중학생의 구강건강 상태와 학교구강보건서비스 요구도

최민지 영남대학교 환경보건대학원 2013 국내석사

중학생의 구강건강 상태와 학교구강보건서비스에 대한 요구도를 파악하기 위하여 2013년 4월 18일부터 5월 10일까지 경상북도 경주시 소재 1개 남자중학교와 영천시 소재 1개 여자중학교 2학년 학생을 대상으로 자료를 수집하였으며, 최종 344명을 분석 대상으로 하였다. 초등학교 재학 중 구강보건교육은 남학생 80.7%, 여학생 75.2%가 경험하였고, 중학교 진학 후 구강보건교육은 남학생 11.8%, 여학생 8.3%가 경험하였다. 구강보건 태도 점수는 남학생 23.04±3.02, 여학생 22.24±3.05이었고(p<0.05), 구강보건 행태 점수는 남학생 33.98±4.62, 여학생 37.41±4.37이었다(p<0.01). 구강건강상태에서 우식경험영구치율은 남학생이 12.53±12.40으로 여학생 18.62±14.31보다 낮았지만(p<0.01), 우식영구치율은 남학생이 40.59±43.27로 여학생 19.45±31.78보다 높았다(p<0.01). 초등학교 재학 중 구강보건교육 경험이 있는 여학생의 구강보건 지식, 태도, 행태 점수는 경험이 없는 여학생의 구강보건 지식, 태도, 행태 점수보다 통계적으로 유의하게 높았다. 학교구강보건서비스 각 항목에 대하여 필요하다고 응답한 학생은 구강보건실 운영 69.5%, 양치시설 79.7%, 치아 홈메우기 70.1%, 불소도포 75.6%, 구강보건교육 65.1%이었다. 양치시설을 희망하는 남학생의 우식경험영구치율이 11.37±11.64로 희망하지 않는 남학생 15.69±13.94보다 낮았고(p<0.05), 구강보건교육을 희망하는 여학생의 우식영구치율이 23.42±33.62로 희망하지 않는 여학생의 12.08±26.81보다 높았다(p<0.05). 중학교 진학 후 구강보건교육 경험이 매우 낮았고, 학교구강보건서비스 각 항목에 대한 요구도가 높았으며, 앞으로 중학교 학교구강보건서비스 제공 체계의 개선을 통하여 중학생 구강건강 유지 및 관리 방안을 마련하는 것이 필요할 것이다. In order to identify the needs for oral health status of middle school students and the school oral health services, data were collected from subjects of 2nd graders in one male middle school located in Gyeongju and one female middle school in Yeongcheon, Gyeongsangbuk-do from April 18th to May 10th 2013. A total of 344 students were finally selected as subjects for this study. 80.7 % of male students and 75.2 % of female students experienced the oral health education while they were the elementary school students. 11.8 % of male students and 8.3 % of female students experienced the oral health education after they entered the middle school. Male and female students had 23.04 ± 3.02 and 22.24 ± 3.05 in oral health attitude score (p < 0.05), respectively. Male and female students had 33.98 ± 4.62 and 37.41 ± 4.37 in oral health behavior score (p < 0.01), respectively. In terms of oral health status, male students had 12.53 ± 12.40 in DMFT rate which was lower than 18.62 ± 14.31 of female students (p < 0.01). Male students had 40.59 ± 43.27 in DT rate which was higher than 19.45 ± 31.78 of female students (p < 0.01). Oral health knowledge, attitude and behavior scores of female students who experienced the oral health education while they were the elementary school students were statistically significantly higher than those of female students who did not have experience. For each item of school oral health service, 69.5 %, 79.7 %, 70.1 %, 75.6 % and 65.1 % of students answered that they needed the operation of oral health room, brushing facilities, tooth sealant, application of fluoride and oral health education, respectively. DMFT rate of male students who wished brushing facilities was 11.37 ± 11.64, which was lower than 15.69 ± 13.94 of male students who did not wish (p <0.05). DT rate of female students who wished the oral health education was 23.42 ± 33.62, which was higher than 12.08 ± 26.81 of female student who did not wish (p < 0.05).After entering the middle school, experience of the oral health education was very low and the needs for each item of school oral health services was high. It will be necessary to prepare the plans to maintain and manage oral health of middle school students through improvement of system to provide middle school oral health service in the future.

미용전공 대학생의 목표지향성이 메타인지와 전공몰입에 미치는 영향

최민지 한성대학교 예술대학원 2025 국내석사

본 연구의 목적은 미용전공 대학생을 대상으로 인구통계학적 변수에 따른 전공몰입, 목표지향성, 메타인지에 차이가 있는지를 살펴보고, 전공 몰입에 영향을 미치는 목표지향성과 전공몰입과 메타인지의 상관관계를 분석하는 것을 목표로 한다. 또한 메타인지가 목표지향성과 전공몰입 사이에서 매개역할을 하는지 확인함으로써, 미용전공 대학생의 학업 몰입도와 학업 성취 를 증진하기 위한 실천적 방안을 모색하고자 하였다. 연구대상은 미용 전공 대학생들 1학년부터 4학년 학생들이다. 302명에게 자가보고식 온라인 설문지를 작성하게 하여 연구대상자 특성, 목표지 향성, 메타인지, 전공몰입 자료를 수입하였고 수집된 데이터는 SPSS 28 프로그램을 이용하여 전공몰입, 목표지향성 및 메타인지의 신뢰도 확인, 평균차이 분석, 회귀분석, 상관관계 등을 수행하였다. 본 연구에 따르면 성별로는 메타인지에서 여학생이 남학생보다 높았으며, 학년으로는 2학년이 가장 많았다. 전공분야는 메이크업 전공이 가장 높았으며, 전공 선택 동기는 적성과 흥미가 상대적으로 가장 높았다. 미용 경력은 2년 이하가 가장 높았고, 학업성적은 3.0~4.0 미만이 가장 높았다. 회귀분석 결과, 목표지향성은 메타인지에 정적인 영향을 주었다. 목표 지향성의 경우 메타인지의 변량에 관하여 64%의 설명력을 가졌다. 메타인지는 전공몰입에 정적인 영향을 주었다. 메타인지의 경우 전공몰입의 변량에 관하여 56%의 설명력을 가졌다. 목표지향성은 전공몰입에 정적인 영향을 주었다. 목표지향성의 경우 전공몰입의 변량에 관하여 43.7%의 설명력을 가졌다. 다중회귀분석 결과, 목표지향성과 메타인지는 전공몰입에 영향을 주었다. 즉 이들의 결과로써 메타인지는 전공몰입과 목표지향성의 부분적인 매개효과가 있음을 확인할 수 있었다. 따라서 미용전공 대학생의 전공몰입도를 더욱 높이기 위해서는 메타인지의 적극적인 활용으로 메타인지에 대한 학습을 강화하고, 학습을 지도하는 관념을 수립하도록 도와서 학생들이 스스로 계획, 모니터링, 조절, 평가의 학습 관계를 형성할 필요가 있다. 또, 부분적 매개변수로서 작용하는 메타인지 수준을 높여야 할 뿐만 아니라, 특히 목표지향성의 하위요인인 수행목표와 숙달 목표를 강화하여 학생들이 학습 과정에 몰입할 수 있도록 동기를 부여하고, 자기주도 학습 환경을 조성한다면 대학생의 전공몰입 수준이 높아질 것이다. 이를 바탕으로 학문점 시사점과 실무적 시사점 그리고 향후 연구방향을 제시 하였다. 이 연구는 미용 교육 및 실무 현장에서 효과적인 학습 전략을 제시함으로써, 미용전공 대학생의 학업 몰입도를 증진하고 전문적 진출에 필요한 역량을 강화하는 데 기초 자료로 활용될 수 있다. 향후 연구에서는 미용 전공별로 세부적인 차이를 분석하거나, 다양한 교육적 변수를 추가로 검토하여 실질적 교육 방법론 개발에 기여할 수 있을 것이다.

광물과 암석단원에 대한 초ㆍ중등 과학교과서 내용 분석 : 문제점과 개선방안에 대하여

최민지 고려대학교 교육대학원 2010 국내석사

이 연구는 제 7차 교육과정에 따라서 집필된 4학년에서 7학년까지 초.학교 과학교과서의 광물과 암석 단원의 본문 진술을 분석하여 과학교육에 시사점을 찾아보는 것이다. 연구결과 광물 영역에서는 원소의 도입 과정이 교육과정 계열성이 맞지 않게 제시되어 있고, 광물의 색과 모스 굳기계는 단순 암기형식으로 제시되어 있었으며, 불순물이 포함된 광물색이 제시되어 있었다. 암석 영역에서는 화성암의 구분 기준이 조립질과 세립질에 대한 설명이 크기의 정량적 개념 대신에 정성적으로 단순하게 기재되어 있고, 동일한 마그마에서 화강암과 현무암이 생성되는 그림이 제시되어 오개념을 유발할 수 있게 보였다. 변성암에서는 편리와 엽리가 구분되지 않고 제시되어있고, 응회암이 화성기원과 퇴적기원의 논쟁이 있음에도 불구하고 퇴적암으로 분류되어 있었다. 변성암은 모암과 변성암의 관계가 계열성 없이 제시되어 있고 용어가 통일되어 있지 않았다. 이러한 분석결과를 통하여 새로운 교과서를 집필 시 체계적인 분류기준을 고려할 필요가 있다고 사료된다. The purpose of this research is to analyze statements contained in chapters concerning mineral and rock in elementary and middle school science textbooks that have been recently written for 4th to 7th grades in accordance with the 7th curriculum, in order to further our science education. There are several problems that the research has discovered: the definitions of minerals are not presented well in harmony with curriculum branches; the way of mineral colors and the Mohs scale of mineral hardness presented requires simply memorizing; they include adulterated mineral colors. A classification criterion for rocks such as coarse-grained and fine-grained was simply illustrated without any explanation about their sizes. There are misleading pictures that depict the generation of granite and basalt from same magma. Also there is no distinction between schistosity and foliation regarding metamorphic rocks. Tuff is simply categorized as sedimentary rocks although its origin, whether from igneous rocks or sedimentary rocks, is under dispute. In case of metamorphic rocks, the relation between the parent rocks and metamorphic rocks is reported without details on their systemic relations and the terminology on the subject is not consistent. These results should be reflected in new textbooks during their design. Keywords : science textbook, mineral, rock

서울시 가로변 버스노선도 정보전달 효과 연구

최민지 인제대학교대학원 2011 국내석사

도시의 인구가 증가함에 따라 교통수단과 교통정보서비스가 발달하고 그 이용 또한 증가하고 있다. 이러한 대중교통 이용과, 교통정보를 이용하기 위해서는 무엇보다 정보 제공자와 정보 수용자 간의 의사소통이 중요하다. 대중교통수단 중 버스는 도시의 심각한 교통체증과 복잡한 노선에도 불구하고 불특정 다수의 사람들이 가장 많이 이용하는 교통수단이다. 때문에 버스노선도는 짧은 시간에 정확한 정보를 쉽게 제공할 수 있는 표현방법에 관한 연구가 필요하다. 본 연구에서는 버스정류장 버스노선도의 가독성을 고려하여, 효과적인 정보전달 기능에 충실한 서울시 버스노선도 표현에 관한 연구를 실시하였다. 연구의 방법으로는 기존의 문헌 조사와 서울시의 현재 버스 정책과 버스노선도의 실태를 조사하여 현재 사용되고 있는 버스 노선도의 종류를 파악하고 노선도 정보표현방법에 대해 살펴보았으며, 다른 도시의 사례로 부산과 대구, 해외 사례로는 미국, 독일의 버스노선도를 조사하였다. 그리고 급격하게 사용 빈도가 증가하고 있는 인터넷과 스마트 폰에서의 버스노선도 적용 사례를 살펴보았다. 또한「서울시 버스교통정보 시스템에서의 유니버설 사인시스템 연구 (이명은, 2005)」와 「대중교통 정보그래픽 체계화를 위한 디자인 (이아람, 2008)」의 연구에서 실시하였던 설문의 결과와 사례조사를 토대로 서울시 버스 노선도의 가독성에 영향을 미치는 정보의 양(정류장 명 개수)과 서체의 종류, 글자크기의 변화에 따른 실험을 실시하고 노선도 표현방법에 관한 선호도 조사를 실시하였다. 서울시의 시내버스 3종류(가로변, 중앙차로, 환승센터)의 정류장에 설치된 버스노선도 중에서 서울시 시내버스 정류장의 대부분을 차지하고 있는 가로변 정류장 노선도는 1단형과 2단형(U자형)이 있으며 HY각헤드라인M체를 사용하고 있었었으며, 그 중 더 많은 수를 차지하고 있는 2단형(U자형)중 정류장명의 개수 분포가 가장 많은 55개, 65개, 75개 형태를 실험대상으로 선정하였다. 실험Ⅰ에서 서울시 버스노선도에 관한 선행연구 분석을 실시한 결과로 버스노선도에 정보의 양이 너무 많고 복잡하여 읽기가 힘들다는 응답을 토대로 버스노선도 정보 양(정류장 명 개수)의 변화에 따른 지각의 정도를 설펴보았다. 그 결과, 각 샘플(정류장 명 개수 55개, 65개, 75개) 중 정류장 명의 개수가 늘어날수록 이용자가 정류장 명을 찾는데 시간이 더 많이 소요되는 것으로 나타났다. 55개와 65개 샘플은 약간의 시간차이를 보였으나, 75개에서 소요시간이 2배 이상으로 현저하게 늘어나 정류장명을 75개 이상 표기하는 것에 대한 검토가 필요한 것으로 사료된다. 실험Ⅱ에서 정류장명이 65개인 서울시 버스노선도에 현재 사용되고 있는 서체 HY각헤드라인M, 서울남산체와 기본형 고딕체인 윤고딕140을 적용하여 서체의 변화에 따른 실험을 실시한 결과, HY각헤드라인M과 윤고딕140의 소요시간에서 약간의 차이를 보였으나, 서울 남산체에서 5초 정도의 시간이 더 소요되는 것으로 나타났으며 선호도 면에서는 윤고딕140체가 가장 높은 것으로 나타났다. 실험Ⅲ에서 정류장명 75개 서울시 버스노선도의 글자크기와 행간의 변화에 따른 실험을 실시한 결과, 글자의 크기가 현재의 크기보다 1.5pt작은 12.5pt일 때 소요시간이 가장 짧은 것으로 나타나났다. 또한 현재의 노선도와 글자의 크기에 변화를 준 노선도, 주요정류장만 표기한 노선도 세 가지 디자인에 관한 선호도 조사를 실시한 결과, 현재의 노선도의 선호도가 가장 낮았으며, 주요 노선도만 크게 표기한 글자의 크기에 변화를 준 노선도의 선호도가 가장 높은 것으로 나타났다. 향후 이러한 결과를 바탕으로 버스노선도를 제작하고자 할 때, 버스노선도의 정보전달의 효과를 높이는데 기초 자료로 사용될 수 있을 것이다. As city population grows, transportation means and transportation information service are making progresses, and more and more people are using them. In using these public transportation and transportation information, the most important thing between information provider and recipient is communication. Among many public transportation means, bus, although of serious city traffic and complicated bus routes, is what people use most. For this reason, we need to study on how to express accurate information easier and in short time through the bus route map. This study focused on the expression of Seoul city bus route map which is fully functional in effective information transfer upon concerning the readability of bus route map in bus stops. As for the study methods, I surveyed the existing documents, current bus policy and status of bus route in order to understand the types of bus route that are used currently and also to examine how the route map expressed information. As a case of other cities, Busan, Daegu were examined along with bus route map of USA, Germany as foreign cases. Also, I've examined the application cases of bus route map on internet and smart phones which show sharp increase in its use rate. Finally, with survey results and case studies from dissertations of 「Research on the Sign System of Seoul Bus Traffic System According to Universal Design Principles (Lee, Myung Eun, 2005)」and 「Design for Systematization of Information Graphic in Public Transportations (Lee, Aram, 2008)」, experiments to see how the amount of information(number of bus stops), types of fonts, size of letters affect readability of Seoul city bus route map were conducted, and a survey on preferred route map expression method was also conducted. Regarding the experimental object, out of three types of bus stops in Seoul (side street, central street, and transfer station), bus stops at the side street occupies the most portions of all bus stops. And their bus route map were in two types; form 1 type, form 2 type (U-type). Both types uses HY angle headline M font. Out of those two, form 2 type (U-type) was the majority and out of this type, 55 forms, 65 forms and 75 forms which had the most bus stop names were selected as experimental objects. In experiment I, the result of pre-study analysis on Seoul city bus route map showed that there were too much information on the route map and that was too complicated and made reading difficult. Taking this result as a basis, the study varied the amount of bus route map information (number of bus stop names) to examine people's acknowledgment. As a result, out of each sample (55, 65, 75 bus stop names), users had to spend more time in finding the name of the desired bus stop as the number of bus stop names increased. There was a slight difference in time between sample of 55 and 65. However, this time doubled for sample of 75 names. This indicates that there should be a consideration on marking the bus stop names more than 75. In experiment II, various fonts were applied to Seoul city bus route map with 65 bus stop names. HY angle headline M font which is currently used, Seoul namsan font, Yoon gothic 140 which is the basic gothic font were applied to this experiment. Result showed that was a small difference between HY angle headline M font and Yoon gothic 140 font. However, it took 5 more seconds in Seoul namsan font. On the other hand, people preferred Yoon gothic 140 font most. In experiment III, letter size and space between lines were varied on Seoul city bus route map with 75 bus stop names. The result showed that people read the route map faster when the size was 12.5pt which is 1.5pt smaller than the current size. Also, preference survey was conducted with three types of design; current route map, a route map with different size of letters, a route map with only major bus stops mentioned. As a result, people preferred the route map with different letter size which enlarged the letter of major bus routes. The current route map was preferred least. These results may be used as a fundamental data in improving information transfer effect of the bus route map in the future.

선혼합된 바이오세라믹 치수 복조재의 생물학적 효과 및 삼차원적 in vitro 실험 모델의 개발

최민지 전북대학교 대학원 2025 국내박사

Objectives Premixed hydraulic calcium silicate cements (hCSCs) and fast-setting hCSCs were developed for manipulation convenience. The aim of this study was to analyze the effect of a premixed hCSC on the in vitro biocompatibility and bioactivity as well as its capacity to induce reparative dentin after pulp capping in an in vivo rat model. Furthermore, it was aimed to present in vitro three-dimensional (3D) experimental model which is similar to clinical situations. Materials and Methods In vitro, human dental pulp cells (hDPCs) were exposed to the supernatant of the tested hCSCs including EndocemMTA Premixed (Maruchi), ProRoot MTA white (Dentsply Tulsa) and Biodentine (Septodont). To evaluate biocompatibility of the tested materials, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) and cell migration assay were performed. Cell morphology attached on the surfaces of the materials was observed using scanning electron microscopy (SEM). Cytocompatibility and cell differentiation analysis was performed by immunocytochemistry using a 3D culture model. The dental pulp of Wistar rat molar was exposed and capped with the materials. After four weeks, the rats were sacrificed and the volume of newly formed hard tissue was measured three-dimensionally using micro-computed tomography. The degree of pulpal inflammation and dentin bridge formation was evaluated by histologic analysis. Immunohistochemical staining for dentin sialophosphoprotein (DSPP) was also performed. Results Overall, all tested materials did not show any significant differences regarding cytocompatibility and cell differentiation in vitro. The volumes of the reparative dentin of all experimental groups were higher than that of the control group (p < 0.05). The Biodentine group showed higher value compared to the EndocemMTA Premixed group (p < 0.05). However, there was no significant difference between the EndocemMTA Premixed and ProRoot MTA white (p > 0.05). In contrast, in histological analyses, there was no differences between the tested groups regarding the dentin bridge formation and degree of pulpal inflammation (p > 0.05). Immunoreactivity for DSPP was detected within and around the pulp tissue near the newly formed dentin only in the experimental groups. Conclusion Within the limits of the present study, EndocemMTA Premixed has the potential to be used as a favorable pulp capping material. Furthermore, 3D cell culture pulp capping model used in this study might provide an alternative tool for cytotoxicity and bioactivity screening of pulp capping agents.

Vibrio vulnificus가 분비하는 cytolysin이 CAPE 세포에 미치는 독작용 기전

최민지 全北大學校 大學院 1999 국내석사

폴리에스테르 폴리올과 폴리프로필렌 카보네이트를 병용한 수용성 폴리우레탄 접착제의 합성 및 특성

최민지 부산대학교 대학원 2017 국내석사

Waterborne polyurethane adhesive for footwear is prepared using mainly polyester polyol. But polyester polyol is not used alone because of poor weather resistance. This problem is solved using poly(propylene carbonate) (PPC). It is because of poor weather resistance, heat-resisting property and mechanical properties. In this study, we are synthesized WPU using poly(propylene carbonate) (PPC) to improve the adhesion strength and water resistance. WPUP were synthesized with polyester polyol, poly(propylene carbonate) (PPC), 4,4'-dicyclohexylmethane diisocyanate (H12MDI), ethylene diamine (EDA), dimethylol propionic acid (DMPA). We were prepared samples of variety molar ratios. A series of polyurethane block copolymers based on polyester polyol, poly(propylene carbonate) (PPC) soft segment were synthesized. The hard segment consisted of 4,4'-dicyclohexylmethane diisocyanate (H12MDI) and ethylene diamine (EDA) as the chain extender. The structures of synthesized WPUP were confirmed by the measurement of FT-IR, 1H-NMR spectrometer. In addition, the properties of the synthesized WPUP were envaluated through DSC, TGA, tensile strength, elongation, modulus, adhesion strength and water resistance strength. Optimum adhesion and water resistance strength were obtained when polyester polyol : poly(propylene carbonate) (PPC) ratio was about 9 : 1

한국어 놀이 명칭의 낱말밭 연구

최민지 고려대학교 대학원 2018 국내석사

본 연구는 한국어 놀이 명칭의 낱말밭에 대한 논의이다. 이 연구의 목적은 한국어 놀이 명칭을 대상으로 그들의 의미를 엄밀하게 평정하고 평정된 의미를 바탕으로 의미 특성을 밝혀 놀이 명칭의 낱말밭을 살펴보는 것이다. 이를 위해 구조주의 언어학의 방법론인 성분분석을 이용하여 연구 대상 단어들의 의미 특성을 분석하고 분석된 낱말들의 구조를 살펴 보았다. 본고의 1장인 서론에서는 본 연구의 목적을 살피고 연구의 범위 및 방법을 간단히 제시하였으며, 놀이 명칭과 관련된 여러 선행 연구들을 살폈다. 2장에서는 놀이의 개념과 특징 살펴보고 연구 대상이 되는 어휘를 선정한 방법과 절차에 관해 서술하였다. 여러 학자들이 정의한 놀이의 공통 특성을 종합해 놀이의 개념을 세웠고, 이러한 개념을 바탕으로 기존의 국어 연구에서 놀이 명칭이라고 보았던 단어들을 분석하여 국어 놀이 명칭이 갖는 특징을 살펴보았다. 또한, 연구 대상어를 확정하기 위해 국내에서 편찬된 6개의 사전과 1개의 연구보고서 그리고 3개의 백과사전을 검토하였고, 총 94개의 최종 어휘 목록을 완성하였다. 3장에서는 의미 평정 방법과 절차를 설명하고 표준국어대사전의 의미를 기본 의미로 삼아 뜻풀이를 보완하여 각 단어의 의미를 확정하였다. 4장에서는 각 단어의 의미 특성을 분석하고 놀이 명칭의 낱말밭을 그려보았다. 놀이 명칭의 원어휘소를 '놀이'로 보고, 일차적으로 [+경쟁]과 [-경쟁]에 의해 경쟁 놀이와 비경쟁 놀이로 크게 유형화하여 그 하위에 속하는 단어들이 어떤 구조를 가지는지를 살펴보았다. 본 연구는 지금까지 국어학에서 밝혀지지 않았던 놀이 명칭들의 전체 밭을 그려보았다는 것에서 의의를 지닐 수 있다.

국내 임상검체에서 분리된 아스페르길루스 균주의 항진균제 내성, 유전형, 내성기전 및 병독성 연구

최민지 전남대학교 2019 국내박사

배경: 아스페르길루스 균종에 의한 침습성 진균 감염은 면역이 저하된 환자에게서 유병률과 치명률이 높은 질환이다. 임상검체에서 분리된 Aspergillus flavus 와 A. terreus 균주는 국내에서 A. fumigatus 다음으로 흔한 아스페르길루스증의 원인균이다. 이에 본 연구에서는 국내 임상검체에서 분리된 A. flavus 균주와 A. terreus 균주를 대상으로 항진균제 감수성 검사를 실시하여 최소억제농도(minimal inhibitory concentration, MIC)분포를 조사하고, microsatellite typing 분석을 실시하여 유전형을 조사하였으며 A. flavus 균주의 azole 내성기전과 A. terreus 균주의 병독성을 평가하였다. 방법: 2012년부터 2013년까지 우리나라 주요 10개 병원 임상 검체에서 분리된 A. flavus 50주와 A. terreus 31주를 대상으로 하였다. 항진균제 감수성 검사는 CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) M38A의 액체미량희석법을 이용하여 voriconazole, itraconazole, posaconazole 및 amphotericin B 4가지 항진균제에 대해 실시하였고, epidemiological cutoff value (ECV)를 기준으로 내성 여부를 판정하였다. Microsatellite typing 법을 이용하여 각 균주의 유전형을 결정하였고 A. flavus의 azole 내성 기전을 조사하기 위해 azole 표적 유전자 변이(CYPA, CYP51B 및 CYP51C)를 염기서열분석으로 확인하고, 표적 유전자 및 유출펌프유전자(MDR1, MDR2, MDR4, ATRF 및 MFS1)를 real time PCR 방법을 이용하여 대조균주를 기준으로 상대적인 발현량을 조사하였다. A. terreus의 병독성은 Galleria mellonella 모델을 이용하여 A. terreus 5x106 conidia/mL을 주입한 후 24시간부터 72시간까지의 생존개체수를 조사하여 평가하였다. 결과: 국내 다기관 내성 감시 연구 결과 A. flavus 50주 중 voriconazole에 내성을 보인 균주는 7주, itraconazole에 내성을 보인 균주는 3주가 관찰되었고, 나머지 항진균제에 대해서는 모든 균주가 감수성을 보였다. A. terreus 31주 중 amphotericin B에 내성을 보인 균주는 6주로 나머지 항진균제에 대해서는 모두 감수성을 보였는데 분리 검체에 따라 각 항진균제의 MIC를 기하 평균으로 분석한 결과 amphotericin B (호흡기 분리주 대 귀 분리주, 2.41 µg/mL 대 0.48 µg/mL), itraconazole (0.40 µg/mL 대 0.19 µg/mL), posaconazole (0.16 µg/mL 대 0.08 µg/mL) 그리고 voriconazole (0.76 µg/mL 대 0.31 µg/mL) 모두 호흡기 분리주가 귀 분리주보다 유의하게 높은 MIC값을 보였다. Microsatellite typing을 이용한 유전형 분석 결과 A. flavus는 총 34가지의 유전형이 관찰되었는데 귀에서 분리된 voriconazole 내성 6주에서 동일한 유전형(Type 1)을 공유하고 있었고, A. terreus에서는 총 27개의 유전형이 관찰되었다. Azole 내성 A. flavus 균주의 내성기전을 조사하기 위해 CYP51 유전자 돌연변이 검사를 실시한 결과 CYP51A와 CYP51B에서는 변이가 관찰되지 않았고, CYP51C에서 내성 7주 모두 S240D/D254G/N423D로 동일한 변이를 보였으나 감수성 균주 12주(33.3%) 에서도 동일한 변이가 관찰되었다. 내성 관여 유전자 발현 시험 결과 CYP51A (내성 균주 대 감수성 균주, 2.529 대 1.789), ATRF (1.129 대 0.896), MFS1 (3.757 대 2.670)유전자 평균 발현량이 내성 균주에서 감수성 균주보다 유의하게 높았다. 분리 검체에 따라 항진균제의 MIC를 G. mellonella를 이용하여 A. terreus의 병독성을 관찰한 결과 amphotericin B MIC 수치가 높을수록, 호흡기 분리주에서 병독성이 더 강한 경향을 보였으나 모두 유의한 차이는 없었다. 결론: 국내 다기관 내성 감시 연구 결과 azole 내성 A. flavus 균주가 국내에 출현하였고, amphotericin B에 내재성 내성으로 알려진 A. terreus 균주에서는 amphotericin B에 감수성을 보이는 균주가 다수 발견되었다. 국내에서 분리된 A. terreus 균주의 amphotericin B 감수성 양상이 매우 다양하게 관찰되었지만, 호흡기 분리주가 귀 분리주보다 높은 항진균제 MIC를 보였다. 국내에서 분리된 A. flavus와 A. terreus 모두 매우 높은 유전학적 다양성을 가지고 있었고 귀에서 분리된 voriconazole 내성 A. flavus 균주의 경우 동일 클론이 존재함을 알 수 있었다. 국내 임상 검체에서 분리된 azole 내성 A. flavus 균주의 내성 기전은 표적 유전자의 변이보다는 표적 유전자 및 약물유출펌프 유전자의 과발현이 작용할 것으로 생각되었고 A. terreus 균주의 병독성은 amphotericin B MIC 수치가 높을수록, 호흡기 검체에서 분리된 균주에서 더 강한 경향을 보였으나 유의한 차이는 없었다. Background: Invasive fungal infections due to Aspergillus species have become a major cause of morbidity and mortality among immunocompromised patients. Aspergillus flavus and A. terreus are the second and third most common Aspergillus spp. causing invasive aspergillosis after A. fumigatus. This study aims to investigate i) antifungal susceptibility, ii) genetic relatedness by microsatellite analysis among A. flavus and A. terreus clinical isolates iii) azole resistance mechanism of A. flavus iv) virulence of A. terreus clinical isolates using Galleria mellonella model. Methods: In total, 50 A. flavus and 31 A. terreus clinical isolates were collected from 2012 to 2013 in Korean multicenter surveillance. In vitro antifungal susceptibility testing for voriconazole, itraconazole, posaconazole, and amphotericin B was performed using the broth microdilution method according to Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) procedure M38-A. Epidemiological cutoff values (ECVs) were used to determine resistance and susceptible. Genotypes of the A. flavus and A. terreus isolates were determined using microsatellite based typing technique with species-specific markers. Azole resistance mechanism of A. flavus, azole target CYP51A, CYP51B and CYP51C genes were sequenced, and the expression levels of azole target and efflux pump genes (CYP51A, CYP51B, CYP51C, MDR1, MDR2, MDR4, ATRF and MFS1) were quantified using real-time PCR. Gene expression levels relative to the mean expression levels in control strain with all triazole susceptible (set to 1.0). Larvae of G. mellonella were infected with 5x106 conidia/mL of A. terreus isolates and the survival rates of larvae at 24-72 hr were determined for virulence. Result: Of 50 A. flavus isolates, seven isolates were resistant to voriconazole (MIC ≥ 4 µg/mL) and three isolates were resistant to itraconazole (MIC ≥ 2 µg/mL). All are susceptible to other antifungal agents. Of 31 A. terreus isolates, the rate of resistant to amphotericin B (MIC > 4µg/mL) was 19.4% (6/31), while 80.6% (25/31) were susceptible. All 31 A. terreus isolates were susceptible to voriconazole, itraconazole, and posaconazole. When we compared the geometric mean of MICs for the antifungal agents of A. terreus according to the type of specimens, respiratory isolates showed significantly higher geometric mean MICs than ear isolates (respiratory vs. ear isolates; 2.41 µg/mL vs. 0.48 µg/mL for amphotericin B, 0.40 µg/mL vs.0.19 µg/mL for itraconazole, 0.16 µg/mL vs. 0.08 µg/mL for posaconazole, and 0.76 µg/mL vs. 0.31 µg/mL, voriconazole, P <0.05, in all). Microsatellite typing of 43 A. flavus isolates yielded 34 genotypes and 31 A. terreus isolates 27 distinct genotypes. Notably, six voriconazole resistant ear isolates shared the same genotype (Type 1). None of the 7 voriconazole resistant isolates had non-sysnonymous mutation in CYP51A or CYP51B. However, all of the seven isolates possessed the same non-sysnonymous mitation, S240A/D254G/N423D, in CYP51C, which were also found in 33.3% (12/36) voriconazole susceptible isolates. Of the eight genes evaluated by real-time PCR, the mean expression levels of CYP51A, MDR2, ATRF, and MFS1 were significantly higher in the voriconazole resistant isolates than in the susceptible isolates [resistant vs. susceptible isolates: CYP51A (2.529 vs. 1.789), MDR2 (0.7429 vs. 1.037), ATRF (1.129 vs. 0.8963), and MFS1 (3.757 vs. 2.670), respectively; all P <0.05]. We found that the virulences of amphotericin B resistant or respiratory A. terreus isolates seemed to be higher than those of amphotericin B susceptible or ear isolates, but there was no significant difference. Conclusion: In this study, there were azole resistant A. flavus strains and A. terreus isolates which had been known to be in intrinsically resistant to amphotericin B but actually susceptible to amphotericin B. A. terreus clinical isolates showed diverse susceptibility to amphotericin B, but respiratory isolates showed significantly higher geometric mean MICs of antifungal agents than ear isolates. There was the high genetic diversity of A. flavus and A. terreus clinical isolates in Korea. However, voriconazole resistant A. flavus isolates shared the same genotype, suggesting the existence of A. flavus clonal isolates. Overexpression of the efflux pump or its target genes, rather than mutations in CYP51, could be important resistance mechanisms in the voriconazole resistant isolates of A. flavus in Korea. The virulence of A. terreus might be higher in amphotericn B resistant or respiratory A. terreus isolates.

시판중인 인공피부모델을 이용한 피부자극 대체시험법의 비교검증연구

최민지 계명대학교 2017 국내석사

The purpose of this study was to compare the characteristics and irritation potentials of three commercial reconstructed 3D skin models based on human keratinocytes as alternative skin irritation test, and to perform a proficiency test using one model. The 3D skin models used in the validation study were: KeraSkinTM-VM (Biosolution, Korea), EpiDermTM SIT (EPI-200, MatTek Corparation, USA) and LabCyte EPI-MODEL24 (J-Tec, Japan). The test substances were applied on the surface of insert cells after a pre-incubation period of 24 hrs. The test substances were completely washed, and then models were post-incubated for 48 hrs. Cell viability was measured by MTT assay to find out if test substances had caused skin irritation. In the preliminary test, three irritants and three non-irritants were selected from the recommended list of OECD Guidelines 439 (2013 version). In order to validate the proficiency test, additional test substances were used for the 2nd test in a LabCyte model. The six test substances used for the 1st test were: Diethyl phathdate, 4-methylthio-benzaldehyde, 1-decanol, heptanal, methyl stearate, and 1-methyl-3-phenyl-1-piparazi, and the additional seven substances used for proficiency test of the LabCyte model were: naphthalene acetic acid, isopropanol, heptyl butyrate, hexyl salicylate, cyclamen aldehyde, 1-bromohexane, and potassium hydroxide (5% aq.). We used PBS, DPBS and DW as negative controls, and 5% sodium lauryl sulphate (SLS) as a positive control in according to the OECD guidelines 439 (2013). Quality control indices of models, such as barrier function (TEER), absorbance of negative control, cell viability of positive control, absorbance of extraction buffer used in MTT assay, acceptability range (upper and lower limit), and results range and consistency between inserts, were in agreement with the acceptance criteria. Most test substances showed consistent results with the GHS standards in OECD Guideline 439, except the 4-methylthio-benzaldehyde (negative substance in GHS) that showed false positives in all 3 models of the preliminary study. In terms of the proficiency test, in the LabCyte model, all of the 10 test substances showed consistent results with OECD Guideline 439. Taken all together, results for sensitivity, specificity, and accuracy of the three models were 100, 67, and 83%; however, results from the proficient study, the LabCyte model, had 100% sensitivity, specificity, and accuracy-results that were on par with OECD Guideline. Our present results indicate that the reconstructed 3D skin model is a good alternative model to a skin irritation test, and the Korean KeraSkinTM-VM model would be a good international model provided that several problems were improved. The LabCyte model could also be considered a suitable alternative model to skin irritation test, given its quality and price. 본 연구에서는 인간 피부세포의 keratinocyte를 이용하여 3차원적으로 재배양한 시판중인 인공피부모델 3종을 이용하여 각각의 특성 및 자극 발현여부 등에 대해 비교 검증하고자 하였다. 국내에서 개발한 모델인 (주)바이오솔루션(Korea)의 KeraSkinTM-VM과 MatTek Corporation (USA)의 EpiDermTM SIT (EPI-200) 그리고 가장 최근에 OECD Guideline에 등재된 J-Tec (Japan)의 LabCyte EPI-MODEL24 모델을 이용하였다. 24시간의 pre-incubation을 거친 후 액체물질과 고체물질을 insert에 직접 도포 하였으며, 세척을 실시한 다음 48시간의 post-incubation을 하였다. 4일째 되는 날 MTT assay를 통하여 세포생존율을 산출하여 시험물질의 자극 유무를 판단하였다. 사용된 시험물질은 OECD Guideline 439(2013년 version)을 참고하여, 3개의 비자극 물질과 3개의 자극물질을 이용하여 1차 시험을 실시하였으며, 이후 LabCyte EPI-MODEL24 모델은 숙련도 물질 10종이 포함되도록 물질을 추가하여 2차 시험을 진행하였다. 3개 모델에 모두 시험을 진행한 6가지 시험물질은 diethyl phathdate, 4-methylthio-benzaldehyde, 1-decanol, heptanal, methyl stearate, 1-methyl-3-phenyl-1-piparazi 등이며, 이후 추가로 사용한 시험물질은 naphthalene acetic acid, isopropanol, heptyl butyrate, hexyl salicylate, cyclamen aldehyde, 1-bromohexane, potassium hydroxide (5% aq.) 등 7가지 물질이었다. OECD Guideline 439에 따라 음성대조군은 각각 PBS, DPBS, DW를 사용하였으며, 양성 대조군은 해당 음성대조군에 5%로 희석한 sodium lauryl sulphate (SLS)를 사용하였다. 품질 기준 검사 시험으로 TEER(전기 저항도 측정), 음성대조군의 흡광도, 양성 대조군의 세포생존율, MTT assay시 추출 용매의 흡광도, 표준편차 허용 범위, 재시험 경계 범주, insert간 결과의 일치성을 확인하였을 때 모두 품질 기준을 통과하였다. 추천물질 중 4-methylthio-benzaldehyde의 경우 GHS에서 비자극성 물질이라 분류되어 있지만 세 모델 모두 자극성인 위양성으로 판단되었다. 이를 제외하면 세 모델 모두 시험 결과가 OECD Guideline 439에 등재된 결과와 매우 유사하게 나왔으며, LabCyte EPI-MODEL24를 이용한 숙련도 시험에 있어서도 10개 기준물질에서 정확도가 모두 일치 하였다. 위의 결과를 종합하면, 세 모델의 평가 결과 민감도 100%, 특이도 67%, 정확도 83%였고, LabCyte EPI-MODEL24의 숙련도 테스트 결과 민감도, 특이도, 정확도 모두 100%로 OECD Guideline의 결과와 매우 흡사한 결과를 볼 수 있다. 본 연구에서는 인간의 피부를 3D 형태로 재구성한 인공피부모델은 피부자극시험으로 좋은 대안이 될 수 있다고 판단된다. 또한 국내의 모델인 KeraSkinTM-VM의 경우 표준편차의 문제점 등을 개선하여 국제모델로 거듭날 수 있다고 고려되며 LabCyte EPI-MODEL24의 모델은 품질이나 결과의 편차, 그리고 배송과 가격을 고려해 보았을 때 국내에서 피부자극 대체시험을 수행하기에 합리적인 모델이라 판단된다.