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      • klebsiella oxytoca의 nif A 遺傳子 鹽基配列과 遺傳子 産物의 특징에 대하여

        安慶濬 西原大學校 1986 西原大學 論文集 Vol.17 No.-

        Klebsiella oxytoca NG13 is nitrogen fixer in the rhizosphere of rice. A DNA fragment containing nifA gene and partial nifL and nif B genes was cloned and its total nucleotide sequence was determined. The reading frame for nifA was confirmed by the in vitro transcription and translation of the plasmid pNOAl containing the native nifA gene and the derivative plasmids (pNOA2, pNOA3 and pNOA4) containing various deletions of the nif A gene. The nif A protein was coded by an open reading frame of 1572 base pairs (524 amino acids ) and expected molecular weight of nif A gene product was 58.6 Kd. There was no promoter region between nifL and nifA , and the first and second letters of nifL termination codon (TGA) overlapped with nifA initiation codon (ATG). In front of nifB coding region, a nif-specific consensus promoter sequence identical with that of K. pneumoniae,-CTGG--------TTGCA-, was found. Acetylene reduction assay showed that the gene products of the nifA deletion derivatives failed to express nif functions.

      • 미호천 일대에서의 난분해성 방향족 화합물 분해세균의 분리와 동정

        안경준 西原大學校 基礎科學硏究所 1991 基礎科學硏究論叢 Vol.5 No.-

        미호천 일대에서 채취된 시료로부터 방향족화합물 분해능을 보이는 25균주를 분리하여 동정하였으며, 각종 방향족 화합물에 대한 분해능과 항생제 내성을 조사하였다. 25균주 중 24균주가 Gram음성이였으며, 2균주는 구균이었고, 나머지는 간균이었다. 동정 실험결과 Pseudomonas 속 7균주는 , Alcaligenes속과 Acinetovacter속 4균주, Yursinia속 2균주, 그리고 Flavobacterium, Enterobacter, Klebsie,Bacillus속 각 1균주씩으로 동정되었다. 사용된 방향족 화합물 중 Benzyl alcohol과 Benzoic acid가 가장 잘 이용되었으며, Salicylic acid 와 Phenoxyacetic acid의 이용은 제한적이었다. 분리된 모든 균주가 1가지 이상의 항생제에 대하여 내성을 보였으며, 80%의 균주들이 2가지 이상의 내성을 보였고, 4가지 이상의 항생제에 대해 내성을 보인 균주도 40%를 차지하고 있었으며, 균주 D-13은 사용된 모든 항생제에 대하여 내성을 나타내었다. Aromatic compound degrading 25 bacteria strains were isolated from Miho-stream and identified. Almost of the strains were Gram negative rods. 7 strains were classified into Genus Pseudomonas, 4 strains were Acinetobacter, 2 strains were Yersinia, 1 strain of each Genus Flavobacterium, Enterobacter,Klebsiella, and Bacillus were identified. These strains commonly used Benzyl alcohol and Benzoic acid, but not Salicylic acid and Phenoxyacetic acid. All of strains had antibiotic resistance, 80% of them had more than 2 kinds of resistance, 40% of them had more than 4 kinds of resistance, and strain D-13 was resistant to all of the antibiotics used.

      • 窒素固定하는 Bacillus polymyxa의 生理的 性狀에 관한 연구

        安慶濬 西原大學校 1990 西原大學 論文集 Vol.25 No.-

        Bacillus polymyxa ATCC 12321菌의 生理的 成狀을 조사한 결과 다음과 같았다. 1. 無窒素培地에서 粘液質을 生産하면서 colony를 이루어 성장하였다. 2. 최적 생육 온도는 30℃이며, 培地에 糖과 buffer 成分이 첨가되면 성장이 촉진되었다. 3. Kanamycin, Streptomycin, Tetracycline에 대한 耐性 因子와 窒素固定 遺傳子는 染色體에 존재하고 있었다. 4. mitomycin-C 처리에 의하여 溶菌이 誘導되었다. Physiological characteristics of Bacillus polymyxa ATCC 12321 were studied. The results were as follows. 1. In anaerobic condition, the strain produced mucous colony on the nitrogen free medium. 2. The growth was optimal at 30℃ and was accelerated by the addition of glucose or buffering clemicals to the medium. 3. The genes fro the resistance to antibiotics, kanamycin, streptomycin and tetracycline, and the genes for nitrogen fixation were locatd in the main chromosome. 4. The lytic system was induced by the treatment of mitomycin-C.

      • CAS Assay 및 Csaky Test를 이용한 Aerobactin 생산 확인

        안경준 西原大學校 基礎科學硏究所 1997 基礎科學硏究論叢 Vol.11 No.-

        E. coli N1 균주의 aerobactin 생산을 조사하기 위해 CAS assay와 Csaky test를 실시한 결과는 다음과 같다. N1 균주는 생장이 개시된 후 약 4시간 정도 늦게 aerobactin을 생산하였다. 철의 농도가 제한적이고 중성에서 약산성의 환경에서 많은 aerobactin 생산을 나타내었다. Hydroxylamine 표준곡선에 의하면, hydroxamate의 가수분해 결과 생성된 hydroxylamine 생산량은 0.1mM 정도였다. The results of study on the aerobactin production in E. coli N1 were as follows. N1 strain showed production of areobactin as a siderophore about 4 hours later than the start of the growth. In the culture condition of limited iron and pH of neutral and weak acid, much amount of aerobactin was produced. According to the hydroxylamine standard curve, the amount of hydroxylamine produced by hydrolysis of hydroxamate was about 0.1 mM.

      • Pseudomonas PS균주의 특성과 항생 물질 생산

        안경준 西原大學校 基礎科學硏究所 2003 基礎科學硏究論叢 Vol.17 No.-

        Pseudomonas 속의 PS 균주가 생산하는 항생물질은 주로 Gram양성 세균의 생장을 억제하였다. 그리고 항생물질은 혐기적으로 배양한 균 배양액에서 검출됐으며, glucose를 0.5% 첨가했을 때 가장 효과적으로 생산되었다. 항생물질의 생산은 배양 개시 후 24시간, pH 7, 30℃에서 배양액의 부피를 100㎖로 조절했을 때 최대를 보였으며, 균체의 생장도 가장 많이 일어났다. 대상 균주의 접종량은 항생물질의 효과에 큰 영향을 끼치지 못하며, 항생물질을 2배, 5배, 10배로 농축했을 때 그 효과가 농축에 대해 비례하여 커진다는 것을 확인하였다. 항생물질이 세균을 죽이는 작용을 한다는 것은 항생물질을 대장균 배양액에 처리하여 30℃에서 배양하면서 생균수를 조사하여 알 수 있었다. 항생물질의 보관온도에 따른 효과를 보면 4℃, -20℃에서 효과가 지속된다는 것을 통해 저온 보관이 필수적임을 알 수 있었다. 위의 연구들을 통해 PS균주가 생산하는 항생물질은 작용범위와 생산 양상으로 보아 mupirocin일 것으로 추정된다. The substance produced by Pseudomonas PS strain was showed a high level of antibiotic activity against the Gram negative bacteria. The antibiotic substance was detected in anaerobic culture broth. The PS strain produced the largest amount of antibiotic substance when the culture was continues 24 hours in the medium of pH 7.0 with 0.5% glucose, and broth volume of 100㎖. The inoculum size of test strain showed no effect on the antibiotic activity. According to the concentration of antibiotic, activity increased proportionally. The antibiotic demonstrated bactericidal activity to the test strain. The antibiotic activity was maintained when the sample was stored in 4℃ or -20℃. Because antibiotic activity range and the production pattern was similar to the mupirocin, the antibiotic produced by the PS strain was expected as mupirocin.

      • 플라스미드 pKSI의 BamH I 및 Sal I 제한효소 지도 작성

        안경준 西原大學校 基礎科學硏究所 1996 基礎科學硏究論叢 Vol.10 No.-

        Klebsiella pneumoniae KU16 균주가 갖고 있는 플라스미드 pKS1의 BamH Ⅰ 및 Sal Ⅰ 제한효소 지도를 작성하였다. pKS1의 모든 부분이 삽입되어 있는 재조합 플라스미드를 제한효소 BamH Ⅰ, Bgl Ⅱ, EcoR Ⅰ, Hind Ⅲ, Nhe Ⅰ, Sal Ⅰ, Xba Ⅰ으로 처리하였다. 14 군데의 BamH Ⅰ 제한효소 위치와 9 군데의 Sal Ⅰ 제한효소 위치가 확인 되었으며, 절편들의 크기는 전기영동에 의해 측정된 크기와 거의 일치하였고, 새로운 2.6kb, 1.8kb, 1.5kb의 BamH Ⅰ 절편과 1.9kb의 Sal Ⅰ 절편이 추가로 발견되었다. BamH Ⅰ and Sal Ⅰ restriction enzyme map of plasmid pKS1 of Klebsiella pneumoniae was constructed. Recombinant plasmids containing all fragments of pKS1 were applied for restriction mapping, and restriction enzymes BamH Ⅰ, Bgl Ⅱ, EcoR Ⅰ, Hind Ⅲ, Nhe Ⅰ, Sal Ⅰ and Xba Ⅰ Were used for digestion of plasmid DNA. The number of BamH I and Sal I restiction site identified were 9 and 14, respectively. And the calculated size of each fragments were in full accord with observed size in electrophoresis. The new small 3 fragments of pKS1, 2.6kb, 1.8kb, and 1.5kb digested by BamH Ⅰ and 1 fragment of 1.9kb by Sal Ⅰ were found.

      • Klebsiella pnewmoniae KU16의 플라스미드 pKS1에서 siderophore 생산유전자의 확인

        안경준 西原大學校 基礎科學硏九所 1994 基礎科學硏究論叢 Vol.8 No.-

        The presence of siderophore-producing genes was identified in the plasmid pKS1 of Klebsiella pneumoniae KU16 which showed vigorous degradability of aromatic compounds in iron deprived minimal medium. The plasmid pKS1 of K. pneumoniae KU16 was stable to the curing agents such as mitomycin C, SDS, and acridine orange, but the curing was done by combined treatment of heating and UV irradiation. The difference of growth patterns between KU16 and its cured strain KU16-7 was the most obvious when these strains were cultured in the minimal medium contained benzoate as a carbon source and deprived iron by treatment of EDTA as a chelating agent. But the difference was minor when transferrin was used as a chelating agent. The KU16 was sensitive to cloacin but not its cured strain KU16-7, which indicate that the siderophore produced by KU16 was aerobactin. The plasmid pKS1 harboring another strain, KU16-2 could not produce capsule. This KU16-2 strain was resistant to cloacin, which showed that the capsule was essential to the action of aerobactin.

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