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        pBRG-4를 이용한 Metarhizium anisopliae의 형질전환

        이동규,예완해,황철원,권석태,강선철,Lee, Dong-Gyu,Yeh, Wan-Hae,Hwang, Cher-Won,Kwon, Suk-Tae,Kang, Sun-Chul 한국응용생명화학회 1998 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.33 No.2

        작물 병해충에 대한 무공해 미생물 농약 개발의 일환으로 곤충 병원성 곰팡이 Metarhizium anisopliae의 분자생물학적 육종을 위해 이 균주의 형질전환계를 확립하였다. M. anisopliae의 원형질체를 제작하여 benomyl 약제에 대하여 저항성을 나타내는 Aspergillus flavus 유래의 ${\beta}-tubulin$ 유전자를 갖는 pBRG-4 plasmid DNA를 polyethylene glycol 방법으로 형질 전환하였다. 이 형질전환은 pBRG-4 DNA $50\;{\mu}g$당 10개의 효율로 이루어졌으며, 그 결과 야생형 균주들의 $2.5\;{\mu}g/ml$ 농도의 benomyl 존재 하에서도 성장이 억제되는데 반하여 선발된 형질전환체들은 $5.0\;{\mu}g/ml$ 농도의 benomyl 함유 배지에서도 잘 성장하였다. 또한 이 형질전환체들의 chromosomal DNA를 분리하여 Southern 분석한 결과 ${\beta}-tubulin$ 유전자가 homologous recombination에 의하여 M. anisopliae의 genome속에 삽입 되었음을 확인하였다. We have established a transformation system for entomopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae, in order to develop mycoinsecticide by recombinant DNA techniques. Protoplasts of M. anisopliae would be transformed to a benomyl-resistant by introducing pBRG-4 plasmid DNA, which contains a ${\beta}-tubulin$ gene of Aspergillus flavus conferring resistance to benomyl and a pyr4 gene of Neurospora crassa, in the presence of 5% polyethylene glycol and 10 mM calcium chloride. Transformants occuring at a frequency of 10 colonies per $50\;{\mu}g$ pBRG-4 DNA grew on the $5\;{\mu}g/ml$ concentrations of benamyl, while the wild type was inhibited by $2.5\;{\mu}g/ml$. From the Southern analysis using genomic DNAs isolated from M. anisopliae transformants, the positive signals suggested that the ${\beta}-tubulin$ gene had integrated in the M. anisopliae genome by homologous recombination.

      • KCI등재

        벼 잎집무늬마름병의 발생정도에 따른 경제적 방제수준 설정

        심홍식(Hongsik Shim),최효원(Hyo Won Choi),예완해(Wan-Hae Yeh),이용환(Yong-Hwan Lee) 한국농약과학회 2015 농약과학회지 Vol.19 No.4

        연구는 잎집무늬마름병에 대한 약제방제수준을 설정하기 위하여 오대벼를 공시하여 시험을 수행하였다. 잎집무늬마름병 발병정도에 따라 수량에 미치는 관계를 분석하였으며, 수량 구성 요소인 주당 이삭수, 이삭당 립수, 등숙률, 천립중과의 관계를 분석하였다. 그 결과 발병주율에 대한 수량과의 관계는 r = -0.93, 이삭당 립수 r = -0.66, 등숙율은 r = -0.77로 고도의 유의성 있는 부의 상관이 있었으나, 주당 이삭수와 천립중은 유의한 상관이 인정되지 않았다. 따라서 본시험에서는 발병과 상관이 높은 수량에 대하여 경제적 방제수준은 발병주율 7.8%로 설정할 수 있었다. This research was performed to establish economic threshold (ET) for rice sheath blight disease with the cultivar Odeabyeo. Total yield and yield components, such as the panicle number per hill, the spikelet per panicle, the percent ripened grain and the thousand grain weight were evaluated depending on the disease severity of sheath blight on rice, respectively. Significant negative correlation between the percent of diseased hill (PDH) and total yield was observed (r = -0.93). Moreover, negative correlation coefficients were found between PDH and spikelet per panicle, and percent ripened grain (r = -0.66 and -0.77, respectively). There were no correlations between PDH and the panical number per hill, and a thousand grain weight, respectively. In this study, economic threshold level on sheath blight disease on rice was established on 7.8% of PDH.

      • KCI등재

        한국산 물벼룩 표준생태독성시험법 확립을 위한 10종 용매대조물질에 대한 독성반응 비교

        김병석(Byung-Seok Kim),박연기(Yoen-Ki Park),양유정(Yu-Jung Yang),홍순성(Soon-Sung Hong),박경훈(Kyung-Hun Park),정미혜(Mi-Hye Joeng),김세리(Se-Ri Kim),박경훈(Kyeong Hun Park),예완해(Wan-Hae Yeh),김두호(Doo-Ho Kim),윤종철(Jong-Chul Yun 한국농약과학회 2010 농약과학회지 Vol.14 No.1

        국내서식 물벼룩종을 이용한 표준생태독성시험법 개발을 위한 기초연구로서 4종의 한국산 물벼룩 Daphnia sp., Daphnia obtusa, Moina macrocopa, Simocephalus vetulus과 국제표준종 Daphnia magna대한 10종 유기용매에 대한 급성독성을 조사하여 독성이 낮으면서도 농약의 용해도가 좋은 유기용매를 시험에 사용하도록 제안하고자 하였다. 한국산 물벼룩에 대해 급성독성이 가장 강한 유기용매는 ethyl acetate로 조사되었으며 DMF, dioxane, isopropanol 3종은 무영향 농도가 EPA에서 급성독성시험에 추천하는 최고 사용농도인 0.5 ㎖/L 이하로 조사되어 다른 유기용매에 비해 독성이 강하였다. 따라서 독성이 낮으면서 수용해도가 높고 농약원제의 용해성이 좋은 acetone, methanol, ethanol, acetonitrile을 권장시험용매로 제안한다. Most pesticides are poorly soluble in water and must be dissolved in a solvent carrier before being added to the test medium on aquatic toxicity test. The concentration of solvent is critical to the success of a test. This study were conducted to recommend possible organic solvents which have good solubility for pesticides and low toxicity to Korean native water flea to establish new standard toxicity test methods using Korean native water flea for ecological risk assessment of pesticide. Four Korean freshwater cladocerans, Daphnia obtusa, Daphnia sp., Moina macrocopa and Simocephalus vetulus were exposed to 10 different organic solvents during 48 hours to evaluate their toxic response to solvents. Ethyl acetate was the most toxic to cladocerans tested. Although ethyl ether was the least toxic to cladocerans tested, it may not adequate as possible solvent in aquatic toxicity test due to high volatility and low water solubility. In conclusion, acetone, methanol, ethanol and acetonitrile which has low toxicity as well as good water solubility are recommended as optimal organic solvent to use in aquatic toxicity tests with Korean native cladocerans tested.

      • KCI등재

        2종의 수서곤충 Chironomus riparius와 Cloeon dipterum의 유충 성장단계별 molinate 급성독성 비교

        김병석(Byung-Seok Kim),박연기(Yoen-Ki Park),홍순성(Soon-Sung Hong),양유정(Yu-Jung Yang),박경훈(Kyung-Hun Park),정미혜(Mi-Hye Joeng),김세리(Se-Ri Kim),박경훈(Kyeong Hun Park),예완해(Wan-Hae Yeh),김두호(Doo-Ho Kim),홍무기(Moo-Ki Hong) 한국농약과학회 2009 농약과학회지 Vol.13 No.4

        우리나라에서 수도용제초제로 가장 광범위하게 사용되고 있는 molinate는 농약성수기에 하천수중 검출빈도가 매우 높게 나타나고 있는 농약 중의 하나이다. 본 연구에서는 molinate의 Chrinomus riparius(깔따구류)와 Cloeon dipterum(하루살이류)의 유충의 성장단계별 급성독성을 비교 조사하였다. C. riparius의 령기별 molinate의 급성독성을 비교한 결과 1령 유충의 48시간 EC50은 7.8 ㎎/L로 가장 감수성이 높았으며 2령 유충은 25.0 ㎎/L, 3령 유충은 22.9 ㎎/L로 나타나 2령과 3령의 감수성은 유사한 것으로 조사되었다. 4령 유충의 경우 48시간 EC50이 50 ㎎/L 이상으로 나타나 가장 감수성이 낮은 것으로 조사되었다. 하루살이(C. dipterum) 유충의 경우에도 제일 어린 유충 group의 감수성이 가장 민감한 것으로 조사되었으며 96시간 EC50은 14.3~24.1 ㎎/L범위였다. 결론적으로 수서곤충의 유충 령기별 독성 평가결과 가장 어린 개체가 가장 민감한 것으로 조사되어 독성 시험시 방법과 목적에 맞는 적절한 유충 성장단계를 선정해야 할 것으로 판단된다. 또한 농약의 수생태계 위해성 평가에서 우리나라 농수로에 서식하는 대표 수서곤충인 하루살이 유충의 활용 가능성을 제안하고자 한다. Molinate (S-ethyl hexahydro-1H-azepine-1-carbothioate), a selective, preemergence thiocarbamate herbicide used for grass weed control in rice fields, is being most widely used in Korea. This study was conducted to assess the comparative toxicity of molinate on two aquatic insects, Chironomus riparius and Cloeon dipterum in four larval stages. First-instar larvae of C. riparius appeared to be the most sensitive to acute exposure of molinate with a 48-h EC50 of 7.8 ㎎/L, followed by third instar (48-h EC50 = 22.9 ㎎/L), second instar (48-h EC50 = 25.0 ㎎/L) and fourth instar (48-h EC50 > 50 ㎎/L) larvae. Also, the sensitivity of the larvae of C. dipterum was presented as the same manner of the larvae of C. riparius. The youngest group of larvae of C. riparius appeared to be the most sensitive to molinate, with 96-h EC50 values ranged from 14.3 to 24.1 ㎎/L. The authors assume that the young instar lavae of aquatic insects, Chironomus riparius and Cloeon dipterum are more sensitive to molinate. Also, the authors propose that Mayfly, Cloeon dipterum is well suited as a bioassay organism because it is one of the most vulnerable aquatic insects inhabiting agricultural ecosystem in Korea.

      • SCIEKCI등재

        pBRG-4 를 이용한 Metarhizium anisopliae 의 형질전환

        이동규,강선철,예완해,권석태,황철원 한국농화학회 1998 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.41 No.3

        We have established a transformation system for entomopathogenic fungus, Metarhizium anisopliae, in order to develop mycoinsecticide by recombinant DNA techniques. Protoplasts of M. anisopliae would be transformed to a benomyl-resistant by introducing pBRG-4 plasmid DNA, which contains a β-tubulin gene of Aspergillus flavus conferring resistance to benomyl and a pyr4 gene of Neurospora crassa, in the presence of 5% polyethylene glycol and 10 mM calcium chloride. Transformants occuring at a frequency of 10 colonies per 50 ㎍ pBRG-4 DNA grew on the 5 ㎍/㎖ concentrations, of benamyl, while the wild type was inhibited by 2.5 ㎍/㎖. From the Southern analysis using genomic DNAs isolated from M. anisopliae transformants, the positive signals suggested that the β-tubulin gene had integrated in the M. anisopliae genome by homologous recombination.

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