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식용식물자원으로부터 활성물질의 탐색-XII. - 꽃마리(Trigonotis peduncularis Benth.)로부터 Flavonol 배당체의 분리 및 hACAT1 저해활성 -
양혜정,송명종,방면호,이진희,정인식,이윤형,정태숙,권병목,김성훈,김대근,박미현,백남인,Yang, Hye-Joung,Song, Myoung-Chong,Bang, Myun-Ho,Lee, Jin-Hee,Chung, In-Sik,Lee, Youn-Hyung,Jeong, Tae-Sook,Kwon, Byoung-Mog,Kim, Sung-Hoon,Kim, Dae-Keu 한국응용생명화학회 2005 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.48 No.1
꽃마리를 80% MeOH로 추출하고, 얻어진 추출물을 EtOAc, n-BuOH 및 $H_2O$로 용매 분획하였다. EtOAc와 n-BuOH 분획에 대하여 column chromatography를 반복하여 4종의 flavonol 배당체를 분리하였다. 각각에 대하여 2D-NMR을 포함한 스펙트럼 데이터의 해석과 문헌 자료를 조사하여 $kaempferol-3-O-{\beta}-{D}-glucopyranoside(astragalin),\;kaempferol-3-O-{\alpha}-{L}-rhamnopyranosyl(1{\rightarrow}6)-{\beta}-{D}-glucopyranoside(nicotiflorin),\;quercetin-3-O-{\alpha}-{L}-rhamnopyranosyl(1{\rightarrow}6)-{\beta}-{D}-glucopyranoside(rutin),\;quercetin-3-O-{\beta}-{D}-glucopyranoside(isoquercitrin)$로 구조를 결정하였다. 이 화합물들은 꽃마리에서는 이번에 처음 분리, 보고되었다. 또한 $nicotiflorin(100\;{\mu}g/ml)$은 hACAT1에 대하여 $68.3{\pm}1.2%$ 저해활성을 나타내었다. The MeOH extracts obtained from whole plant of Trigonotis peduncularis Benth. were solvent fractionated using EtOAc, n-BuOH and water, successively. The EtOAc and n-BuOH fractions gave four flavonol glycosides through application of silica gel and octadecyl silica gel (ODS) column chromatographies. The chemical structures of the flavonol glycosides were determined by the interpretation of several spectral data including 2D-NMR as $kaempferol-3-O-{\beta}-{D}-glucopyranoside\;(astragalin,\;1),\;kaempferol-3-O-{\alpha}-{L}-rhamnopyranosyl\;(1{\rightarrow}6)-{\beta}-{D}-glucopyranoside\;(nicotiflorin,\;2),\;quercetin-3-O-{\alpha}-{L}-rhamnopyranosyl(1{\rightarrow}6)-{\beta}-{D}-glucopyranoside\;(rutin,\;3),\;quercetin-3-O-{\beta}-{D}-glucopyranoside\;(isoquercitrin,\;4)$. The flavonoids have been first isolated from this plant. Nicotiflorin $(100\;{\mu}g/ml)$ showed $68.3{\pm}1.2%$ of the inhibitory effect on hACAT1(human Acyl CoA: cholesterol transferase 1) activity.
식용식물자원으로부터 활성물질의 탐색-12. 꽃마리(Trigonotis peduncularis Benth.)로부터 Flavonol 배당체의 분리 및 hACAT1 저해활성
양혜정 ( Hye Joung Yang ),송명종 ( Myoung Chong Song ),방면호 ( Myun Ho Bang ),이진희 ( Jin Hee Lee ),정인식 ( In Sik Chung ),이윤형 ( Youn Hyung Lee ),정태숙 ( Tae Sook Jeong ),권병목 ( Byoung Mog Kwon ),김성훈 ( Sung Hoon Kim 한국응용생명화학회 2005 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.48 No.1
저산소성 허혈성 뇌손상을 유발시킨 어린 백서에서 Myeloperoxidase 측정 검사
양혜정(Hae Joung Yang),피대훈(Dae Hun Pee),임지혜(Ji Hye Lim),최병민(Byung Min Choi),이기형(Kee Hyoung Lee),은백린(Baik-Lin Eun) 대한소아신경학회 2002 대한소아신경학회지 Vol.10 No.2
목 적 : 예전에는 뇌경색 부위에서 발견되는 백혈구를 단지 뇌손상에 뒤따르는 생리적인 반응으로만 생각하였으나 최근 10년 사이 재관류 손상에서도 백혈구에 의한 염증 작용이 중요한 역할을 한다고 알려지면서 이들의 역할에 대한 연구가 새롭게 이루어지고 있다. PML의 존재는 세포질내 과립에서 분비되는 MPO를 생화학적으로 측정함으로서 증명할 수 있는데 저자들은 미성숙 뇌에서 저산소성 허혈증에 의한 뇌손상이 발생할 때 백혈구가 침윤되는 과정을 MPO 측정 검사를 통하여 관찰하였고, P와 L-selectin 억제제인 Fucoidin을 투여한 후 MPO의 변화를 확인하였다. 방 법 : 생후 7일된 어린 흰쥐를 사용하여 우측총 경동맥을 전기 응고시켜 자르고 8% 산소에 노출시켰다. 저산소 노출 후 회복 시간에 따라 동물을 희생시키고 뇌를 추출하여 뇌조직 1 g당 10mL의 20 mM potassium Phosphate buffer(pH 7.4)를 첨가하여 50초간 분쇄하였다. 각각의 균질회된 조직 샘플들은 4℃에서 20분 동안 원심 분리하여 상층액을 제거한 후, 침전물은 처음 조직량에 따라 조직 1 g당 10 mL의 0.5% cetylditrimethylethyl ammonium bromide(wt/vol)가 첨가된 50 mM potassium phosphate buffer(pH 6.0)를 첨가하였다. Vortex를 이용하여 buffer와 침전물을 잘 섞고 60℃수조에서 120분 동안 방치하였다. 그 후 각 조직 샘플들을 4 watts에서 음파처리하고 4℃에서 15분 동안 원심 분리를 시행하여 상층액을 새로운 tube에 옮겼다. MPO 측정검사를 위한 MPO reaction buffer는 50 mM potassium phosphate buffer(pH 6.0) 100 mL에 0.53 mM odianisidine edihydrochlorde와 0.0005% HO를 섞어 만들었다. MPO reaction solution 2.9 mL에 각각의 MPO sample 0.1 mL을 첨가하여 460 nm의 파장에서 5분 동안 MPO에 다른 흡광도 차이를 관찰하였다. 결 과 : 조직내 백혈구 침윤의 지표로 측정한 MPO 활성도는 대조군에서는 미미하였으나 총 경동백을 절단한 우측 대뇌군에서는 허혈 및 저산소증 유발 후 8시간째부터 현저히 증가되기 시작하여 24시간 경과 후 발현이 가장 높았으며, Fucoidin 50 mg/kg으로 전처치한 약물 실험군에서는 MPO 활성도가 현저히 감소하였다. 결 론 : 백혈구는 미성숙 뇌의 저산소성 허혈증에 의한 뇌손상에서 중요한 매개체 역할을 하며, 백혈구의 생화학적 활성도를 나타내는 MPO 활성도는 저산소성 허혈성 뇌손상의 정도를 측정하는 지표로 이용될 수 있다고 생각된다. Purpose : Neutrophils found around an infarcted area in the brain was once considered as only the physiologic response following the brain injury, but recent studies have shown that inflammatory responses by neutrophils play an important role in the reperfusion injury. The presence of ploymorphonuclear leukocytes(PML) is proven by biochemical assay of myeloperoxidase(MPO) Secreted in the cytoplasmic granules. We observed the process of PML infiltration on hypoxic-ischemic brain injury of immature rats by the assay of MPO activity and changes of the MPO activity after the administration of fucoidin, inhibitor of P- and L-selectin. Methods : We used a well characterized model of the brains of 7 day-old-rats, which had unilateral hypoxic and ischemic injuries(HI). Those injuries were induced by unilateral carotid artery ligation followed by timed exposure to hypoxic inspiratory gas mixture(8% O). MPO activity was measured in the brain tissue homogenates of HI rats(n=18) at 0, 2, 8, 24 and 48 hrs and in rats that received fucoidin immediately before and again after hypoxia(50 mg/kg, n=6) at 8 and 24 hrs. Controls(n=2) were rats with neither hypoxia nor ischemia. The brain samples were homogenized in 20 mM potassium phosphate buffer(pH 7.4) for 50 secs. The homogenate was centrifuged at 14,000 g at 4℃ for 15 mins and the supernatant was discarded. The tissue was pulverized, weighed, and suspended in 1 mL of 50 mM potassium phosphate buffer solution(pH 6.0) contatining 0.5% cetylditrimethylammonium bromide(wt/vol). The tissue was sonicated and centrifuged at 10,000 g for 15 mins. 200 µL of the supernatant was mixed with 1 mL of 50 mM potassium phosphate buffer solution(pH 6.0) containing 10 μL of 1.325 mM o-dianisidine hydrochloride and 170 µL of 3% hydrogen peroxide(vol/vol). Changes in absorbance at 460 nm were measured for 5 mins by using microplate reader. One unit of MPO activity was defined as that degrading 1 µmol peroxide/min at 25℃, and the result was expressed as units of MPO/100 gm tissue. Results : In HI rats, MPO activity increased at 2 hrs after HI and peaked at 24 hrs in the right hemisphere. In rats with fucoidin treatment immediately before and again after hypoxia, the MPO activity significantly decreased in both hemispheres compared with HI rats(P<0.05). MPO activity in the tissue of control rats was insignificant. Conclusion : The dynamic changes of the MPO activity suggest the important role of PMN on hypoxic-ischemic brain injuries in immature rats. MPO activity could be used as an index of the severity of injuries of hypoxic-ischemic brains.
$2{\beta}$, $3{\alpha}$, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid처리에 의한 인간 간암세포주 HepG2의 apoptosis 유도
유기현,이종민,황보전,송명종,양혜정,백남인,김성훈,김대근,권병목,박미현,정인식,Yoo, Ki-Hyun,Lee, Jong-Min,HwangBo, Jeon,Song, Myoung-Chong,Yang, Hye-Joung,Baek, Nam-In,Kim, Soung-Hoon,Kim, Dae-Keun,Kwon, Byoung-Mok,Park, Mi-Hyun,Chung, 한국응용생명화학회 2006 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.49 No.4
Triterpenoid를 포함하고 있는 $2{\beta},\;3{\alpha}$, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid를 애기마름으로부터 분리하였다. 이것은 pentacyclic triterpenes의 공통 구조를 가지며 amyrin ursolic acid 그룹에 속해 있다. 본 연구에서는 이 화합물의 독성 영향을 인간 간암 세포주인 HepG2에서 조사하였다. $2{\beta},\;3{\alpha}$, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid는 처리한 양에 비례하여 HepG2 세포주에서 독성을 보였다. 그리고 Confocal microscopy 결과는 $2{\beta},\;3{\alpha}$, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid를 HepG2 세포에 처리한 시간에 비례하여 녹색 형광의 증가를 보여주었다. $2{\beta},\;3{\alpha}$, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid는 또한 HepG2 세포의 sub-G1 cell population 뿐만 아니라 DNA 분절(fragmentation) 현상의 증가를 보여 주었다. 이러한 결과는 $22{\beta},\;3{\alpha}$, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid가 HepG2 세포에서 apoptosis를 통한 세포 사멸 유도를 의미한다. [ $2{\beta},\;3{\alpha}$ ], 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid was isolated from Trapa pseudoincisa S. et Z. It has a common structure of pentacyclic triterpenes and belongs to the amyrin ursolic acid group. The cytotoxic effect of this compound was investigated in human hepatoma cell line HepG2. $2{\beta},\;3{\alpha}$, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid showed dose-dependent cytotoxicity in HepG2 cells. Confocal microscopy data showed that green fluorescence was increased in $2{\beta},\;3{\alpha}$, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid treated-HepG2 cells in a time-dependent manner. $2{\beta},\;3{\alpha}$, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid also increased the sub-G1 cell population of HepG2 cells as well as ladder-like DNA fragmentation. Taken together, our results indicate that $2{\beta},\;3{\alpha}$, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid induced apoptosis in HepG2 cells.
식용식물자원으로부터 활성물질의 탐색-XV. 머위(Petasites japonicus)잎으로부터 Triterpene 배당체의 분리
방면호,박진규,송명종,양혜정,유종수,안은미,김대근,백남인,Bang, Myun-Ho,Park, Jin-Kyu,Song, Myoung-Chong,Yang, Hye-Joung,Yoo, Jong-Su,Ahn, Eun-Mi,Kim, Dae-Keun,Baek, Nam-In 한국응용생명화학회 2005 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.48 No.4
머위 잎을 80% MeOH수용액으로 추출하고, 얻어진 추출물을 EtOAc, n-BuOH 및 $H_2O$로 용매 분획하였다. EtOAc 분획에 대하여 silica gel과 ODS column chromatography를 반복하여 2종의 triterpenoid 화합물을 분리하였다. 각 화합물은 $^1H-{^1H}$ gCOSY, gHMBC 및 gHSQC와 같은 2D-NMR기법을 포함한 스펙트럼 데이터를 해석하여 rosamutin(1) 및 peduncloside(2)로 구조를 결정하였다. The leaf of Petasites japonicus was extracted with 80% aqueous MeOH and solvent fractionated with EtOAc, n-BuOH and water successively. From the EtOAc fractions, two triterpenoids were isolated through the repeated silica gel and ODS column chromatographies. The chemical structures of the isolated terpenoids were determined as rosamutin (1) and peduncloside (2) through the interpretation of several spectral data including 2D-NMR such as $^1H-{^1H}$ gCOSY, gHSQC and gHMBC.
소아의 급성 설사에서 Lactobacillus Acidophilus의 치료 효과
한혜정,한혜정,이혜선,이인실,양혜정,Han, Hye Jung,Han, Hye Jung,Lee, Hye Sun,Lee, In Sil,Yang, Hae Joung 대한소아소화기영양학회 2004 Pediatric gastroenterology, hepatology & nutrition Vol.7 No.1
목 적: 급성 설사는 소아가 병원을 찾는 가장 흔하고 중요한 원인 중 하나이며 아직도 소아과 입원 원인 중 흔한 질환이다. 급성 설사를 효과적으로 치료하기 위하여 생균제가 거론되고 있는데 본 연구에서는 영유아를 포함한 소아의 급성 설사에서 생균제의 일종인 L. acidophilus를 투여하여 그 치료 효과에 대하여 알아보고자 하였다. 방 법: 2002년 9월부터 2003년 7월까지 국립 경찰병원 소아과에 설사를 주소로 내원한 3개월에서 5세 미만의 환아 중 하루 3회 이상의 묽은 변이나 물설사가 있었던 41명의 환아를 대상으로 하였다. 이 중 21명을 무작위로 추출하여 치료군으로 설정하고 L. acidophilus를 $0.5{\times}10^8$ colony forming unit (CFU)씩 하루 세 번 경구로 복용하게 하였으며 나머지 20명의 대조군은 위약을 동일한 방법으로 복용하게 하였다. 입원 후 의료진이 매일 설사 횟수를 조사하였고 설사 기간은 의료진에 의해 입원 당시부터 마지막 설사를 한 시점까지로 하였다. 결 과: 총 41명의 환아들이 참여하였고 입원 전의 치료군과 대조군 사이에는 임상소견의 통계적으로 유의한 차이는 없었으며 치료 시작 후 L. acidophilus를 투여한 군에서 설사 횟수의 감소(p=0.01)와 설사 기간이 유의하게 감소(p=0.001)하였다. 본 연구에서는 로타바이러스 양성인 환아에서 설사 기간의 감소에서는 유의한 차이를 보였으나(p=0.027) 설사 횟수는 통계학적으로 유의하게 감소하지 않았다(p=0.169). 로타바이러스 음성인 환아에서 L. acidophilus가 치료군에서 통계적으로 더 의미 있게 설사 기간을 감소시켰고(p=0.002) 설사 횟수 역시 감소함을 보였으나 통계적인 의의는 없었다(p=0.089). 결 론: 급성 설사가 있는 소아에서 L. acidophilus를 투여한 군에서 대조군보다 설사 횟수와 설사 기간이 의미 있게 줄어들어 치료에 도움이 되었고 향후 더 많은 연구가 필요할 것으로 사료된다. Purpose: Acute diarrhea in young children is a major problem in pediatric hospitals worldwide. We evaluated the clinical efficacy of orally administered Lactobacillus acidophilus in the treatment of acute diarrhea in children. Methods: From September 2002 to July 2003 at National Police Hospital 41 children aged 3 months to 5 years with acute diarrhea were enrolled in this study. The patients were randomized to one of two groups to receive either $0.5{\times}10^8$ colony forming unit (CFU) of L. acidophilus or matching placebo on admission and every 8 hours during hospitalization. Results: The mean duration of diarrhea in all 41 children was decreased (p=0.001) in the L. acidophilus (40.5 hours) group compared to the placebo (56.6 hours) group. Stool frequency was also reduced (p=0.01) on the 3rd day in the L. acidophilus group. Rotavirus was identified in 58% of the patients. The decrease of duration of diarrhea was more significant in rotavirus-negative patients (p=0.002) compared to the rotavirus-positive patients (p=0.027). Conclusion: L. acidophilus shows to be an effective therapeutic agent in acute diarrhea in children. Further studies are needed to confirm the present findings.
춘란(Cymbidiym goeringii REICHB. fil)의 메탄올 추출물로부터 Sterol 화합물의 분리
이진희 ( Jin Hee Lee ),김동현 ( Dong Hyun Kim ),방면호 ( Myun Ho Bang ),양혜정 ( Hye Joung Yang ),방성훈 ( Sung Hoon Bang ),정인식 ( In Sik Chung ),권병목 ( Byoung Mog Kwon ),김성훈 ( Sung Hoon Kim ),김대근 ( Dae Keun Kim ),박미현 한국응용생명화학회 2005 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.48 No.3
식용식물자원으로부터 활성물질의 탐색-15. 머위(petasites japonicus)잎으로부터 Triterpene 배당체의 분리
방면호 ( Myun Ho Bang ),박진규 ( Jin Kyu Park ),송명종 ( Myoung Chong Song ),양혜정 ( Hye Joung Yang ),유종수 ( Jong Su Yoo ),안은미 ( Eun Mi Ahn ),김대근 ( Dae Keun Kim ),백남인 ( Nam In Baek ) 한국응용생명화학회 2005 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.48 No.4
미생물,발효,생물공학 : 2β, 3α, 23-trihydroxyrus-12-ene-28-oic acid 처리에 의한 인간 간암세포주 HepG2의 apoptosis 유도
유기현 ( Ki Hyun Yoo ),이종민 ( Jong Min Lee ),황보전 ( Jeon Hwangbo ),송명종 ( Myoung Chong Song ),양혜정 ( Hye Joung Yang ),백남인 ( Nam In Baek ),김성훈 ( Soung Hoon Kim ),김대근 ( Dae Keun Kim ),권병목 ( Byoung Mok Kwon ),박 한국응용생명화학회 2006 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.49 No.4