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      • 효모의 새로운 유전자 HRQ1과 CMR1의 생물학적 기능에 대한 연구

        최도희 인하대학교 일반대학원 2013 국내석사

        RANK : 247631

        Abstract Maintenance of genome integrity involves a number of conserved proteins, including RecQ helicases, which play multiple roles at various steps in homologous recombination and DNA repair pathways. Sgs1 has been described as the only RecQ helicase in lower eukaryotes. However, recent studies revealed the second RecQ helicase, Hrq1, which is most similar to human RECQL4. Here, I show that hrq1Δ mutation resulted in increased mitotic recombination and spontaneous mutation in Saccharomyces cerevisiae. I also observe that hrq1Δ was sensitive to 4-NQO and cisplatin, which was not complemented by overexpression of Sgs1. In addition, the hrq1Δsgs1Δ double mutant display synthetic growth defect as well as shortened chronological life span compared with the respective single mutants. Analysis of type of age-dependent Canr mutations revealed that only point mutations were found in hrq1Δ mutation, whereas significant gross deletions were found in sgs1Δ. The hrq1Δ mutant strain showed shortened replicative life. However, the rDNA recombination frequency and telomere length were not significantly different from those of with a wild-type strain. Mutation in genes of nucleotide excision repair pathway, but not homologous recombination repair and post replication repair pathways were found to be epistatic to hrq1Δ on 4-NQO and cisplatin induced DNA damage. In conclusion, these results suggest that Hrq1 is most likely to be involved in recombination and DNA repair pathways in S. cerevisiae independent of Sgs1. Abstract DNA metabolic processes such as DNA replication, recombination and repair are fundamentally important for the maintenance of genome integrity and cell viability. Although a large number of proteins involved in these pathways have been extensively studied, many proteins still remain to be identified. In this study I isolate the DNA binding proteins from Saccharomyces cerevisiae using DNA-cellulose columns. By analyzing mass spectrometry, an uncharacterized protein Cmr1/YDL156W, was identified. Cmr1 showed sequence homology to human Damaged-DNA binding protein 2 in its C terminal WD40 repeats. Consistent with this finding, purified recombinant Cmr1 was found to be intrinsically associated with DNA binding activity and exhibited higher activity with UV-damaged and distorted DNA substrates. Chromatin isolation experiment reveals that Cmr1 localized in both the chromatin fraction and supernatant fractions, and the level of Cmr1 in chromatin fraction is increased when yeast cells were irradiated with UV and exposed to 4-NQO. These results suggest that Cmr1 may be involved in DNA damage responses in yeast.

      • 효모 Saccharomyces cerevisiae 에서 재조합 인체 섬유아세포 성장인자(hFGF1)의 분비 발현 연구

        최도희 순천향대학교 대학원 2018 국내석사

        RANK : 247631

        Acidic Fibroblast Growth Factor는 22개의 FGF Family 중에서 최초로 발견된 인체 FGF로서 분자량 15.8KDa의 단백질로 hFGF1 이라고 명명되었다. 이들 FGF Family 단백질들은 Heparin에 특이적으로 결합하는 성질을 가지고 있으며 특히 hFGF1은 다양한 세포의 분열을 촉진한다. FGF는 세포막에 존재하는 FGF 수용체 (Fibroblast growth factor receptor)와 결합하여 세포의 증식 및 분화를 조절하는 광범위한 생물학적 기능을 가진다. 따라서 hFGF는 상처 치료 및 피부 재생을 위한 목적으로 화장품 및 의약품으로 광범위하게 사용되고 있다. 효모 Saccharomyces cerevisiae 는 GRAS(Generally Recognized as Safe) 균주로서 식품 및 의약품 생산 공정에서 산업적으로 많이 사용되고 있다. S. cerevisiae 는 단백질 고발현을 위한 다양한 promoter와 외래유전자를 multicopy로 도입할 수 있는 plasmid가 있어 재조합단백질을 고수율로 생산할 수 있는 장점이 있다. 본 연구에서는 효모에서 인체 유래 acidic Fibroblast Growth Factor (hFGF1)를 고분비 발현할 수 있는 분비 융합파트너 (Translational fusion partner, TFP) 시스템을 이용하여 고분비 생산 균주를 선별하고, 선별된 균주를 이용하여 hFGF1 의 발효 생산의 최적화 조건을 확립하였다. 확립된 최적 발효 조건 하에서 발효조를 이용한 재조합 S. cerevisiae 를 유가식 발효하여 배양한 결과 균주의 증식과 함께 재조합 hFGF1을 약 200 mg/L 수준으로 고분비, 생산됨을 확인하였다. 분비 생산된 hFGF1을 Heparin Sepharose를 이용하여 정제한 후 활성형의 재조합 hFGF1를 순수하게 얻을 수 있었다. Acidic Fibroblast Growth Factor (aFGF) is a protein with a molecular weight of 15.8 KDa, which was first discovered among about FGF family, also called FGF1. AFGF is a powerful and broad-spectrum to divide mitogen. FGF (fibroblast growth factor) and its receptor regulate a wide range of biological functions such as cell proliferation, survival and differentiation. Using these features, FGF is used in cosmetics and medicines for purposes such as wound regeneration and skin regeneration. The yeast Saccharomyces cerevisiae is widely used industrially as a GRAS (Generally Recognized as Safe) strain in the production process of foods and medicines. Saccharomyces cerevisiae has the advantage of utilizing a strong, sophisticated and relatable promoter and the ability to produce recombinant protein with high yield by a multiple introduction method of plasmid DNA. In this study, strains were produced and screened using a fusion partner (TFP) system that secretes and expresses recombinant acidic Fibroblast Growth Factor (aFGF) derived from the human body in yeast. And the selected strain was used to establish optimized conditions for the fermentation production of aFGF. As a result of fed-batch fermentation and cultivation of genetically modified S. cerevisiae using fermenter under established optimum fermentation conditions, it was confirmed that the growth of the strain and recombinant aFGF were efficiently secreted and produced did. Expressed protein produced was able to obtain pure recombinant aFGF using tablets using Heparin sepharose.

      • 효모의 새로운 유전자 HUD1에 대한 기능연구

        최도희 인하대학교 일반대학원 2008 국내석사

        RANK : 247631

        HUD1 (YPL033C)은 Sccharomyces cerevisiae의 유전자중 대장균의 SOS induction assay를 통해 DNA대사나 염색체 안정성에 영향을 미치는 유전자를 찾는 과정에서 발견되었다. 본 연구에서는 tandem affinity purification 방법을 이용하여 Mcm helicase와 함께 정제되는 단백질을 조사하였고, 그 결과 Hud1 단백질을 동정하였다. HUD1이 삭제된 효모는 nucleotide 생합성을 방해하는 화학물질에 내성을 나타내었으며, hydroxyura를 처리하였을 때 dNTP양이 감소하지 않았다. HUD1 삭제 돌연변이는 30℃에서는 야생형과 성장의 차이가 없었지만, 저온에서는 훨씬 잘 자라는 것을 관찰하였다. HUD1 삭제 돌연변이는 pol32, rad9, rad17, rad24 돌연변이의 표현형을 부분적으로 억제하였으며, lcd1, rad53의 치사성을 억제하였다. 이러한 결과를 바탕으로 HUD1은 nucleotide 생합성에 관여할 것으로 추측된다. 또한 POL32와 S기 checkpoint와 간접적으로 상호작용 할 것으로 추측된다. The HUD1 (YLP033C) gene was originally identified by screening Saccharomyces cerevisiae genes that play a role in DNA metabolism and/or in genome stability using the SOS system of Escherichia coli. Using a tandem affinity purification method, we identified YPL033C gene product among the yeast proteins that were co-purified with MCM helicase. The hud1 deletion mutant was resistant to a chemical that inhibits the nucleotide metabolism and the dNTP pool of the hud1 deletion mutant was not reduced in the presence of hydroxyurea. Yeast mutant cells with a deletion in the hud1 gene showed much faster growth rate at low temperature (16℃) than the wild type cells whereas there was no difference in growth rate at 30℃. Deletion of the HUD1 gene partially suppressed the defect of pol32, rad9, rad17 and rad24, and suppressed the lethality of mutation of the essential S phase checkpoint genes, lcd1, and rad53. These results suggest that HUD1 may be involved in nucleotide metabolism and may genetically interact with the S phase checkpoint system.

      • 흰쥐 적출대동맥에서의 알파-1 아드레날린수용체의 탈감작현상

        최도희 경북대학교 대학원 1992 국내석사

        RANK : 247631

        흰쥐 적출 대동맥 절편에서 알파-1 아드레날린성 수용체의 탈감작 효과를 검토한 결과는 다음과 같다. 대동맥을 알파-1 아드레날린성 수용체에 선택적인 phenylephrine 에 4 시간 동안 노출시켰을 때(이하 phenylephrine 처치) phenylephrine에 의한 수축력은 phenylephrine 처치전에 비하여 감소되었다. EDRF를 유리시키는 acetylcholine과 histamine에 의한 이완반응은 phenylephrine 처치로서 변화를 볼 수 없었으나 sodium nitroprusside에 의한 이완은 phenylephrine 처치에 의해 항진되었다. Phenylephrine의 탈감작 현상은 LNMMA와 methylene blue 존재로서 영향을 받지 아니하였다. KCl에 의한 수축은 phenylephrine 처치로 억제되었으나 phorbol ester에 의한 수축은 phenylephrine 처치로서 영향을 받지 아니하였다. 이상의 결과에서 phenylephrine에 의해 나타나는 알파-1 수용체 탈감작 현상은 수용체에 직접적으로 영향을 미친다기보다는 수용체 이후의 작용 단계, 특히 세포 내 calcium의 농도나 수축기관에 대한 calcium의 반응성에 영향을 끼쳐 나타남을 시사한다 하겠다. We evaluated alpha 1 adrenergic receptor desensitization and decreased contractility in isolated rat aorta. 4 hour exposure to 10^-5 M of phenylephrine(phenylephrine exposure) decreased phenylephrine(10^-10 to 10^-5 M)-induced contractility. Phenylephrine exposure had no effect on the relaxation by NO releasing agents, such as acetylcholine(10^-9 to l0^-5 M) and histamine(10^-8 to 10^-4 M), but enhanced nitroprusside(10^-10 to 10^-6 M)-induced relaxation. Phenylephrine-induced desensitization was not altered by the presence of methylene blue and N-monomethyl-L-arginine. After phenylephrine exposure KCI-induced contractility was decreased but phorbol ester-induced contractility was not changed. From these results we can assume that prolonged phenylephrine exposure alter calcium-dependent contraction mechanism and involve in alpha 1 adrenergic receptor desensitization-mediated decrease in contractility.

      • 중·고등학교 특수학교 창의적 체험활동 내 특색프로그램 운영실태

        최도희 단국대학교 특수교육대학원 2016 국내석사

        RANK : 247631

        본 연구는 중·고등학교 특수학교 특색프로그램의 운영목적과 편제, 운영실태, 담당교사의 특색프로그램에 대한 운영실태와 개선방안을 조사한 연구로 반구조화된 면담을 통해 중·고등학교 특수학교 특색프로그램 운영실태와 담당교사의 특색프로그램의 운영실태와 개선 방안에 대한 인식을 알아보고자 하였다. 이를 위해 서울·경기도 내 중·고등학교 특수학교에서 근무한 교사 10명을 대상으로 총 1회의 반구조화된 면담을 시행하고 그 내용을 분석하여 특수학교 교사들의 특색프로그램에 대한 인식을 살펴보았다. 연구 참여자와의 면담내용은 그대로 전사하였고 개방코딩을 사용하여 일차적으로 분석을 실시했다. 그 뒤, 축코딩을 사용해서 심층 분석을 진행했다. 면담을 통해 14가지의 범주와 52개의 하위 범주가 도출되었다. 주된 연구결과는 다음과 같다. 첫째, 서울과 경기도 내 중학교, 고등학교 특수학교 운영계획서 편제에는 창의적 체험활동에 대다수의 특색프로그램이 속해 있었다. 둘째, 서울과 경기도 내 중·고등학교 특수학교에서 대부분 교육과정위원회가 실시되고 있었다. 셋째, 교사들은 특색프로그램의 시수 산출에 어려움을 느끼고 있었고, 대다수의 학교에서 총 교육과정에서 연간수업시수에 비해 낮은 시수로 특색프로그램을 실시하였다. 넷째, 특수학교 교사들은 특색프로그램에 있어 체계성이 전제된 자율성이 있어야 할 것이라고 인식하였다. 다섯째, 특수학교 교사들은 특색프로그램에 대해 효과를 측정할 수 있는 방법들이 있다면 학생에게 필요한 교육의 방향을 적절하게 선택하고 학생의 요구를 반영할 수 있을 것이라고 인식하였다. 여섯째, 경력이 4-11년차 특수교사들이 특색프로그램 개선방안에 대해 상대적으로 높은 열의를 갖고 의견을 냈다. 일곱째, 특수학교 교사들은 법적 개념정의, 제도적 지원, 교재교구 개발 등의 행정적인 지원, 그리고 학부모의 적극적인 관심과 참여가 필요하다고 인식하였다. 여덟째, 특수학교 교사들은 특색프로그램에 있어서 교사의 의지와 참여, 전문성, 다양한 아이디어 협력이 필요하다고 인식하였다. 또한 학생의 인성 및 소질 계발이 필요하며, 특색교육항목을 너무 많이 하지 말아야 한다고 언급했다. 더불어, 학생들의 더 많은 참여를 유도하며, 학생들의 요구와 학부모의 의견을 사전에 조사하여 반영해야 한다고 인식하였다. 본 연구는 특수학교 교사 10명을 대상으로 하는 반구조화된 면담 질적 연구로 그 모든 결론을 일반화하여 적용하는 데 조금은 신중해야겠으나, 중·고등학교 특수학교 특색프로그램의 운영실태를 심도 있게 조사해보고 현직 교사들의 의견을 현장감 있게 들어보고 고찰해 본 연구라는 점에서 의미가 있다.

      • 전통 상장의례 상징물의 애도 과정 활용방안 연구 : 조선 후기 상여 장식 꼭두를 중심으로

        최도희 동국대학교 불교대학원 2025 국내석사

        RANK : 247631

        According to various archaeological findings, humans have performed death rituals since prehistoric times. Such rituals functioned as a means of coping with the psychological shock of death and reinforcing communal bonds. In this respect, death rituals can be understood as an instinctive behavior essential for the survival of humans as social beings. Rituals typically employ a variety of tangible and intangible symbols, especially in funerary contexts, where these symbols mediate between the sacred and the secular. Bereaved families, in particular, have historically found comfort and relief through these symbolic elements of death rituals. In the relatively recent past of the Joseon Dynasty, a range of symbolic objects—such as shrouds (su-ui), mourning attire (sangbok), and funeral biers (sang-yeo)—were used, each contributing in unique ways to the mourning process of the bereaved. However, modern funeral practices have undergone significant changes due to colonial influence, industrialization, and urbanization, leading to a disconnection from traditional forms and meanings. Consequently, contemporary bereaved individuals face a lack of culturally resonant and emotionally supportive symbolic media during mourning. Symbolic ritual objects intended to assist the deceased and console the bereaved are found in many cultures, including China, Japan, and Egypt. However, unlike grave goods (bu-jang-pum) buried with the dead, these symbols remain above ground and serve specific ritual functions. One such example is the kkokdu, a decorative figure attached to the funeral bier in late Joseon funerary processions. The kkokdu played a dual role of guiding the deceased and comforting the bereaved, embodying a rich symbolic and artistic heritage unique to Korean culture. Despite its cultural significance, the kkokdu has largely disappeared from contemporary funeral practices. This study aims to explore how the kkokdu, as a traditional symbolic object of Korean funerary rites, can be reinterpreted and applied from a modern perspective to support the mourning process of bereaved families. The research consists of five main areas: First, it examines the transformation of funeral rituals in Korean society from the late Joseon period to the present, focusing on changes in symbolic objects. Second, it investigates the function of funerary rites and the mourning process to identify their interrelationship. Third, it analyzes the symbolic meanings and roles of traditional funerary symbols through representative examples. Fourth, it explores the concept, symbolism, and aesthetic characteristics of the kkokdu as a research subject. Fifth, based on the above findings, it proposes strategies for reinterpretation and application of the kkokdu as a modern funerary cultural content to assist the bereaved. Through this study, the kkokdu is presented as a cultural medium that reflects contemporary changes while preserving the traditional values of Korean funerary culture, offering new possibilities for meaningful and culturally rooted mourning practices. 여러 고고학적 발견에 따르면 인간은 선사시대부터 죽음 의례를 행해왔다. 의례를 통해 동족의 죽음이 주는 충격에 대응하고 공동체의 결속을 다질 수 있기 때문이다. 이런 면에서 죽음 의례는 사회적 동물인 인간에게는 생존을 위한 일종의 본능적 행위로 볼 수 있다. 의례에는 유무형의 다양한 상징물이 사용되는데, 죽음의례에서 주로 사용되는 상징물은 ‘성(聖)’과 ‘속(俗)’을 구분하고 매개하는 역할을 한다. 상실을 경험한 유족은 이와 같은 죽음 의례 상징물을 통해 불안을 해소하고 위로를 얻는다. 현대와 근접한 조선의 상장(喪葬)의례에도 수의(壽衣), 상복(喪服), 상여(喪轝) 등 다양한 상징물이 사용되었으며, 모든 상징물은 나름의 의미와 역할로 유족의 애도 과정을 도왔다. 그러나 현대 상장의례 상징물은 일제강점기와 급격한 산업화에 따른 도시화 등을 거치면서 전통의 왜곡 및 단절 등으로 유족 애도 과정에서 그 역할과 정체성에서 한계가 나타나고 있다. 이에 따라 현대 유족에게는 애도의 과정에서 우리 민족의 문화적 고유성을 살리면서도 정서적 위안을 줄 수 있는 상징 매개체가 과거보다 부족한 실정이다. 죽은 자를 돕고 유족을 위로하는 의례 상징물은 중국, 일본, 이집트 등 동서양을 포함한 여러 문화권에서 발견되나, 죽은 자와 함께 매장되지 않는다는 점에서 그들의 부장품(副葬品)과 다르다. 그런 반면 조선 후기 상여(喪轝) 장식인 꼭두는 죽은 자를 돕고 유족을 위로하는 역할을 하였으며, 다양한 형태와 상징적 의미를 지니고 있다. 우리 민족의 독특한 문화유산이라 할 수 있다. 그러나 현대 상장의례에서 전통 상장의례 상징물인 꼭두가 사용되는 예는 더 이상 찾아보기 힘들다. 이에 본 연구는 사별을 경험한 유족의 애도 과정을 돕기 위한 방안으로 우리 민족의 전통 상장의례 상징물인 꼭두를 현대적 관점에서 재해석하고 활용 가능성과 방안의 심도 있는 연구를 목적으로 하고 있다. 연구내용은 다음과 같다. 첫째, 조선 후기부터 근현대까지 한국 사회의 상장의례의 변천 과정에 따른 상징물의 변화를 살펴봄으로써, 변형되거나 사라진 우리 민족의 전통 상장의례를 알아보았다. 둘째, 상장의례의 역할과 유족 애도의 개념 및 과정을 이해함으로써 그 상관관계를 파악하였다. 셋째, 상장의례 상징물에 대한 이해와 함께, 그 상징성과 역할을 고찰하고 우리 민족의 전통 상장의례 상징물의 사례를 살펴보았다. 넷째, 본 연구의 연구 대상인 꼭두의 개념과 상징성 및 역할을 조사하고, 조형적 특징과 독창성을 알아보았다. 다섯째, 위 내용을 바탕으로 유족 애도 과정을 돕기 위한 방안으로 꼭두를 현대적 관점에서 재해석하여 활용하는 방안을 모색하였다. 본 연구를 통해 시대의 변화를 반영하면서도 우리 민족의 문화적 전통을 계승하는 새로운 상장의례 문화 콘텐츠로서 꼭두의 가능성을 기대해본다.

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