천연감미료 스테비오사이드와 스테비올의 생체내, 시험관내 유전독성평가

오혜영(Hye Young Oh),한의식(Eui Sik Han),최돈웅(Don Woong Choi),김종원(Jong Won Kim),손수정(Soo Jung Son),엄미옥(Mi Ok Eom),강일현(Il Hyun Kang),강혁준(Hyuck Joon Kang),하광원(Kwang Won Ha) 대한약학회 1999 약학회지 Vol.43 No.5

The standard operation procedure of mouse lymphoma L5178Y tk+/- -3.7.2C gene mutation assay (MOLY) has been regarded as a sensitive In vitro mammalian cell gene mutation assay that is capable of detecting clastogens as well as mutagens. Using MOLY, one of natural sweetner, stevioside (5mg/ml) and its aglycon, steviol (340mcg/ml) were evaluated the mutagenicity. Stevioside and steviol did not induce mutagenicity in MOLY. On the other hand, stevioside (250mg/kg, B.W.) and steviol (200mg/kg, B.W.) were also evaluated their ability to induce mucronuclei in regenerating hepatocytes and bone marrow cells of ddY mice. From these results, stevioside and steviol did not induce any mutagenic effect both MOLY and In vivo micronucleus test.

페노피브레이트 유연물질 표준품 대체시험법 개발

김정현(Jung Hyun Kim),김민영(Min Young Kim),권은경(Eun Kyung Kwon),이광문(Kwang Moon Lee),최돈웅(Don Woong Choi) 대한약학회 2015 약학회지 Vol.59 No.3

Analytical method for related substances can be categorized into two methods depending on the necessity of reference standard (RS). The analytical method of related substances with RS is fast and accurate, but it’s very expensive and technically difficult to synthesize RS due to their complicated structure. Another method is using relative retention time (RRT) and relative response factor (RRF) which are already validated with RS. Validation of this method is not easy and time consuming, but once it has been developed, it can save cost and time. In this study, we developed the analytical method for related substances of fenofibrate using RRT and RRF. We validated the method by evaluating specificity, linearity, accuracy and precision according to the 「Manual for Guideline Application for Validation of Analytical Procedures」 of MFDS. Also, we calculated RRT and RRF between fenofibrate and fenofibrate related substances. The results of this study showed high specificity for fenofibrate and fenofibrate related substances. Correlation coefficient(r) of all substances were more than 0.99, and the recovery of fenofibrate, fenofibrate related substance I, II and III were 99.44%, 100.84%, 99.14% and 101.58%, respectively. Precision of fenofibrate and its related substances were ranged between RSD 0.29% and 0.93%. Quantification limits of fenofibrate, fenofibrate related substance I, II and III were determined to be 0.03 μg/ml, 0.05 μg/ml, 0.04 μg/ml and 0.02 μg/ml, respectively by confirming signal to noise ratio of each chromatogram. The RRT for fenofibrate related substance I, II and III were determined to be 0.35, 0.41 and 1.34, respectively. Also, the RRF for fenofibrate related substance I, II and III were determined to be 1.28, 0.98 and 0.79, respectively. The developed method was applied to determine contents for fenofibrate related substances in commercial fenofibrate (active pharmaceutical ingredient). As a result, developed analytical methods of related substances will be used for revising the monograph of fenofibrate in Korean Pharmacopoeia revision and contribute quality control of drugs by improving cost and time consuming problem of RS.

총설 : 국내 신약개발 촉진을 위한 식약청의 국가연구개발 사업 전략수립

김종욱 ( Jong Wook Kim ),권광일 ( Kwang Il Kwon ),유광수 ( Kwang Soo Yoo ),박소현 ( So Hyun Park ),임철주 ( Chul Joo Lim ),최돈웅 ( Don Woong Choi ) 한국유화학회 2008 한국응용과학기술학회지 Vol.25 No.4

공정서 수재의약품의 분석법 개발에 관한 연구 : 콜린산 및 그 유도체의 HPLC분석법 Cholic acid and its derivarives

김미정,최돈웅,김희성,장수현,정기숙,최정선,김지하,이용문,장승엽 식품의약품안전청 2001 식품의약품안전청 연보 Vol.5 No.-

담즙산 물질인 콜린산 및 그 유도체 의약품 6종을 유도체화 없이 HPLC를 사용한 분석방법으로 개발하였다. 최적 딘PLC 줄건은 역상칼럼인 CapcelIPalt Cls을 사용하여 이동상으로 200mH1 인산염완충액 fpH 3.0) 및 아세토니트질을 최초 65:친 v/v(%)로 시작하여 40분에 쪼 :75 v/v(없)되게 응출시켰다. 검출파장은 210 nm, 유속은 1.0 mL/rrdn, 칼럼온도는 45'c로 설정하였다. 검량선의 상관계순는 포두 0.999 이상이었고, 재현겅에 대한 상대표준편차백분율(RSD(%))는 int,or-day 1.0 % 이하, Intra-day5.0 % 이하로서 양호한 분석결과를 얻었다. 겅출한계는 콜린산 12.3 ra/fL, 페히드로콜런산 0.03 #g /fTtL, 우르소데속시콜린잔 찐.8 #g/rnL, 데속시콜린산 31.2 rg/fL, 케노데옥시콜린산 .4 #8/mL 및 리토클린산 쏜.2 rg/fL 이었필, 정량한계는 각각 24.8 ra/fL, 0.62 #a/rnL, 46.3 #g/mL, 50.7 rg/rnL 50.3 #g/lnL 및 61.8 ra/fL 이었다. 회수율의 상대표준편차는 모두 1.0 었 이하로서 양호한 즐과를 나타내었다. 또한 시판품 제제를 HPLC 분석조건으로 시험한 결과 모두 식험기준에 적합하였고, 여타 성분의 영향을 받지 않았다. 운도체화 없이 HPLC를 이용한 이 분석법은 콜린산 유도체의 확인 및 함랑 시험 뿐만 아니라 콜린산 유토체의 동시정량을 할 수 있으므로 유연물질 등 순도시험에도 응용할 수 있어 콜런산_및 콜린산유도체 의약품의 품질평가법으로 촬용될 수 있겠다. A high perfoririance liquid thrornatograPhlT rrlethod has been dove;ofed andvalidated (or the determination of rhotic acld and its derl)·atives such as deli)·drocl)oBi acld (DHCA), Ursodesoxycriollc acid (UDCA), desoxt·Ch01ic acid (DOCA), ChenOdeDXyChOliC acid (CDCA) and lithocholic acid (LCA) in pharmaceuticals for rEuality control purpose. The linealgradient elution of :?00mM phosphate buffer (pH3.0) and acetonotrile was available forseparating 6 cholic acid derivatives using octades?lsilan silica column at 4i·E. UV defectionu'3s set at 210 nm. Selectivitt', linearit?·, range, repeatability, precision and acuuracy showedgood result. The detection limit of cholic acid u·as 12.3 #a/mL, DHCA 0.03 #g/mL, UDCA 39.8rS/mL, BOCA 31.2 rg/rnL, CnCA 35.4 rg/mL and LCA 46.2 fg/mL. This new developed methodwovld be appficable to fuality control for cholic acld derivatives in pharrnaceuticals.

의약품 품질평가에 관한 연구(Ⅰ) : 효소제 의약품의 품질평가(염화리소짐 제제) Evaluation of Enzymatic Drugs(Lysozyme chloride preparations)

이송득,최돈웅,김미정,김희성,진종성,정기숙,김지선,공학수,김도훈,조수열 식품의약품안전청 1998 식품의약품안전청 연보 Vol.2 No.-

떵화리소잗은 분자량 약 a4.5 kDa의 뮤코다당류 분해효쑈로서 점액분해,출혈억제 및 용글작용이 있어 종합감기약,치질치료제 및 항생제둥과 복합처방되거나 단일제제로서 만성부비동염, 객담 ·객출의 곤란, 수술중 또는 수술후위 출혈에 사용되는 소염효소제이다. 염화리소짐의 정량법으로는 효소-기질반응에 의하여 기질의 투과도변화를 측정하는 시험법으로서 이러한 효소학적 절량법은 숙련된 실험자를 됐요로 하며t 특히 시험자간의 오차가 크고, 시험의 재현성이 떨어지는 문제점이 제기되어 왔다. 따라서 본 연구에서는 효소제 의약풍의 정화한 품질평가에 활용하기 위하여 모세관전기영동분석기(CE)를 이용하껴 염화리소짐 및 그 함유제제에 대한 재현성과 정확성이 높은 분석법을 개발하고자 하였다. 염화리소짐 제제를 가지고 모세관, 전채질액, 검출기 , 전하둥 CE 분석조건과 표준액 및 김액 전처리법, 내부표준물질등을 검토하여 CE의 분석조건을 확립하였고, 검량션작성, 재현성시험, 시판품의 정량, 효소학적 시험볍과 의 상관성 분석등을 실시하였다. 염화리소짐 제제의 CE 분석조건으로 모세관; Silica(fused, Sormx40cm),검출기; 자외부흡왔광도계』측정파장 220nm), Run buffer', 50mD7 인산염 용액(pH 2.5), Run voltage :15kV를 사용하였다. 염화리소짐에 대한 CE분석법은 재현성이 우수하필 복잡한 효소학적 시험결과와 상관성이 높아 염화리소짐제제의 품질평가를 위한 시험법쁘로 꽐응될 수 있겠다. Lrsozyrne chloride is the mucolytic enzyme with anti-inflammatory properties that is used for the treatments of chronic rhinitis and formulated with many antipyretic or antitussive com-ponents in drugs.7he old enzymological identification or determination mrthod of Iysozyme chloridehas been required skillfulness, low reproducibitity and cost consuming in quality controls. In order tosuitable and reproducible analysis of Iysozyme chloride in pharrnaceuticals as well as biological crudecell extracts, a capillary electrophoresis(CE) inetho,4 has been developed. The influences of the electro-lyte pH and composition, instrumental temperature and voltage have been iuvestigated. Therefore Iyso-gyme rhloride was anaayzea by 50mM phosphate buffer (pH B.S) and UV detection (220nm) within lessthan 25 min with good reproducibilitr giving a relative standard deviation of less than 3%. The preci-sion of the method was evaluated from inter and intra-day replicate injection of Iysozyme chloride standard solutions.

대한약전 수재 의약품의 분석법 기기화에 관한 연구(ⅩⅡ) : DL-메치오닌 및 L-메치오닌 제제의 분석법 개발 Studyes on the analytical Methods of DL-methionine and L-methionine preparations

공학수,최돈웅,김도훈,김미정,김희성,정기숙,이석호 식품의약품안전청 1997 식품의약품안전청 연보 Vol.1 No.-

DL-메치오닌 및 L-메치오넌은 필수아미노산으로서 수술 후 영양보급, 간장보호제, 뇨산제둥에 사용되고 있는 의약품으로서 이들의약품에 대한정량법끈 약전에 적정법으로 쑬재되어 있으나 적정법은 광학이성체로 이루어진 아미노산에 있어 이성체분리가 불가능한 단점이 있다. 광학이성체는 이성체간의 약리활성이 다르기 때문에 최근 이성체분석연구가 활발하게 진행되고 있느나 아직까지 HPLC를 이용한 아미노산의 공학이성체 분석법이 공정서에 수재되지 않고 있다. 본 연구에서는 HPLC를 이용하여 신속정확하게 아미노산을 확인 및 정량할 수 있고 재현성이 높으며 광학이성에인 DL-체 및 L-체 아미노산을 동시 분리정량할 수 있파. HPLC 분석조건므로는 L-히드록시프롤린-동"-복합체가 실리카 겔지 결합된 ligand exchange 칼럼, 검출기는 자외부흡광광도계(측전파장 : 240nia) 및 이똥상으로 0.5mM 황산동용액을 사용하였다. HPI,C 분석법을 이용하여 메치오닌 함유 의약품을 분석한 결과, 검량선의 상관계수, 재현성 (RSD(%))은 각각 DL-메치오닌에서 0.9997, 0.3217, L-메치오닌에서 0.9999, 0.3794, D-메치오닌에서 0.9999,0.1863이었고, 평균회수율(RSD(%))은 DL-메치오닌에서 0.9755로 양호한 분석결괴를 얻었다. 또한 시판품에 대하여 HPLC 분석법과 공정서에 수재된 적정법웨 시험결과를 비교하땄을 메 DL-메치오닌 및 L-메채오런 의약품에 대한 HPLC 분석법이 더욱 정확한 결과를 얻을 수 있으므로, 조작이 간편하고 재현성이 높은 HPLC 분석법은 랴전에 수재된 적정법의 대체방법으로 약전을 개정할 때 기초자료로 활용될 수 있겠다. DL-methionine and L-methionine have been applied to uutritional supplem hepatoprotectant, antidote of drug poisoning and urinary acidifier. The quantative analytical method of these drugs listed in KP, USP and BP was potentiometrical titration method. The HPLC method of DL and L-methionine was more accurate than that of titration for assay and the enantioseparation of methionine was possible. HPLC analytical conditions were as follows: colums ; ligand exchange column with L- hydroxyproline-Cu^(2+)complex (4.0 x 250mm, 5m), detector; UV 240nm, mobile phase;0.5mM copper sulfate, flow rate ; 1.0mL/min, column temperature : 60℃, sensitivity ; 0.01 AUFS. Our si method was so simple, aceurate and rapid, so that was expected to substitut for present of offical method of KP.

효소제 및 호르몬제의 품질관리에 관한 연구(Ⅰ) : 데옥시리보뉴클레아제 제제 Deoxyribonuclease (DNase) preparations

공학수,최돈웅,김도훈,김미정,김희성,정기숙,송승미,조수열 식품의약품안전청 1997 식품의약품안전청 연보 Vol.1 No.-

데옥시리보?트렐이제(DNase)는 분자량 약 62kDa의 핵산(DNA)분해효소로서 소염작용이 있어 기관지염, 요도염, 낭포성섬유종등의 화농성질환의 채료에 사용되고 잇다. 이 약의 정량법으로는 효소-기질반응에 의하여 기질의 점도변화를 측정하는 효소학적 정량법이 사용되고 있으나, 숙련된 실험자를 요구하며, 시험자간의 오차가 크고, 정확성 및 재현성이 떨어지는 문제점이 제기되어 왔다.따라서 본 연구에서는 모세관전기영동분석기(Capillary Electropho-resis, CE)를 이용하여 데옥시리보뉴클레아제 및 그 함유제제에 대한 재현성과 정확성이 높은 분석법을 확립하고자 하였다. 데옥시리보뉴크레아제 원료 및 그 ㅏㅁ유제제를 가지고 모세관, Run buffer, 검출기, 표준액 및 검액 전처리법, 내부표준물질을 검토하여 모세관전기영동분석기그이 분석조건을 검토하고, 검액 및 표준액을 가지고 검량선작성, 재현성 시험, 시판품의 정량 등을 실시한 결과, 데옥시리보뉴크레아제 및 그 함유제제의 CE 분석조건으로 Capillary:50μm×40㎝,fused silica;검출기:자외부흡광광도계(측정파장 200nm);Run buffer:75mM potassium phosphate buffer (pH 2.5);Run voltage:15kV를 사용하였을 때 inter, intra-day 재현성(%RSD)이 모두 1% 이하로 양호하였다. 이 방법은 조직이 간편하고 정확하게 정량할 수 잇어 데옥시리보뉴클레아지 제제? 품질 평가법으로 활요될 수 있을 것이다. Deoxyribonuclease (DNase) is the lytic enzyme used for the treatment of purulent diseases such as broncopulmontary infections, cystic fibrosis etc. For separation, identification and deterraination of deoxyribonuclease in final drug preparations, a capillary electrophoresis (CE) method has been developed. The influeuces of the buffer pH, electrolyte composition, temperature and voltage were investigated to determine the best analytical conditions. Separation of Deoxyribonuclease was achieved with a 75mM potassium phosphate buffer (pH2.5) and UV detection (200nm). Efficient separations occur in less than 15min with good repeatability giving a relative standard deviation of less than 1%. The precision of the method was evaluated from inter-and intra-day replicate injection of deoxyribonuclease standard solutions. The products from two manufacturers were analyzed and qualitative differences between two products were compared.

침향의 품질평가에 관한 연구

장승엽,강신정,성락선,최돈웅,이종필,신지현,정영자,김종환,김영호,원도희 식품의약품안전청 2000 식품의약품안전청 연보 Vol.4 No.-

대한약전외 한약(생약)규격집에 수재된 침향의 수입이 증가함에 따라 진위여부에 대한 문제가 대두되었으나, .t. ogaffocfD의 기원식물에 대한 자료가 미비하여, 구입한 인도네시아, 중국 및 베트남산 검체의 구성성분비교를 수행하였다. 이들 검체는 전통한방서에 의한 관능겋사에서는 동일한 결과를 나타내었다. 그러나 인도네시아산 검체와 중국산 검체는 그 구성성분이 유사하였으나, 베트남산 겅체는 상당히 다른 구성을 보였다. TLC 분석에서 인도네시아산 검체와 중국산 검체는 많은 형광반점을 나타내었으나, 베트남산 검체는 형꽁반점보다는 10%-산시액 발색후에 나타나는 반점이 많았다. 또한 정유 구성성분도 베트남산 검체는 인도01시아산 겋체와 비교할 때 구성성분이 상이하였다. The authenticity and actual species of .Afuifario ognffocAD listed in Korea Herb Pharmacopoeia on market according to increasing rate of import is discussed. However, thereare few report and research about 4. ogoffocfo and another species. In this study, the chendcalcomponents of agarwood collected from Indonesia, Chha and Vietnam are compared by TLC,HPLC and GC analysis. ÷Tdelltification of agarwood to the species level is beyond the ability bythe method of traditional book of medicines. Agarwoods of Indonesia and China have sunilarpattern of their chemical component, but qdte differ from its of Vietnam. In TLC analysisresult, there are so many spots under fluorescence light in the agarwood of Indonesia andChina. However spots can be detected by coloring with 10%-H2s04 in Vietnamese agarwood.