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Expansion and Activation of Natural Killer Cells for Cancer Immunotherapy
조덕,Dario Campana 대한진단검사의학회 2009 Annals of Laboratory Medicine Vol.29 No.2
Natural killer (NK) cells can kill a wide range of cancer cells and are a promising tool for cell therapy of cancer. NK cells cytotoxicity is regulated by a balance between stimulatory and inhibitory signals. Interleukin-2 is known to increase NK cell cytotoxicity. Although many cytokines have been studied in efforts to induce durable NK cell expansions, most reports indicate a rather modest effect and the requirement for additional stimuli. We found that contact with the K562 myeloid leukemia cell line, genetically modified to express a membrane-bound form of interleukin-15 and the ligand for the costimulatory molecule 4-1BB, induced vigorous expansion of NK cells from peripheral blood. Based on these findings, we developed a method for large-scale clinical-grade expansion of NK cells. This method is currently used to expand allogeneic NK cells for infusion in patients with leukemia and solid tumors. We here summarize methods for expansion and activation of NK cells from human peripheral blood mononuclear cells as well as clinical-scale methods to produce NK cells for immunotherapy under Current Good Manufacturing Practices (cGMP) conditions.
조덕,최경란,전미정,김갑숙,서진영,신명근,김수현,기승정,서순팔,양동욱 대한진단검사의학회 2003 Annals of Laboratory Medicine Vol.23 No.6
배경 : 약-D형은 D 항원이 양적으로만 감소된 경우이지만, 부분-D형은 질적인 결손이 동반되므로 혈청에 항-D를 갖거나, 일부단클론성 항체에는 반응하지 않는다. 따라서, 단클론성 항-D 시약으로 헌혈자 RhD 검사를 시행하는 대부분의 적십자혈액원에서는이를 주의한다. 본 연구에서는 부분-D형 14예를 대상으로 4종류의 단클론성 항-D 시약을 사용하여 RhD 혈액형 검사 및 약-D검사의 반응 양상을 분석하였다.방법 : 2002년 10월부터 2003년 4월까지 헌혈자 201,847명의 검체를 대상으로 D 항원 검사 (monoclonal type, Bioscot, UK)를 혈액형 자동분석기(PK-7200, Olympus, Japan)에서 효소법(bro-melin)을 이용하여 분석하였다. 이중 음성인 649건에 대하여 수작업에 의한 튜브법으로 4종류의 시약을 이용하여 Rh 혈액형 검사및 약-D 검사를 시행하였고, 시약 간에 다른 반응양상을 보인 14예는 6종류의 단클론 항-D가 함유된‘ID-partial RhD-typing'(Diamed, Switzerland)로 확진 검사를 실시하였다.결과 : 부분-D형의 아형은 단클론 항체에 의한 반응 양상에 따라 92.9% (13/14)가 DFR 유형이었고, 7.1% (1/14)는 아형 구분이 불가능한 유형이었다. 4종류의 상용화된 단클론성 항-D 시약을 이용한 RhD 검사에서 부분-D형 14예는 모두 반응이 없었으나,추가로 실시한 약-D 검사에서는 Dade Behring (USA)사의 항-D에는 100% (14/14)에서 음성, Ortho-clinical diagnostic (USA)사의 항-D에는 92.9% (13/14)는 trace-1+ 양성, Bioscot (UK)사의 항-D에는 100%에서 trace-3+ 양성, 그리고 녹십자(Korea)사의 항-D는 100%에서 1+~3+ 양성이었다.
대립유전자특이중합효소연쇄반응법에 의한 간편한 ABO 유전형 검사
조덕,전미정,오봉준,송정원,신명근,신종희,서순팔,양동욱 대한진단검사의학회 2005 Annals of Laboratory Medicine Vol.25 No.2
배경 :ABO 유전형 검사는 간혹 ABO 불일치나 아형을 결정할 때 혈청학적 검사보다 유용한 정보를 제공할 수 있다. 저자들은 제한효소를 사용하지 않고A, B, O allele 뿐 아니라 한국인에서 흔한 cis-AB allele를 검출할 수 있는 간편한 allele-specificpolymerase chain reaction (AS-PCR)을 개발하고자 하였다. 방법 : AS-PCR은 A, B, O allele의염기서열 중 261, 526, 803번째의 염기서열 차이를 이용하여 ARMS (amplification refrac-tory mutation system)으로활용하여 고안한 시발체를 이용하였다. PCR은 2002년 7월부터 2003년 2월까지 광주전남 적십자혈액원의 공혈자 중 기존의 polymerase chain reaction-restric-tion enzyme length polymorphism (PCR-RFLP)법으로 유전형 검사를 실시한 후 -70℃에서 보관하고 있던 60명의 DNA 검체에 실시하였다.결과 :새로 고안한 PCR을 실시한 결과, 기존에 PCR-RFLP로실시했던 결과 즉, A/O (n=10), A/A (n=5), B/O (n=10),B/B (n=5), O/O (n=10), cis-AB/A (n=5), cis-AB/B (n=10), cis-AB/O (n=5)와 모두 일치하였다. 결론 : 새로 고안한 PCR은 한국인의 A, B, O, cis-AB allele들을 검출하는 ABO 유전형 검사로 간편하고, 정확한 방법이다. Background : Genotyping of ABO gene could be more informative and valuable than serological typing in some situations such as the resolution for ABO discrepancy between the cell typing and serum typing and determination of A and B subgroups. We developed a simple allele-specific polymerase chain reaction (AS-PCR) method without the use of any restriction enzymes to detect the A, B, O, and cis-AB alleles for Koreans. Methods : An AS-PCR was designed with amplification refractory mutation system (ARMS) at nt (nucleotide) 261 (exon 6) and at nt 526, 803 (exon 7) of ABO gene to detect specific nucleotide sequence differences between the ABO alleles. We tested for ABO genotyping 60 DNA samples previously tested by PCR-RFLP and stored at -70℃. These samples had been obtained from blood donors recruited at the Gwangju-Chonnam Red Cross Blood Center between July 2002 and February 2003. Results : With our new PCR method, the genotypes of the 60 samples were found to be A/O (n=10), A/A (n=5), B/O (n=10), B/B (n=5), O/O (n=10), cis-AB/A (n=5), cis-AB/B (n=5), and cis- AB/O (n=10), which were the same results obtained previously with PCR-RFLP. Conclusions : Our AS-PCR is a simple and accurate method for the detection of A, B, O, and cis- AB alleles for Koreans
조덕,이진솔,박지영,전미정,송정원,김수현,신명근,신종희,서순팔,양동욱 대한진단검사의학회 2006 Annals of Laboratory Medicine Vol.26 No.2
배경 : ABO 혈액형검사를 환자나 헌혈자에게 실시하면, 혈구형과 혈청형 결과가 일치해야 한다. 두 검사법의 결과가 불일치할경우에는 추가적인 혈청학적검사 뿐 아니라 ABO 유전형검사가이들 원인을 규명하는데 활용될 수 있다. 이에 저자들은 광주전남적십자 혈액원의 헌혈자와 전남대학교병원의 환자에서 발견된ABO 혈액형 불일치 검체를 대상으로 ABO 유전형검사로 해결했었던 예들을 분석해 보았다.방법 :2004년 5월부터 2005년 7월까지 전남대학교병원 진단검사의학과 혹은 광주전남적십자혈액원에서 ABO 불일치가 의심되어 ABO 유전형검사를 시행하였던 46검체를 대상으로 하였다.혈청학적 검사는 표준 시험관법에 따랐으며, ABO 유전형검사는A, B, O, cis-AB, Avar (784 G >A), 그리고 Bvar (547 G >A)allele를 검출할 수 있는 대립유전자특이중합효소연쇄반응법(Ale-le-Specific PCR)에 의해 실시하였고, 5검체는 ABO 유전자의exon 6과 7을 직접염기서열분석을 실시하였다. 결과 : 적혈구측 원인에 의한 18예는 유전형이 cis-AB/O 4예(표현형 A 2B3 3예, A2B 1예), cis-AB/A 5예(A1Bx or el ), A/O2예(O 1예, A m or x 1예), B/O 1 예(B m or x 1예), A/B 4예(A2B1예, A1Bx or el 1예, A1B3 2예), 그리고 Avar/B 2예(A wB 2예)였다. 한편, 혈청측 원인에 의한 28예는 유전형이A/O 18예(표현형A1 16예, A int 2예), A/A 7예(A1 5예, A1Bx or el 1예, A1Bw 1예),O/O 3예(O 1예, B w 2예)였다.
한국 군장병 삼일열 말라리아(P. vivax) 진단에 OptiMAL 검사와 GENEDIA Malaria (P. vivax) Ab Rapid I, II 검사의 비교
조덕,임재균,이상오,소병조,임채승,양동욱 대한감염학회 2001 감염 Vol.33 No.4
Background : The diagnosis of malaria has been usually made using microscopic examination of Wright stained thin blood films in Korean army. This method is labor-intensive, time consuming and requires the microscopic expertise. Therefore, the alternative techniques, rapid diagnostic test, have been sought for use in Korean army. We performed a comparison of the OptiMAL test with GENEDIA Malaria (P. vivax) Ab Rapid I, II to assess its sensitivity and specificity of Plasmodium vivax malaria. Methods : Blood specimen were collected from 51 patients who were presented and initially diagnosed for P. vivax by the microscopy of blood smears and from 30 control patients without malaria infection at the Capital Armed Forces General Hospital (CAFGH) between October 2000 and February 2001. Among the 51 patients, we also collected 24 samples from 24 patients at 2 or 3 days after therapy. The OptiMAL test and GENEDIA Malaria (P. vivax) Ab Rapid I, II were performed according to the manufacturer's instructions on all samples respectively. Results : Compared with the blood firm, sensitivities and specificities of the OptiMAL test, GENEDIA Malaria (P. vivax ) Ab Rapid I and GENEDIA Malaria (P. vivax) Ab Rapid II were 94.1∼100% (29/29), 80.4∼83.3%, 96.1 ∼96.7% respectively. One case was interpreted as 'undetermined' by OptiMAL test. In 24 patients during therapy, the sensitivities of the OptiMAL test, GENEDIA Malaria (P. vivax) Ab Rapid I and GENEDIA Malaria (P. vivax) Ab Rapid II on 8 specimens with mean 120/□ parasitemia and 16 specimens with negative parasitemia were 75∼43.8%, 87.5∼81,3%, 100∼100% respectively. Conclusion : Our data demonstrated that the sensitivity and specificity of the GENEDIA Malaria (P. vivax) Ab Rapid I were not satisfactory, but the sensitivity and specificity of the OptiMAL test and GENEDIA Malaria (P. vivax) Ab Rapid II were relatively high and useful diagnostic tests for diagnosis of , P. vivax in areas like the militaries where laboratory facilities are poor or non-existent. (Korean J Infect Dis 33:267∼272, 2001)