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Effect of Supplement during In Vitro Maturation on IVM, IVF and Glutathione Level in Bovine Oocytes
오신애,김창근,정영채,방명걸 한국발생생물학회 2006 발생과 생식 Vol.10 No.4
본 연구는 소의 미성숙 난포란의 체외성숙시 의 첨가가 체외성숙, 체외수정 후 웅성전핵의 형성 및 세포질 내의 GSH 수준에 미치는 영향을 알아보고자 실시하였다. 체외성숙시 과 의 를 첨가한 경우 대조구에 비하여 성숙율이 증가하는 것으로 나타났으며(p<0.05), 모든 실험구에 있어서 12시간 체외성숙보다 24시간 체외성숙에서 높은 성숙율을 나타냈다(p<0.05). 체외수정 후 웅성전핵 형성에 있어서는 와 농도의 첨가구에서 대조구에 비하여 높게 나타났으나 Experiments were conducted to determine the effects of beta-mercaptoethanol() supplements to the maturation medium on in vitro fertilization(IVF) and intracellular glutathione(GSH) concentration. Bovine cumulus-intact oocytes were matured in TCM-199 medium containing FBS, hormonal supplements, and (0, 25 and ) for 12h and 24 h. After culture, cumulus-free matured oocytes were co-incubated with frozen-thawed spermatozoa for 24h. Maturation rate increased(p<0.05) in treatment group, but no significant differences among treatment groups. Also, increases(p<0.05) in intracellular GSH concentration before and after fertilization were observed in supplements to the maturation medium. Male pronuclear formations after IVF was increased(p<0.05) in treatment group, but no significant difference among treatment groups. In conclusion, supplementing into the maturation medium increased maturation rates, fertilization rates, and intracellular GSH concentrations.
제주흑우 동결정액 제조 시 Low Density Lipoprotein (LDL)의 첨가가 동결 융해 후 정자의 성상에 미치는 영향
오신애,최선호,고민희,강태영,오영미,정영호,조원모 韓國受精卵移植學會 2012 한국동물생명공학회지 Vol.27 No.3
This study was designed to determine whether low-density lipoporoteins (LDL) extracted from egg yolk in extender improve the function of Korean Jeju Black Bull semen. The semen was cryopreserved with 5% ethylene glycol (EG) or 7% glycerol (G) extenders containing 10% egg yolk (EY), 4% LDL and 5% EY or 8% LDL. Frozen-thawed sperm were evaluated sperm motility, viability, membrane integrity and acrosome integrity. Post-thawed sperm motility has been significantly higher (p<0.05) in 4% LDL + 5% EY (; EG and ; 7% G) than 8% LDL (; EG and ;G). Treatment of 4% LDL + 5% EY-EG () has been significantly improved sperm viability compared to other treatments except 10% EY - EG. Moreover, in membrane integrity, swollen sperm ratio has been only significantly increased (p<0.05) in 4% LDL + 5% EY - EG () among all treatments. In assess to detect acrosome integrity, especially, AR pattern ratio has been significantly decreased (p<0.05) in 4% LDL + 5% EY - EG among all treatments. In sperm viability as time passes, between 4% LDL + 5% EY and 10% EY, there was no significant difference, but 8% LDL was significantly decreased sperm viability in EG (1 and 2 hrs) and G (30 min, 1, 2, 5 and 12 hrs) extender. However, there were no significant differences among all treatments except 8% LDL-G in sperm membrane integrity. 8% LDL-G has been significantly decreased swollen sperm ratio at 5 hrs after thawed. It is concluded from these results that 4% LDL + 5% EY to the freezing extender showed more positive effect on the frozen-thawed spermatozoa in Korean Jeju Black bull.
Proteomic approaches to defining sperm fertility in porcine
오신애 한국발생생물학회 2011 한국발생생물학회 학술발표대회 Vol.30 No.-
경제동물에 있어 정자의 수정능력의 예측은 매우 중요한 일이다. 그러나 현재까지 이용되고 있는 정자의 기능적 분석은 정자의 운동성, 활력, 농도 및 일반적인 형태적 분석 등과 같은 양적 형질의 평가만을 수행할 뿐 수정능력 예측을 위한 객관적이고 정확한 도구는 개발되지 못하였다. 즉, 인반적인 정자의 분석은 웅성의 수정능력을 진단하는데 있어 그 한계를 가지고 있는 실정이다. 우수 동물 및 농가의 생산력을 증진시키고 안정적인 생산체제를 구축하기 위하여 새로운 정자의 수정능력 예측법의 개발이 시급한 실정이다. 최근 보다 정확하고 객관적인 수정능력을 예측하기 위하여 정자의 hyperactivation, 수정능획득과 같은 intact-acrosome, 정자의 투명대 결합능력, 정상적 DNA의 상태 등과 같은 다양한 방법이 수행되고 있다. 그러나 이러한 방법들이 정자의 기능과 수정능력 사이의 상관관계가 매우 적기 때문에 정확한 수정능력의 예측에 있어 많은 의문이 제기되고 있다. Proteomics는 postgenome 시대에 새로운 연구로서, 생물학적 과정에 관련된 세포 mechanism을 식별하는 proteome의 질적, 양적 비교로 정의할 수 있다. 정자는 transcription이 불활성화 되어 있는 세포이므로 proteomics를 이용하여 정자의 분자적 기능을 보다 정확히 이해할 수 있다. 또한 정자 proteome의 비교 분석은 정자가 수정을 위한 수정능획득의 방법과 정자가 서로 다른 수정 능력을 가지는 원인을 이해하는데 있어 매우 중요하다. 본 연구의 목적은 돼지의 체내 수정능력을 예측하는 방법의 최적화를 통하여 새로운 예측방법을 개발하고, 나아가 정자의 수정능과 관련된 프로테옴을 동정하여 정자의 수정능력을 예측하는 바이오 마커로의 이용 가능성을 입증하고자 하였다. 본 실험의 분석 결과의 민감도를 높이기 위하여 모든 과정을 최적화 하는 과정을 거쳤으며, quality control을 실시하여 안정적인 결과를 도출하였다. 투명대를 제거한 햄스터 난자와 미성숙 돼지 난포란을 이용한 정자의 침투능력검사에 있어 heparin을 처리한 실험구에서 가장 높은 침투율을 나타냈다. 정자 침투능력검사에 있어 투명대를 제거한 햄스터 난자를 공시하였을 때 돼지의 미성숙 난포란을 이용한 결과보다 유의적으로 높은 결과를 나타냈다. 소의 동결정액을 이용하여 quality control을 실시하여 실험의 변이를 제거하였으며, 또한 암컷의 변이 요인 또한 가능한 모두 제거하였다. 최적화된 SPA (sperm penetration assay using zona-free hamster oocytes)는 돼지의 평균 산자수와 유의적인 상관관계를 나타냈으나, 수태율과는 어떠한 상관관계도 나타내지 않았다. 산자수 8마리 이하를 예측하기 위하여 Sperm Fertility Index (SFI)을 1.2로 cutoff 하였을 경우 정확성은 92%이며, 산자수 10마리 이상을 예측하기 위하여 SFI를 2.5로 정하였을 경우 96%의 정확성을 나타내어 수정능력 예측을 위한 방법으로 유용성이 입증되었다. 산자수가 낮은 group과 높은 group의 정자로부터 발현되는 단백질의 수준을 분석한 결과, 총 108개의 단백질 spot을 찾을 수 있었다. SigmaGel programe을 이용하여 spot의 농도를 분석한 결과, 25개의 단백질 spot이 서로 다르게 발현하였으며, 산자수가 낮은 정자에서 보다 높은 농도로 발현하고 있음을 알 수 있었다. 25개의 단백질 spot을 LC-MS/MS 방법을 이용하여 분석한 결과, 총 20개의 단백질을 동정할 수 있었으며, 이들 20개 단백질 중 mitochondrial trifunctional proteins이 산자수가 높은 group의 정자에서 높은 발현을 나타냈으며, PHGPx와 Arginine Vasopressin Receptor 2가 산자수가 낮은 group의 정자에서 높은 발현을 나타내었다. 이러한 결과들은 이들 방법들이 단지 정자의 수정능력을 분석하는데만 이용할 수 있는 것이 아니라 biomarker로서 정자의 수정능력을 조절하는 인자와 관련된 유전자를 발굴하는데도 유용할 것으로 사료된다.
돼지 정자내 Phosphollpids Hydroperoxide Glutathione Peroxidase와 Heparin-Binding Protein의 발현 수준과 번식 능력의 관계
오신애,신차균,유영아,한경수,방명걸 한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 2007 Reproductive & developmental biology Vol.31 No.3
본 연구는 정자 내의 phsopholipid hydroxide glutathion peroxidase (PHGPx) mRNA 발현 수준, heparin-binding protein (HBP) mRNA 발현 수준, 수태율 그리고 산자수 사이의 관계를 조사하고자 실시하였다. 수태율과 산자수 사이에 있어서 상관관계는 나타나지 않았다. PHGPx mRNA 발현 수준에 있어 산자수가 10두 이상 군에서 (2,414.7±400.7) 8두 미만 군보다 (1,875.8±311.2) 높게 나타났으나 유의적인 차이는 없었다. HBP mRNA 발현 수준에 있어서도 산자수 10두 이상 군에서 (2,255.9±360.8) 8두 미만 군보다 (2,155.4±378.0) 약간 높은 결과를 보였으나, 유의적인 차이는 인정되지 않았다. PHGPx mRNA 발현 수준과 산자수 사이의 관계는 (r=0.206) 정의 상관관계를 보였으나, 유의한 상관관계는 나타나지 않았다. 본 실험의 결과, PHGPx와 HBP의 발현수준이 수태율, 산자수와 유의한 상관관계를 보이지 않았기 때문에 PHGPx와 HBP가 정자의 수정능력을 예측하기에는 미흡한 면이 있다. The objective of the study was to determine the relationship between the mRNA expression levels of sperm phospholipids hydroperoxide glutathione peroxidase (PHGPx) and heparin-binding protein (HBP), and in-vivo fertility in boars. The farrowing rate was not correlated with litter size. Sperm PHGPx mRNA expression level of the larger litter size (over 10) group (2,414.7±400.7) was high that of smaller litter size (below 8) group (1,875.8±311.2). Sperm HBP mRNA expression level was also higher in the larger litter size (2,255.9±360.8) group than the smaller litter size (2,155.4±378.0). However, significant differences were not observed. Sperm PHGPx mRNA level was correlated positively with litter size (r=0.206). Because the expression levels of PHGPx and HBP are not strongly correlated with in-vivo fertility, PHGPx and HBP can not be considered a predictive measure for fertility in boars.
소 미성숙 난포란의 체외성숙시 ${\beta}-Mercaptoethanol$의 첨가가 체외성숙, 체외수정 및 Glutathione 수준에 미치는 영향
오신애,김창근,정영채,방명걸,Oh, Shin-Ae,Kim, Chang-Keun,Chung, Yung-Chai,Pang, Myung-Geol 한국발생생물학회 2006 발생과 생식 Vol.10 No.4
본 연구는 소의 미성숙 난포란의 체외성숙시 ${\beta}-mercaptoethanol({\beta}-ME)$의 첨가가 체외성숙, 체외수정 후 웅성전핵의 형성 및 세포질 내의 GSH 수준에 미치는 영향을 알아보고자 실시하였다. 체외성숙시 $25\;{\mu}M$과 $50\;{\mu}M$의 ${\beta}-ME$를 첨가한 경우 대조구에 비하여 성숙율이 증가하는 것으로 나타났으며(p<0.05), 모든 실험구에 있어서 12시간 체외성숙보다 24시간 체외성숙에서 높은 성숙율을 나타냈다(p<0.05). 체외수정 후 웅성전핵 형성에 있어서는 $25\;{\mu}M$와 $50\;{\mu}M$ 농도의 ${\beta}-ME$ 첨가구에서 대조구에 비하여 높게 나타났으나(p<0.05), $25\;{\mu}M$과 $50\;{\mu}M$ 농도구와의 유의적인 차이는 없었다. GSH의 수준은 체외성숙 후 $50\;{\mu}M$의 ${\beta}-ME$ 첨가구가 다른 처리구에 비교하여 높게 나타났으며(p<0.05), 체외수정 후 웅성전핵이 형성된 다음 세포질 내 GSH 수준 역시 $50\;{\mu}M$의 ${\beta}-ME$ 첨가구에서 가장 높은 결과를 나타냈다(p<0.05). Experiments were conducted to determine the effects of beta-mercaptoethanol(${\beta}-ME$) supplements to the maturation medium on in vitro fertilization(IVF) and intracellular glutathione(GSH) concentration. Bovine cumulus-intact oocytes were matured in TCM-199 medium containing FBS, hormonal supplements, and ${\beta}-ME$(0, 25 and $50\;{\mu}M$) for 12h and 24 h. After culture, cumulus-free matured oocytes were co-incubated with frozen-thawed spermatozoa for 24h. Maturation rate increased(p<0.05) in ${\beta}-ME$ treatment group, but no significant differences among treatment groups. Also, increases(p<0.05) in intracellular GSH concentration before and after fertilization were observed in $50\;{\mu}M\;{\beta}-ME$ supplements to the maturation medium. Male pronuclear formations after IVF was increased(p<0.05) in ${\beta}-ME$ treatment group, but no significant difference among treatment groups. In conclusion, supplementing ${\beta}-ME$ into the maturation medium increased maturation rates, fertilization rates, and intracellular GSH concentrations.
자연물을 활용한 흙 놀이가 유아의 자연친화적 태도와 창의성에 미치는 효과
신애선 학습자중심교과교육학회 2023 학습자중심교과교육연구 Vol.23 No.16
Objectives This study aims to investigate the effects of soil play with natural objects on young children's nature-friendly attitude and creativity. Methods For this purpose, the study selected 36 five-year-olds(experiment group: 18, comparison group: 18) attending S Kindergarten in J City, Jeonbuk. Young children in the experiment group engaged in soil play with natural objects for eight weeks on November 7~December 30, 2022, and young children in the comparison group engaged in sand play with artifacts. Results The analysis results first show that soil play with natural objects had positive effects on young children's nature-friendly attitude. Secondly, soil play with natural objects also had positive effects on their creativity. Conclusions In conclusion, soil play with natural objects is a teaching and learning method to promote young children's nature-friendly attitude and creativity and demonstrates that young children should be provided actively with various activities with natural objects and soil in the field of early childhood education.