다산의 실학사상과 문학론 연구

윤기홍 근역한문학회 1989 漢文學論集 Vol.7 No.-

고온성 Bacillus sp.의 Xylanases 특성 비교

윤기홍 우송대학교 1997 우송대학교 논문집 Vol.2 No.-

토양에서 분리된 cellulase-free xylanase 생산균인 고온성 Bacillus sp. KK-1의 배양상등액으로 부터 내열성 xylanase S를 정제하였다. Bacillus sp. KK-1의 xylanase 유전자를 확보하기 위해 총 염색체 DNA를 이용하여 xylanase 유전자를 대장균에 크로닝한 결과 xylanase 활성을 보이는 30개 대장균 형질전환주를 얻어 이들이 생산하는 xylanases의 열안정성을 조사한 결과 모두 xylanase S보다 낮았다. 또한 형질전환주에서 분리된 plasmids를 여러가지 제한효소로 절단하여 분석한 결과 동일한 부분의 DNA조각을 공유하고 있었다. 이로써 이들 형질전환주는 동일한 xylanase를 생산하고 있다고 판단되며 이를 xylanase Y라 명명하고 대장균 형질전환주 균체로 부터 xylanase Y를 정제하였다. 정제된 xylanase S와 xylanase Y의 성질을 비교 분석하였는데 이들은 전혀 다른 성질을 보였으므로 Bacillus sp. KK-1이 최소한 두 종류의 xylanases를 생산하는 것을 알 수 있다. 특히 xylanase S는 열안정성이 매우 높아 65C에서도 약 10시간 방치하여도 효소 활성이 75% 이상 유지 되었으나 xylanase Y는 50C에서 30분간 방치하여도 활성을 약 25% 정도 상실하였다. Xylanase Y가 열안정성이 xylanase S에 비해 매우 낮으므로 Bacillus sp. KK-1를 50C에서 약 16시간 동안 배양하여 얻은 배양상등액에서는 xylanase S와는 달리 xylanase Y의 활성이 거의 상실되어 정제될 수 없었던 것으로 여겨진다. A thermostable xylanase, designated xylanase S, was purified from the culture supernatant of Bacillus sp. KK-1 which was isolated from natural soil. In order to obtain Bacillus sp. KK-1 xylanase gene. xylanase gene was cloned in Escherichia coli from Bacillus sp. KK-1. From approximately 20,000 transformants. 30 E, coli colonies showing xylanase activity was obtained. It was found that almost all xylanases from the E, coil clones was less stable than xylanase S at 60℃. Issert DNAs of recombinant plasmids, isolated from E. coil clones, shared the common DNA fragment of Bacillus sp. KK-1, suggesting that E coli clones produced an identical xylanase. Xylanase, named xylanse Y, was therefore purified from cell free extract of Em coli, The physical and chemical properties fo purified xylanase Y were identified to be different from those of xylanase S, resulting that Bacillus sp. KK-1 produced at least two xylanses. Especcially ,xylanase S retained over 75% io its maximum activity at 65℃ for 10 h. But , xylanase Y lost 25% of its activity at 50℃ within 30 min. From this result. it was supposed that xylanase Y could not purified from the culture supernatant of Banillus sp. KK-1 growing for 16 h at 50℃ because of inactivation of the xylanase Y unlike xylanase S.

내열성 α-Amylase 생산균의 탐색과 분리균 α-Amylases의 특성

윤기홍 우송대학교 1998 우송대학교 논문집 Vol.3 No.-

토양으로 부터 고온성 미생물을 1,286 주 분리하고 이들의 수용성 전분 분해능을 조사하여 α-amylase를 생산하는 균주를 402 주 확보하였다. 이들 중 불용성 전분이 가수분해능이 우수한 α-amylase 생산균 65 주를 각각 액체배양하여 배양상등액을 이용하여 전분분해능을 검토하여 전분분해능이 우수한 14주를 선발하였다. Denaturing-polyacrylamidegel에서 α-amylase 활성염색을 수행하여 4 주가 α-amylase 생산능이 우수한 것으로 나타났으며 이들 중 고온에서 효소활성과 열안정성이 높은 것이 4 주로 확인되었다. 특히 열안정성이 가장 뛰어난 α-amylase를 생산하는 분리균 16-7을 동정한 결과 Bacillus licheniformis로 판명되었다. 분리균 No. 16-7이 생산하는 α-amylase를 정제하여 효소 특성을 분석한 결과 N-말단의 아미노산 잔기배열과 분자량이 B. licheniformis의 효소와 동일하였으나 열안정성과 최적반응온도는 더 높았다. Among the thermophilic bacteria of 1,286 isolated from the natural soil. 402 a-amylase-producing strains were selected based on their liquefying activity of the soluble starch. The 65 isolates were further screened to produce the a-amylase hydrolyzing efficiently the insoluble starch from 402 isolates. They were grown in the complex broth, and then the culture supernatants were inverstigated for degradastion of the starch, resulting that the 14 isolates showed high activities for starch hydrolysis. Activity staining of the crude enzymes from the 14 isolates was done on the denaturing-polyacrylamide gel. From the result. the 4 isolates were found to produce the thermostable a-amylases with high activities. Especially, isolate 16-7 produced the a-amylase showing the highest thermostability. It was identified as Bacillus Iicheniformis. The a-amylase was purified and analyzed to have the N-terrminal amino acid sequences identical to that of B. Iicheniformis a-amylase. But, the 16-7 a-amylase was more thermostable than B. Iichniformis a-amylase.

Trigonopsis variabilis의 D-amino acid oxidase 정제

윤기홍 우송대학교 1999 우송대학교 논문집 Vol.4 No.-

배지에 methionine을 0.2% 이상 첨가하였을 때 Trigonopsis variabilis 배양균체내 D-amino acid oxidase (D-AAO)의 비활성도는 증가하였으나 균의 성장도는 매우 갑소되었다. 배양 후 배지의 pH가 급격히 감소하였으며 이에 따라 균의 성장이 억제되는 것으로 확인 되었는데 배양액의 pH를 유지할 경우 D-AAO의 생산성을 높일 수 있을 것으로 판단된다. T. variabilis 균체파쇄액으로 부터 DEAE-Sepharose와 Mone Q column을 사용항여 D-AAO의 비활성이 7.23 U/mg protein이 되도록 정제하였는데 정제과정 중 균체파쇄액에 미약하게 존재하는 catalase가 제거되었다. 정제된 D-AAO를 이용하여 cephalosporin C (CPC)의 탈아미노 반응을 수행한 결과 반응액 중에 catalase를 첨가하였을 때는 CPC가 ketoadipyl 7-aminocephalosporanic acid (7-ACA)로 전환되었으나 catalase를 첨가하지 않았을 때는 반응산물의 대부분이 glutaryl 7-ACA로 전환되고 미량의 ketoadipyl 7-ACA와 미지의 물질이 생겨나는 것으로 확인되었다. Specific activity of D-amino acid oxidase (D-AAO) was estimated to be increased in Trigonopsis variabilis cells grown on the broth supplemented with methionine over the concentration of 0.2%, but the cell growth was severely inhibited by the methionine, Final pH of the medium was found to decrease dramatically after the cell growth, suggesting that the dectrased pH caused to inhibit the growth of T. variabilis cell. In order to imprpve the D-AAO productivity of T. variabilis it is required to maintain the medium pH during cell growth. D-AAO was purified from cell-free extract of T. variabilis by DEAE-Sepharose and Mono Q culumn chromatography with specitic acitivity of 7.23 U/mg protein. Catalase activity was not detected in the purified enzyme. When the T. variabilis D-AAO reacted cephalosporin C (CPC) as a substrate with catalase or not, CPC was mainly converted to ketoadipyl 7-aminocephalosporanic acid (7-ACA) in the presence of catalse. In the absence of catalase, the reactants were, however, identified to be glutaryl 7-ACA with trace amount of ketoadipyl 7-ACA and unkwon compounds.

鄕歌의 歌唱과 形式에 관한 연구

尹基洪 연세대학교 국어국문학과 1985 연세어문학 Vol.18 No.-

Mannanase를 생산하는 Bacillus속 균의 RAPD-PCR 분석

윤기홍 우송대학교 2004 우송대학교 논문집 Vol.9 No.-

가정에서 제조된 된장에서 mannanase 생산성이 높은 균으로 분리된 9종의 균주는 모두 포자를 형성하며 그람양성 간균으로 Bacillus속에 속하는 것으로 추정된다. 이들 분리균간에 유전체의 유사성을 조사하기 위해 10 nucleotides로 구성된 oligonucleotides 6 종과 12 nucleotides로 구성된 oligonucleotides 2종을 primer로 사용하여 Random Amplified Polymorphic DNA-중합연쇄반응 (RAPD-PCR)의 조건을 검토한 결과 40℃보다는 30℃와 35℃에서 annealing 반응을 수행하는 것이 효율적이었다. RAPD-PCR에 의해 증폭된 DNA를 agarsoe gel 전기영동으로 분석한 결과 primer에 따라 증폭된 DNA의 양과 그 크기의 다양성이 달랐으며, 분리균에 따라서도 특이한 증폭 DNA가 관찰되었다. 균주에 따라 증폭된 DNA를 비교한 결과 된장에서 분리된 9 종의 균주는 Bacillus licheniformis와는 달랐으며, Bacillus subtilis와 유사하였다. 특히 분리균 중 5 종류는 B. subtilis와 유사도가 매우 높았으며, 분리균간에도 서로 유사도가 높은 균이 있었지만 동일하지는 않은 것으로 확인되었다. 따라서 RAPD-PCR 방법에 의해 균주간 유사성을 비교하는 것은 다양한 미생물 자원을 확보하는데 유용한 방법이라고 여겨진다. Nine bacterial strains producing the extracellular mannanase were isolated from Korean soybean paste. The isolates are regarded as Bacillus on the basis of their morphological properties, which are gram positive and rod in shape with spore. To examine the similarity between genomes of the isolates, Random Amplified Polymorphic DNA - Polymerase Chain Reaction (RAPD-PCR) was performed with 6 kinds of oligonucleotides consisting of 10 nucleotides and 2 kinds of oligonucleotides consisting of 12 nucleotides. As a results of RAPD-PCR at different annealing temperatures such as 30℃, 35℃ and 40℃, many different DNA fragments were generated at 30℃ and 35℃ more than 40℃. Relatedness of the nine isolates from soybean was determined by comparing the amplified DNA fragments between the isolate strains, Bacillus subtilis and B. licheniformis, expecting that the nine isolates are different from B. licheniformis and five of them are very similar to B. subtilis. It was also found that all isolates are different strains. Therefore, RAPD-PCR is regarded as a useful method for preparing the bank of the diverse microorganisms from nature.

고려시대 전기의 문학관 연구

윤기홍 열상고전연구회 1990 열상고전연구 Vol.3 No.-

유전자재조합 대장균으로부터 Bacillus sp. 79-23의 Cellulase 정제와 특성분석

윤기홍 우송대학교 부설 산업연구원 1999 산업연구 Vol.1 No.1

Carboxymethyl celluase (CMCase) was purified from cell-free extract of the recombinant Escherichia coli carrying a Bacillus sp. 79-23 CMCase gene (celS) by DEAE-Sepharose and phenyl-Sepharose column chromatography with specific activity of 400 U/mg protein. The molecular mass of the purified enzyme was estimated to be approximately 37.5 daltons by sodium dodecyl sulfatepolycarylamide gel electrophoresis. The viscosity of carboxymethyl celluose was dramatically decreased by the purified enzyme identifying that the purified enzyme is a CMCase, while the enzyme was known to be active on para-nitrophenyl-β-cellobioside. The CMCase activity was markedly inhibited by cellobiose, but was not inhibited by glucose. The enzyme activity was activated by divalent metal ions such as Mn²+ and Cu²+, but was completely inhibited by Hg²+. The enzyme was very stable below 50℃ and retained 80% of its maximum activity after incubation for 3 hours at 55℃, suggesting that few problems are in handing the Bacillus sp. CMCase as industrial enzyme at ambient temperature.

극초단 고차솔리톤펄스를 이용한 전광위상천이스위치에서 고차 비선형상호작용에 관한 연구

윤기홍,송재원 한국광학회 2002 한국광학회지 Vol.13 No.3

전광위상천이스위치(All-optical phase-shift switch)에서 백 펨토초이하의 펄스폭을 가지는 두 극초단 직교펄스의 전파특성을 수치적으로 연구하였다. 이러한 전광스위치에서 자기라만산란 및 상호라만산란과 walk-off 효과를 고려하여, 솔리톤펄스와 고차솔리톤펄스간의 복잡한 비선형상호작용이 펄스의 형태변화, 펄스의 위상천이분포, 그리고 대조비등의 스위칭특성에 끼치는 영향들을 분석하였다. 특히 스위칭을 위해 필요한 walk-of f효과를 라만 walk-off효과에서 얻을 수 있기 때문에, 이러한 전광스위치에 전형적인 복굴절률(Δn = 2.4$\times$$10^{-5}$)을 가지는 광섬유를 사용해도 좋은 스위칭특성을 가짐을 보였다. We study numerically the temporal evolutions of two orthogonally polarized pulses with width less than 100fsec in all-optical phase-shift switches. We analyze the complicated interplay between a soliton pulse and a higher-order soliton pulse, including the self-and the cross-Raman scattering and the walk-off effect. We also investigate the influence of these interactions on switching performance, including pulse-shape, phase-shift distribution, and contrast ratio. In particular we show that an optical fiber with a typical birefringence (Δn : 2.4$\times$10$^{-5}$ ) can be used with good switching performance in such all-optical switches.

Bacillus licheniformis WL-12의 cellulase 유전자 클로닝과 발현

윤기홍,Yoon, Ki-Hong 한국미생물학회 2006 미생물학회지 Vol.42 No.4

가정에서 제조된 된장으로부터 cellulase 생산균으로 분리된 고온성 WL-12는 형태적 특성, 생화학적 성질 및 16S rRNA의 염기서열에 근거하여 Bacillus licheniformis로 동정되었다. B. licheniformis WL-12의 cellulase 유전자를 클로닝하여 그 염기서열을 결정한 결과 cellulase 유전자(celA)는 517 아미노산으로 구성된 단백질을 코드하며 1,551 뉴클레오티드로 이루어졌다. 아미노산 잔기배열을 분석한 결과 WL-12의 cellulase는 활성영역과 cellulose 결합영역으로 구성되어 있었으며, glycosyl hydrolase (GH) family 5에 속하는 B. licheniformis, B. subtilis와 B. amyloliquefaciens의 cellulase와 높은 상동성을 보였다. 클론된 celA를 발현용 vector에 도입하여 B. subtilis에서 발현시켜 cellulase 최대생산성이 7.0 units/ml에 이르렀다. A thermophilic bacterium producing the extracellular cellulase was isolated from soybean paste, and the isolate WL-12 has been identified as Bacillus licheniformis on the basis on its 16S rRNA sequence, morphology and biochemical properties. A gene encoding the cellulase of B. licheniformis WL-12 was cloned and its nucleotide sequence was determined. This cellulase gene, designated celA, consisted of 1,551 nucleotides, encoding a polypeptide of 517 amino acid residues. The gene product contained catalytic domain and cellulose binding domain. The deduced amino acid sequence was highly homologous to those of cellulases of B. licheniformis, B. subtilis and B. amytoliquefaciens belonging to the glycosyl hydrolase family 5. When the celA gene was highly expressed using a strong B. subtilis promoter, the extracellular cellulase was produced up to 7.0 units/ml in B. subtilis WB700.