{\mu}l$ of blood) of T sergenti infection in bovine erythrocytes by PCR. In a comparison of microscopic and PCR detection of T sergenti in the same samples from Chonbuk area, 47 and 51 out of 70 sample(67.1%) were positive by the former and by the latter method, respectively.

Identification and sequence analysis of small subunit ribosomal RNA gene of bovine Theileria isolates from Korea and Japan

채준석,박진호,권오덕,이주묵,Chae, Joon-seok,Park, Jin-ho,Kwon, Oh-deog,Waghela, Suryakant D.,Holman, Patricia J.,Wagner, Gerald G.,Lee, Joo-mook The Korean Society of Veterinary Science 1998 大韓獸醫學會誌 Vol.38 No.4

한국과 일본의 서로 다른 지역으로부터 소의 Theileria 분리주에 있어서 6가지 type(A부터 E 그리고 H)과 subtype(B1)의 small subunit ribosomal RNA(SSUrRNA) 유전자를 밝혔다. 이들 유전자 염기서열을 비교하여 본 바 염기서열의 위치 212~231, 261~270 그리고 632~690으로 3군데의 hypervariable region이 관찰되었다. SSUrRNA 유전자 염기서열 type A는 한국의 전북 분리주(KCB), 충남 분리주(KCN), 제주 분리주(KCJ)그리고 실험실 보관주(KLS)와 일본의 Shintoku 분리주(JHS)인 5개의 분리주에서 나타났으며, 이 염기서열은 Kenya의 Marula 분리주인 Theileria buffeli의 SSUrRNA 유전자(GenBank accession number Z15106)와 일치하였다. 한국의 경북 분리주(KKB)에서는 type B만이 관찰되었으나 그 외의 분리주에서는 2 type 이상의 유전자 염기서열이 관찰되었다. KCB와 JHS 분리주에서는 type A와 B, 강원 분리주(KKW)에서는 type B와 H, KCN 분리 주에서는 type A, C 및 D 그리고 KCJ 분리주에서는 type A, B, E 및 subtype B1이 관찰되었다. 한국과 일본 소의 Theileria 분리주에 있어서 여러 type의 SSUrRNA 유전자 염기서열이 나타나는 것으로 보아 혼함감염이 되어 있는 것으로 판단된다. Six different sequences types(A through E and H) and a subtype(Bl) of the small subunit ribosomal RNA(SSUrRNA) gene were found in bovine Theileria isolates from different areas of Korea and Japan. The sequences were aligned and three hypervariable regions were observed in the nucleotide position ranges 212~231, 261~270 and 632~690. Five of the Theileria isolates yielded sequence type A; these were the field isolates KCB, KCN, and KCJ, and the laboratory stock KLS, all from Korea, and a single isolate from Japan (JHS). This sequence type is identical to the SSUrRNA gene sequence listed for Theileria buffeli (GenBank Accession No. Z15106) from Marula, Kenya. The Korean field isolate KKB yielded only a single sequence type (B), but multiple sequence types were found in some isolates. For example, KCB and JHS isolates yielded both types A and B ; isolate KKW showed types B and H; isolate KCN showed types A, C, and D ; and isolate KCJ showed types A, B, E, and a subtype B1. Finding of the multiple sequences SSUrRNA gene sequences suggests that bovine Theileria isolates from both Korea and Japan may consist of mixed populations.

개의 Babesia gibsoni 감염예방에 관한 연구 1. 항원의 Sonication 및 Formalin 처리에 의한 예방접종

채준석,인동철,이주묵,윤창모,Chae Joon-Seok,Ihn Dong-Cheol,Lee Joo-Muk,Yoon Chang-Mo 한국임상수의학회 1990 한국임상수의학회지 Vol.7 No.1

To examine the effects of vaccination against Babesia gibsoni infection in dogs, 15 normal mixed-breed dogs(5 month to 1 year old) divided into 3 groups with 5 dogs in a group. One of them was selected as control group(group A) and others were selected as experimental groups(group B and C). The group B was vaccinated with sonicated antigens and the group C was vaccinated with 0.2% of formalin treated antigens. The results obtained in the examination were summarized as follows : 1. In the western blot, the lane A revealed specific two bands on the regions of 54kd and 100kd, respectively. 2. After the first vaccination, the antibody titers of group B and C were higher 5 times(1 : 200) than those of control group(1:40). After the second vaccination, the antibody titers of group B and C have not changed. When challenged with the protozoa(Babesia gibsoni), the antibody titers(1 : 5,000) were elevated in all groups. But these were not exceeded over 1 : 5,000 for 4 weeks. 3. After challenge, the peak time of increased numbers of the protozoa was the 15th day (12-18 days) in all groups. During these days, the rate of parasitized erythrocytes in control group was 55.0${\pm}$5.4%. But those of group B and group C were 26.0${\pm}$6.4%, and 15.6${\pm}$7.8%, respectively. 4. After challenge, all of the values of PCV, Hb, RBC were shown to decrease in all of the control and experimental groups. 5. The total leukocytes counts are shown a tendency of reduction in all groups after challenge. 6. In all groups, there were increase in lymphocytes and monocytes after challenge.

Sourthern hybridization과 중합효소연쇄반응을 이용한 한국과 일본의 Theileria sergenti 비교

채준석,이주묵,권오덕,이승옥,채건상,Chae, Joon-seok,Lee, Joo-mook,Kwon, Oh-deog,Lee, Seung-ok,Chae, Keon-sang,Onuma, Misao 대한수의학회 1996 大韓獸醫學會誌 Vol.36 No.1

The T sergenti DNA fragments used as probes of KTS1(2.4kb) and KTS3(1.5kb) were labeled with digoxigenin-11-dUTP for the Southern hybridization. T sergenti DNAs from different geographic locations(Korea; Chonbuk, Kyungbuk, Chungnam, Kangwon, Cheju island, Japan; Shintoku, Shintoku 9209, Shintoku 9201, Shintoku 9202, Shintoku 9102) which had been digested with Pst I and EcoR I were probed by the digoxigenin-11-dUTP-labeled KTS1 and KTS3. As the results, the samples from Chonbuk, Kyungbuk, Cheju island in Korea and Shintoku, Shintoku 9209, Shintoku 9201, Shintoku 9102 in Japan were positively reacted, but the others from the other locations not reacted. In the comformation test of T sergenti DNA from different geographic locations, all of the samples were positively detected by PCR amplification.

한우에 감염된 Theileria sergenti merozoite의 순수분리와 genomic DNA probe에 관한 연구

채준석,이주묵,권오덕,채건상,Chae, Joon-seok,Lee, Joo-mook,Kwon, Oh-deog,Chae, Keon-sang 대한수의학회 1994 大韓獸醫學會誌 Vol.34 No.2

To make the genomic DNA probe of Theileria sergenti, the merozoites were purified from bovine erythrocytes. The infected erythrocytes were lysed by Aeromonas hydrophila(Ah-1) hemolysin, and the parasites were isolated by ultracentrifugation on a Percoll discontinuous density gradient. For construction of a T sergenti genomic DNA library, T sergenti DNA was digested with Pstl and the fragments were ligated into the PstI site of pUC19 before transformation of Escherichia coli JM83. Out of thousands of transformants obtained by transformation of E coli JM83 with the genomic library, three plasmids were chosen. The sizes of the inserted DNAs were 2.9kb(2.4kb and 0.5kb) in pKTS1, 4.3kb in pKTS2 and 1.5kb in pKTS3, respectively. The DNA fragments used as probe KTS1(2.4kb), KTS2(4.3kb) and KTS3(1.5kb) were labeled digoxigenin-11-dUTP for the Southern hybridization. In Southern hybridization, all of the probes(KTS1, KTS2 and KTS3) reacted specifically to T sergenti DNA, but not to bovine leucocyte DNA. In order to find out the sensitivities of the digoxigenin-11-dUTP-labeled KTS1 and KTS3 as the probes, purified merozoite DNA and bovine DNA (control) were checked by dot blot hybridization with the probes. Both of the probes, KTS1 and KTS3, detected as minimum amount of 975pg of the T sergenti DNA, but not bovine DNA even to 500ng.

국내 동물의 SFTS 검출 현황

채준석 ( Joon-seok Chae ) 대한인수공통전염병학회 2018 창립총회 및 학술대회 초록집 Vol.2018 No.1

참진드기 매개 중증열성혈소판감소증후군 바이러스(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV)는 최근에 중국, 일본 및 한국에서 밝혀진 병원체로서 국내 동물의 감염 상황을 파악하기 위하여 전국 산야로부터 참진드기 및 가축, 반려동물 및 야생동물에서 검출을 시도하였다. 참진드기의 채집은 국립공원 지역과 축사 및 생활 주변 지역으로부터 채집하였다. 동물에서는 가축인 소, 염소, 돼지와 반려동물인 개와 교양이 및 야생동물인 멧돼지와 고라니로부터 채혈을 하여 SFTSV 분석에 사용하였다. 참진드기와 동물의 혈청은 전처리 과정을 거처 viral RNA를 추출하여 One-step RT-Nested PCR 방법으로 SFTSV S segment를 증폭하여 확인하였다. 참진드기 약충과 성충에서는 각각 한 마리씩으로부터 SFTS virus의 검출을 시도하였으며, 증폭된 유전자 밴드는 유전자염기서열분석을 실시하였고, SFTSV의 계통발생학적인 관계를 보기위하여 유전자 계통도를 작성하였다. 또한 동물로부터 SFTSV에 대한 항체를 조사하기 위하여 IFA와 ELISA를 실시하였다. 2015년도에서 2017년도까지 국립공원지역과 강화도 일원 및 관악산에서 채집된 진드기 종은 Haemaphysalis longicornis, H. flava, Ixodes nipponensis, Amblyomma testudinarium 종이 대부분이었으며, 희귀종으로 I. ovatus 1마리가 채집되었다. 우리나라에서 SFTSV 항원의 검출률은 멧돼지(3.7%, 2/54 마리), 고라니(4.8%, 1/21 마리), 길고양이(17.5% 22/126 마리), 군견(2.9%, 3/103 마리)에서 검출되었다. 또한 산림 근처에서 재래식으로 사육되고 있는 8개도의 240마리의 돼지에서 4마리가 SFTSV가 검출되어 평균 1.7%의 검출률을 나타내었다. 양성이 나온 지역으로서 경기도가 3.3%, 경상북도가 6.7%, 경상남도가 3.3%로 나타났다. 방목장에서 사육되는 99마리의 소에서 12마리가 검출되어 12.1%의 검출률이 나타났다. 흑염소에서는 1차 조사에서 268마리 중에서 14마리가 양성으로서 5.2%의 검출률이 나타났으나, 2차 조사에서 9개도로부터 737마리를 조사한 결과 18마리에서 양성으로서 2.4%의 검출률이 나타났으며, ELISA 항체가에서는 637마리 중 43마리에서 양성이 나타나 6.8%의 양성률이 나타났다. SFTSV에 대한 항체가를 위한 IFA 검사로는 유기견(13.9%), 고라니(23.8%), 멧돼지(1.9%)에서 이루어졌다. 국내에서 참진드기와 동물에서 검출된 SFTS virus의 유전자형은 크게 3개의 clade 로 구분되며, 일본형, 중국형과 유사한 유전자형을 나타내고 있었다. 국내에서 SFTSV는 참진드기를 비롯한 가축 및 반려동물 그리고 야생동물에서 전국 각 지역으로부터 검출되었다. SFTSV는 참진드기나 동물에서 순환하면서 사람 및 동물에 질병을 발생시키거나 보균자로서의 역할을 하면서 인류 및 동물의 생명을 위협하고 있다. 그러나 동물의 종간 전파나 이종동물간의 전파에 대한 연구가 이루어지지 않았으며, 또한 동물에서의 임상증상에 대한 보고가 되어 있지 않아 앞으로 이러한 연구가 필요한 상황이다. 국내 기후는 온대에서 아열대 기후구로 변화되어가는 상황에서 참진드기매개 질병은 계속적으로 증가추세로 나타날 것으로 예측되는바 병원체, 매개체, 보균자 및 숙주와의 관련성 연구를 통하여 이들 병원체의 위협에 대한 다양한 예방관련 연구가 필요하다. 이 분야의 연구는 환경(environmental), 동물(animal) 그리고 인류(human)의 건강(health)과 연관이 있는 분야로서 One Health 개념에서 지속적인 연구개발을 통한 예방대책을 강구해야 할 것으로 본다. (발표자 : jschae@snu.ac.kr)

Identical small subunit ribosomal RNA gene nucleotide sequence of bovine Theileria isolates (Korea and Japan) and Theileria buffeli (Marula, Kenya)

Joon-seok CHAE(채준석),Oh-deog KWON(권오덕),Patricia J. HOLMAN,Suryakant D. WAGHELA,Gerald G. WAGNER,Joo-mook LEE(이주묵) 대한기생충학열대의학회 1998 The Korean Journal of Parasitology Vol.36 No.1

기후변화와 참진드기 매개 병원체

채준석 ( Joon Seok Chae ) 대한인수공통전염병학회 2014 창립총회 및 학술대회 초록집 Vol.2014 No.1

마이크로칩젤 전기영동에서 충진젤 혼합물을 이용한 ORF 바이러스의 진단

김윤정,채준석,강성호,Kim, Yun-Jeong,Chae, Joon-Seok,Kang, Seong-Ho 대한화학회 2004 대한화학회지 Vol.48 No.5

시판 중인 poly(vinylpyrrolidone) (PVP)와 hydroxy ethyl cellulose (HEC) 혼합물을 충진젤 기질로 이용하여 한국 재래산양에 감염된 orf virus (ORFV)를 빠른 시간에 검출하여 진단할 수 있는 새로운 효소중합연쇄반응 (polymerase chain reaction, PCR)-마이크칩젤 전기영동법 (microchip gel electrophoresis, MGE)을 개발하였다. Orf 바이러스 B2L 유전자에서 지표-DNA인 594-bp DNA를 PCR로 증폭시킨 뒤, MGE법을 이용하여 증폭된 DNA를 분석하였다. MGE법은 64 mm 총길이(유효길이 36 mm) ${\times}$90 ${\mu}$m 폭 ${\times}$20 ${\mu}$m 깊이의 유리로 제작된 마이크로칩을 사용하였다. 1.0% PVP ($M_r$ 360,000)와 1.0% HEC ($M_r$ 250,000)의 혼합 충진젤과 277.8 V/cm의 전기장에서 4분 안에 증폭된 594-bp DNA를 분석하였다. PVP와 HEC의 혼합된 충진젤을 사용시 DNA 단편의 길이에 영향이 없이 하나의 DNA 피크를 나타내며 향상된 분리도와 이동시간의 재현성을 보여주었다. 본 PCR-MGE법은 고전적인 슬랩젤 전기영동법에 비해 약 20배 이상의 빠른 검출시간과 정량분석이 가능한 효과적인 ORFV 유전자단편 검출법이었다. We have developed a novel polymerase chain reaction (PCR)-microchip gel electrophoresis (MGE) method based on the sieving gel mixture of commercially available poly(vinylpyrrolidone) (PVP) and hydroxy ethyl cellulose (HEC) for the rapid detection and diagnosis of the orf virus (ORFV) from Korean indigenous goat. After amplification of 594-bp DNA fragment from the B2L gene of ORF virus, the amplicon was analyzed by the MGE separation. The glass microfluidic chip (64 mm total length (36 mm effective length)${\times}$90 ${\mu}$m width${\times}$20 ${\mu}$m depth) allowed the fast detection and diagnosis of ORFV in the mixture of 1.0% PVP ($M_r$ 360,000) and 1.0% HEC ($M_r$250,000) as a sieving matrix with better resolution and reproducibility of DNA fragments. Under the electric field of 277.8 V/cm, the 594-bp DNA was analyzed within 4 min. Compared to traditional slab gel electrophoresis, the PCR-MGE method was twenty times faster and an effective clinical method for the quantitative analysis of ORFV.

산삼배양액 급여에 따른 육계의 생산성 및 질병 저항성 효과

설재원,박재홍,채준석,강형섭,류경선,강춘성,박상열,Seol, Jae-Won,Park, Jae-Hong,Chae, Joon-Seok,Kang, Hyung-Sub,Ryu, Kyeong-Seon,Kang, Chun-Seong,Park, Sang-Youel 대한수의학회 2010 大韓獸醫學會誌 Vol.50 No.2

The large amount of tissue culture medium (TCM), which contains some of the active secretory components of Korean wild ginseng (KWG; Panax ginseng) such as saponins, is usually discarded after harvest of KWG. The present study was aimed to investigate the efficacy of oral administration of the TCM-KWG on growth performance and diseases resistance in broiler chickens. A day old broiler chickens randomized in 6 groups (n = 60/groups) were administered orally with 0, 2, 4, 8, 16 and 32 mL/L TCMKWG through drinking water for 5 weeks and examined the change of weight gain, feed intake and blood components. Also, five weeks old broiler chickens (n = 15/groups) were challenged orally with Salmonella (S.) gallinarum and investigated the mortality in broiler chickens. An average weight gain and feed intake significantly didn't change in TCM-KWG administration groups as compared to control group. The concentration of calcium (Ca), phosphate (Pi) and potassium (K) in serum were increase by TCM-KWG administration in broiler chickens. We also found that oral administration of TCM-KWG through drinking water significantly reduced the mortality in broiler chickens experimentally infected with virulent S. gallinarum. The results of this study indicated that TCM-KWG administration may elevate the resistance on disease and improved the skeleton formation and body homeostasis of chickens, and TCM-KWG can be used as a cost-effective and environmentally alternative additives to control of the disease and growth.