C형 간염의 진단을 위한 역전사중합효소연쇄반응과 효소면역측정법의 타당성 평가

손병철,전진호,박영홍,신해림,조규일,김종한,정귀옥,이종태,이채언,백낙환,Son, Byung-Chul,Chun, Jin-Ho,Park, Yeong-Hong,Shin, Hai-Rim,Cho, Kyu-Il,Kim, Jong-Han,Jung, Kui-Oak,Lee, Jong-Tae,Lee, Chae-Un,Paik, Nak-Whan 대한예방의학회 1995 예방의학회지 Vol.28 No.2

This study was conducted to estimate the validity of reverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR) compared to enzyme immunoassay(EIA) for the detection of hepatitis C virus (HCV) infection. EIA for antibody to HCV(anti-HCV) and RT-PCR for HCV was executed on the subjects from Pusan and Kyungnam area with questionnaire survey to collect some relating factors of HCV infection. As the result from 617 cases, the prevalence of HCV infection was 1.5% by EIA and 3.7% by RT-PCR(p<0.05), and the age standardized rate was 1.7% and 3.4% by EIA and RT-PCR, respectively. The prevalence of hepatitis B surface antigen(HBsAg) was 6.8% by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) and the age standardized rate was 7.7%. It was the higher in male group comparing to female group(p<0.01). Both of the prevalence of HCV and HBsAg were higher in elevated asparate aminotransferase(AST) and alanine aminotransferase (ALT) group than in normal AST and ALT group(p<0.01). There was no specific risk factor of HCV infection. Though the degree of agreement of EIA and RT-PCR by gamma statistics was 97.2%, it showed a significant difference between the two methods(p<0.01). For the detection of HCV infection, positive predictive value of EIA was 66.7% and negative predictive value of EIA was 97.2%. This study suggests that negative result to anti-HCV by EIA didn't mean the free state of HCV infection, therefore it would be helpful that further monitoring for HCV infection by RT-PCR in the case of elevated AST and ALT and/or clinically suspected.

Pcp-2 Interacts Directly with Kinesin Superfamily KIF21A Protein

Hye-Young Park(박혜영),Sang-Jin Kim(김상진),Sung Su Ye(예성수),Won Hee Jang(장원희),Sang Kyeong Lee(이상경),Yeong-Hong Park(박영홍),Yong Wook Jung(정용욱),Il Soo Moon(문일수),Moo Seong Kim(김무성),Dae-Hyun Seog(석대현) 한국생명과학회 2008 생명과학회지 Vol.18 No.8

KIF21A는 kinesin superfamily에 속하는 분자 motor로서 미세소관을 따라서 분비소포를 운반한다. 최근의 연구결과 KIF21A 유전자 일부의 missense 돌연변이에 의하여 congenital fibrosis of the extraocular muscles (CFEOM)1의 유발됨이 밝혀졌다. CFEOM1은 KIF21A의 돌연변이로 인하여 분화 발생과정에 occulo-motor신경과 neuromuscular junction 형성에 필요한 단백질을 이동시키지 못함으로써 유발된다. 본 연구에서는 효모 two-hybrid system을 사용하여 KIF21A의 WD-40 repeat domain과 결합하는 분자량이 작은 Purkinje cell protein-1 (Pcp-2), 또는 L7으로도 알려진 단백질을 분리하였다. Pcp-2는 효모 two-hybrid assay에서 KIF21A와 KIF21B의 WD-40 영역과는 결합하지만 다른 종류의 KIFs와는 결합하지 않았다. 또한 단백질간의 특이적 결합을 pull-down assay로 확인 하였으며, 생쥐의 뇌 파쇄액에 Pcp-2 항체로 면역침강을 행하여 KIF21A를 확인한 결과 Pcp-2와 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 KIF21A는 Pcp-2와 결합하며, 또한 Pcp-2는 KIF21A의 adaptor 단백질로서 세포 내 KIF21A의 수송에서 매개 단백질로 작용함을 시사한다. KIF21A is a member of the Kinesin superfamily proteins (KIFs), which are microtubule-dependent molecular motors, anterograde axonal transporters of cargoes. Recently, congenital fibrosis of the extraocular muscles 1 (CFEOM1) has been shown to result from a small number of recurrent heterozygous missense mutations of KIF21A. CFEOM1 results from the inability of mutated KIF21A to successfully deliver cargoes to the development of the occulo-motor neuron or neuromuscular junction. Here, we used an yeast two-hybrid system to identify a protein that interacts with the WD-40 repeat domain of KIF21A and found a specific interaction with Purkinje cell protein-2 (Pcp-2), a small protein also known as L7. Pcp-2 protein bound to the WD-40 domain of KIF21A and KIF21B but not to other KIFs in yeast two-hybrid assays. In addition, this specific interaction was also observed in the glutathione S-transferase pull-down assay. An antibody to Pcp-2 specifically co-immunoprecipitated KIF21A associated with Pcp-2 from mouse brain extracts. These results suggest that Pcp-2 may be involved in the KIF21A-mediated transport as a KIF21A adaptor protein.

마우스 Hepa-1c1c7 세포주에서 B형 간염 바이러스에 의한 tumor necrosis factor-a의 발현 유도

예성수,장원희,양영일,이연재,김미성,석대현,박영홍,백계형,Yea Sung Su,Jang Won Hee,Yang Young-Il,Lee Youn Jae,Kim Mi Seong,Seog Dae-Hyun,Park Yeong-Hong,Paik Kye-Hyung 한국생명과학회 2005 생명과학회지 Vol.15 No.1

B형 간염 바이러스(HBV)에 의한 감염은 인류의 보건에 대단히 중요한 문제이며, 따라서 HBV에 대한 많은 연구가 수행되어져 왔다. 그러나 HBV 연구에 있어서의 주된 장애요인은 그 감염이 사람과 일부 영장류에 국한된다는 점이다. 본 연구에서는 마우스 간암 세포주인 Hepa-1c1c7 세포를 이용하여 HBV의 감염성 및 그에 따른 염증성 사이토카인인 TNF-a의 발현의 변화를 측정하였다. HBV의 표면항원(HBsAg)분비는 microparticle enzyme immunoassay를 사용하여 측정하였고, TNF-a mRNA 발현 측정에는 quantitative competitive RT-PCR 방법을 사용하였다. HBV 발현 벡터를 Hepa-1clc7 세포에 도입시켰을 경우뿐만 아니라 HBV 비리온을 갖고 있는 혈청을 사용하여 Hepa-lc1c7 세포를 감염시켰을 때에도 HBV mRNA 발현 및 HBsAg 분비가 측정되었다. 또한 두 상황 모두에서 TNF-a mRNA발현이 증가됨을 알 수 있었다. 이러한 결과는 사람과 영장류에 특이적인 HBV가 마우스 간암 세포주인 Hepa-lclc7 세포도 감염시킬 수 있다는 가능성을 제시한다. 또한 마우스 기원의 Hepa-lclc7 세포에서도 HBV의 유전자 발현에 필요한 여러 인자들이 존재하며, TNF-a와 같은 사이토카인 유전자 발현을 조절하는 세포 내 기전에 HBV가 영향을 미친다고 할 수 있다. 따라서 마우스 간암 세포주인 Hepa-lclc7 세포는 HBV 연구를 위한 시험 관내 모델로서 사용되어질 수 있을 것으로 보인다. Infection with hepatitis B virus (HBV) is a major health problem worldwide. Although a tremendous amount has been known about HBV, there have been obstacles in the study of HBV due to the narrow host range of HBV limited to humans and primates. In the present study, we investigated the susceptibility to HBV infection of mouse hepatoma cell line, Hepa-1c1c7. In addition, based on that human hepatocytes infected by HBV increase the expression of the pro-inflammatory cytokine TNF-a, the inducibility of TNF-a expression by HBV in the cells was determined. HBV surface antigen (HBsAg) secretion was measured by the microparticle enzyme immunoassay and steady state mRNA expression was analyzed by quantitative competitive RT-PCR. Transient transfection of Hepa-1c1c7 cells with HBV expression vector resulted in a dose-dependent induction of TNF-a expression. Infection of Hepa-1c1c7 cells with the serum of HBV carrier also increased TNF-a mRNA expression. Both in the transfected and infected cells, HBV mRNA was expressed and significant HBsAg secretion was detected. There was no significant variation in $\beta-actin$ mRNA expression by HBV. These results demonstrate that HBV is infectious to Hepa-lc1c7 in vitro and the viral infection induces TNF-a expression, which suggests that Hepa-lc1c7, a mouse hepatoma cell line, may be a possible model system for analysis of various molecular aspects of HBV infection.

JSAP1 Interacts with Kinesin Light Chain 1 through Conserved Binding Segments

김진상,이철희,박혜영,예성수,장원희,이상경,박영홍,차옥수,문일수,석대현,Kim, Sang-Jin,Lee, Chul-Hee,Park, Hye-Young,Yea, Sung-Su,Jang, Won-Hee,Lee, Sang-Kyeong,Park, Yeong-Hong,Cha, Ok-Soo,Moon, Il-Soo,Seog, Dae-Hyun Korean Society of Life Science 2007 생명과학회지 Vol.17 No.7

KIF5는 2분자의 kinesin heavy chain (KHC)과 2분자의 kinesin light cham (KLC)으로 구성되며 미세소관과 직접 결합한다. KIF5는 여러가지 세포 내 소기관을 이동시키나 KIF5가 이동시키는 운반체가 어떻게 특이적으로 결합하는지는 아직 밝혀지지 못하였다. 본 연구에서 효모 two-hybrid system을 사용하여 KLC1의 tetratricopeptide repeats (TRP) 부위와 결합하는 세포 내의 단백질을 분리하였다. 결과 KLC1와 특이적으로 결합하는JNK/stress-activated protein kinase-associated protein 1 (JSAP1/JIP3)을 분리하였다. 이러한 결합은 KLC1의 TRP1, 2 영역과 JSAP1의 leucine zipper 영역이 결합에 관여하며, 또한 효모 two-hybrid assay에서 JSAP1은 KLC2와 결합하지만 신경세포에서 발현하는 KIF5A, KIF5C 그리고 모든 세포에서 발현하는 KIF5B와는 결합하지 않았다. 단백질간의 결합을 pull-down assay로 확인한 결과 KLC1은 glutathione S-transferase (GST)와는 결합하지 않으나 GST결한 JSAP1과는 결합하였다. 또한 생쥐의 뇌 파쇄 액으로부터 JSAP1 항체로 면역침강을 행한 결과 KLC1은 JSAP1과 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 KLC1은 JSAP1과 결합하며, JSAP1은 KLC1의 수용체로세포 내 KIF5의 수송의 매개 단백질로 작용함을 시사한다. A conventional kinesin, KIF5/kinesin-I, is composed of two kinesin heavy chains (KHCs) and two kinesin light chains (KLCs) and binds directly to microtubules. KIF5 motor mediates the transport of various membranous organelles, but the mechanism how they recognize and bind to a specific cargo has not yet been completely elucidated. Here, we used the yeast two-hybrid system to identify the neuronal protein(s) that interacts with the tetratricopeptide repeats (TRP) of KLCI and found a specific interaction with JNK/stress-activated protein kinase-associated protein 1 (JSAP1/JIPP3). The yeast two-hybrid assay demonstrated that the TRP 1,2 domain-containing region of KLCI mediated binding to the leucine zipper domain of JSAP1. JSAP1 also bound to the TRP region of lac2 but not to neuronal KIF5A, KIF5C and ubiquitous KIF5B in the yeast two-hybrid assay. In addition, these proteins showed specific interactions in the GST pull-down assay and by co-immunoprecipitation. KLCI and KIF5B interacted with GST-ISAP1 fusion proteins, but not with GST alone. An antibody to JSAPI specifically co-immunoprecipitated KIF5s associated with JSAP1 from mouse brain extracts. These results suggest that JSAP1, as KLC1 receptor, is involved in the KIF5 mediated transport.

Kinesin Superfamily KIF1Bα Protein Binds to the PDZ Domain of MALS-3

김상진(Sang-Jin Kim),이철희(Chul-Hee Lee),박혜영(Hye-Young Park),예성수(Sung Su Yea),장원희(Won Hee Jang),이상경(Sang Kyeong Lee),박영홍(Yeong-Hong Park),정용욱(Yongwook Jung),석대현(Dae-Hyun Seog) 대한해부학회 2006 Anatomy & Cell Biology Vol.39 No.5

분자 motor로서 큰 superfamily를 형성하는 Kinesin 단백질은 분비소포, 단백질 복합체, 세포 내 각 소기관을 운반한다. KIF1Bα는 단량체의 motor 단백질로서 세포 내에서 미토콘드리아를 세포 말단으로 이동시키는 역할이 밝혀졌다. 본 연구에서 효모 two-hybrid system을 사용하여 KIF1Bα와 결합하는 세포 내의 단백질을 분리하였다. 결과 KIF1Bα와 특이적으로 결합하는 mammalian LIN-7 (MALS)-3/vertebrate homology of LIN-7(Veri)와 synaptic scaffolding molecule (S-SCAM)을 분리하였다. MALS-3는 KIF1Bα의 C-말단 영역과 결합에 관여하며 KIF1Bα의 C-말단에 존재하는 “T-X-V”아미노산 배열이 MALS-3와의 결합에 중요하게 관여하였다. 또한 효모 two-hybrid assay에서 MALS-3는 KIF1Bα와 결합하지만 다른 종류의 KIFs와는 결합하지 않았다. 단백질간의 결합을 pull-down assay로 확인한 결과 MALS-3는 glutathione S-transferase (GST)와는 결합하지 않으나 GST결합 KIF1Bα와는 결합하였다. 또한 생쥐의 뇌 파쇄 액에 MALS-3 항체로 면역침강을 행하여 KIF1Bα를 확인한 결과 MALS-3와 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 KIF1Bα는 MALS-3와 결합하며, MALS-3는 KIF1Bα의 수용체로 세포 내 KIF1Bα의 수송의 매개 단백질로 작용함을 시사한다. The Kinesin superfamily proteins (KIFs) make up a large superfamily of molecular motors that transport cargo such as vesicles, protein complexes, and organelles. KIF1Bα is a monomeric motor that conveys mitochondria and plays an important role in cellular function. Here, we used the yeast two-hybrid system to identify the proteins that interacts with KIF1Bα and found a specific interaction with the mammalian LIN-7 (MALS)- 3/vertebrate homology of LIN-7 (Veri) and synaptic scaffolding molecule (S-SCAM). MALS-3 protein bound to the tail region of KIF1Bα but not to other kinesin family members in the yeast two-hybrid assay. The “T-X-V” motif at the C-terminal end of KIF1Bα is essential for interaction with MALS-3. In addition, this protein showed specific interactions in the Glutathione S-transferase (GST) pull-down assay. An antibody to MALS-3 specifically coimmunoprecipitated KIF1Bα associated with MALS-3 from mouse brain extracts. These results suggest that MALS-3, as KIF1Bα receptor, is involved in the KIF1Bα-mediated transport.

일반연제 발표 : B형 간염 바이러스 관련 신병증의 신조직에서 pre-S/S 유전자 돌연변이에 대한 관찰

하창우 ( Ha Chang U ),윤혁진 ( Yun Hyeog Jin ),김영훈 ( Kim Yeong Hun ),박영홍 ( Park Yeong Hong ),정우영 ( Jeong U Yeong ) 대한신장학회 2002 춘계학술대회 초록집 Vol.21 No.1

한국인 B형 간염 바이러스 관련 간질환에서 HBV C 및 S 유전자 영역 돌연변이의 면역학적 중요성

정정명 ( Jung Myung Chung ),조환진 ( Hwan Jin Cho ),이연재 ( Yeon Jae Lee ),장윤식 ( Yeun Sik Jang ),박은택 ( Eun Taek Park ),최봉기 ( Bong Ki Choi ),모혜경 ( Hye Kyoung Mo ),박영홍 ( Yeong Hong Park ) 대한소화기학회 2002 대한소화기학회 춘계학술대회 Vol.2002 No.-

<목적> 본 연구의 목적은 HBV DNA의 C와 S 유전자 영역에서 돌연변이의 빈도를 관찰하고 면역 상태와 C와 S 유전자 영역의 돌연변이 사이에 상관관계를 알아보고자 한다. <방법> HBV 관련 간질환 소아와 성인 34명으로부터 추출한 혈청이나 생검 간조직으로부터 DNA을 추출하였다. 추출한 DNA로부터 HBV의 C와 S 유전자 영역을 증폭하고 클로닝하여 염기서열을 분석하였다. <결과> 34례의 adr type의 분석 결과 32례(94.1%)에서 co

Interaction of GAT1 with Ubiquitin-Specific Protease Usp14 in Synaptic Terminal

Dae-Hyun Seog(석대현),Sang-Jin Kim(김상진),Young-Ju Joung(정영주),Sung Su Yea(예성수),Yeong-Hong Park(박영홍),Moo Seong Kim(김무성),Il Soo Moon(문일수),Won Hee Jang(장원희) 한국생명과학회 2010 생명과학회지 Vol.20 No.7

γ-aminobutyric acid (GABA)는 중추신경계에서 억제성으로 작용하는 주요한 신경전달물질이다. GABA 수송체(GAT)는 연접간격에 존재하는 GABA를 세포 내로 재 흡수하여 GABA의 농도를 조절한다. 그런데 GABA 수송체가 어떻게 조절되는지는 아직 밝혀지지 않았다. 본 연구에서는 효모 two-hybrid system을 사용하여 뇌의 주요 GABA 수송체인 GAT1의 C-말단과 특이적으로 결합하는 ubiquitin-specific protease 14 (Usp14)를 분리하였다. Usp14는 GABA 수송체 GAT1및 GAT2와는 결합하지만, 다른 GAT isoform과는 결합하지 않았다. GAT1과의 결합에는 Usp14의 C-말단부위가 필수적으로 관여함을 확인하였다. 또한 이 단백질간의 결합을 GST pull-down assay로 확인하였으며, 생쥐 뇌 균질액의 co-immunoprecipitation을 통하여 in vivo에서도 GAT1과 Usp14가 결합함을 확인하였다. 이러한 결과들은 Usp14가 GAT1과 결합하여 세포막에 존재하는 GAT1의 수를 조절하는 역할을 할 가능성을 시사한다. γ-aminobutyric acid (GABA) is the major inhibitory neurotransmitter in the central nervous system. GABA transporters (GATs) control extracellular GABA levels by reuptake of released GABA from the synaptic cleft. However, how GATs are regulated has not yet been elucidated. Here, we used the yeast two-hybrid system to identify the specific binding protein(s) that interacts with the carboxyl (C)-terminal region of GAT1, the major isoform in the brain and find a specific interaction with the ubiquitin-specific protease 14 (Usp14), a deubiquitinating enzyme. Usp14 protein bound to the tail region of GAT1 and GAT2 but not to other GAT members in the yeast two-hybrid assay. The C-terminal region of Usp14 is essential for interaction with GAT1. In addition, these proteins showed specific interactions in the glutathione S-transferase (GST) pull-down assay. An antibody to GAT1 specifically co-immunoprecipitated Usp14 from mouse brain extracts. These results suggest that Usp14 may regulate the number of GAT1 at the cell surface.

4 HBV 관련 만성간질환들에서 pre-S 부위의 변이종에 관한 관찰

정정명 ( Jung Myung Chung ),이상욱 ( Sang Wook Lee ),최봉기 ( Bong Ki Choi ),박은택 ( Eun Taek Park ),이재호 ( Jae Ho Lee ),이상민 ( Sang Min Lee ),모혜경 ( Hye Kyung Mo ),박영홍 ( Yeong Hong Park ) 대한소화기학회 2002 대한소화기학회 추계학술대회 Vol.2002 No.-

간조직내 HBV precore 변이를 동반한 HbeAg 양성 만성 B 형간염 환자에서의 인터페론 치료효과

이연재(Youn Jae Lee),옥승철(Sung Cheul Ok),이상혁(Sang Hyuk Lee),설상영(Sang Young Seol),정정명(Jung Myung Chung),박영홍(Yeong Hong Park),주남영(Nam Young Joo) 대한내과학회 1998 대한내과학회지 Vol.55 No.1

N/A type, Group 2: mixed) were received 3-6 MU INF three times a week for 4-6 months, We did follow-ups for at least six months(mean : Group 1-11.3, Group 2- 13.7 months). A complete responder was defined as persis- tent(>6 months) normalization of transaminase and loss of HBeAg and/or seroconversion. Results : The HBV precore mutants were found in 15 cases(31.2%) among 48 patients: 7 cases(21.2%) in 33 HBeAg-positive patients and 8 cases(53.396) in 15 HBeAg-negative patients. The HBV precore mutants were more frequently found in HBeAg-negative patients(p= 0.043). Differences in severity of hepatic pathology were not observed in the wild-type versus mutant-type chronic hepatitis B patients(p =1.00). Initial response rate was not significantly different between two Groups(p= 0.228), but complete response rate had a lower tendency in Group 2 (p=0.073). Conclusion : There is a tendency for HBV precore mutants to be less responsive to INF therapy than wild type. Therefore the patients with chronic hepatitis B should be treated as early as possible in natural history of their liver disease before the emergence of HBV precore mutants.